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1.
为研究不同浓度亚硒酸钠对猪骨骼肌卫星细胞增殖分化以及硒蛋白W(Selenoprotein W,SelW)和硒结合蛋白1(Selenium-binding protein 1,SBP1)表达的影响。分别在0（对照组）、0.02(0.02%组)、0.1(0.1%组)、0.5(0.5%组)、2.5μg/mL(2.5%组)亚硒酸钠浓度的培养基条件下培养骨骼肌卫星细胞,在第1、2、3、4天观察细胞增殖分化情况,分别在第1、3、5、7天收集处理后的细胞。提取上述收集细胞的mRNA,检测SelW和SBP1基因表达。结果表明：1）从第1天到第4天,0.02%组、0.1%组、0.5%组细胞增殖与对照组相似,其中以0.1%组与对照组最接近。然而,2.5%组在第3天后降低了细胞数量,细胞出现大量死亡。2）不同浓度亚硒酸钠对SelW的表达在第3天影响最大,随着亚硒酸钠浓度增加呈现先增加后降低的趋势。第3天数据表明,与对照组相比,0.02%组、0.1%组、0.5%组和2.5%组均显著增加SelW的mRNA表达量,且0.1%组和0.5%的表达量显著高于0.02%组和2.5%组（P<0.05）。不同浓度亚硒酸... 相似文献
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试验旨在优化硒蛋白W(selenoprotein W,SelW)的原核表达系统,并评估SelW的免疫原性和基于IgY抗体检测猪体内SelW的可行性。将获得的猪SelW基因序列密码子进行优化、合成并连接至pET-32a(+)表达载体中,构建原核表达重组质粒pET32a(+)-SelW,转化E.coli BL21(DE3)宿主菌中,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定重组猪SelW的表达情况,并免疫产蛋鸡制备抗SelW的IgY多克隆抗体,通过间接ELISA检测IgY抗体滴度,采用Western blotting检测IgY识别抗原的特异性。SDS-PAGE结果显示,SelW基因在原核细胞中成功表达,得到了大小约为33 ku的重组蛋白,IPTG最佳诱导浓度及时间分别为0.5 mmol/L和6 h;可溶性分析结果显示,重组蛋白SelW主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测结果显示,免疫后45 d的IgY多克隆抗体的效价可达1∶51 200。Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IgY抗体与SelW的亲和力较高。本试验成功构建并优化了SelW蛋白的原核表达系统,提高了SelW蛋白的表达量,获得了具有良好免疫原性的SelW蛋白,制备的IgY抗体能特异性识别猪肌肉组织中的SelW,可用于检测猪组织中SelW的表达、预防硒中毒和缺硒性疾病的监测等,为进一步探究SelW的生物学功能奠定基础。 相似文献
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试验旨在优化硒蛋白W （selenoprotein W，SelW）的原核表达系统，并评估SelW的免疫原性和基于IgY抗体检测猪体内SelW的可行性。将获得的猪SelW基因序列密码子进行优化、合成并连接至pET-32a （+）表达载体中，构建原核表达重组质粒pET32a （+）-SelW，转化E.coli BL21（DE3）宿主菌中，进行IPTG诱导表达，SDS-PAGE鉴定重组猪SelW的表达情况，并免疫产蛋鸡制备抗SelW的IgY多克隆抗体，通过间接ELISA检测IgY抗体滴度，采用Western blotting检测IgY识别抗原的特异性。SDS-PAGE结果显示，SelW基因在原核细胞中成功表达，得到了大小约为33 ku的重组蛋白，IPTG最佳诱导浓度及时间分别为0.5 mmol/L和6 h；可溶性分析结果显示，重组蛋白SelW主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测结果显示，免疫后45 d的IgY多克隆抗体的效价可达1：51 200。Western blotting检测结果显示，重组蛋白具有良好的免疫原性，所制备的IgY抗体与SelW的亲和力较高。本试验成功构建并优化了SelW蛋白的原核表达系统，提高了SelW蛋白的表达量，获得了具有良好免疫原性的SelW蛋白，制备的IgY抗体能特异性识别猪肌肉组织中的SelW，可用于检测猪组织中SelW的表达、预防硒中毒和缺硒性疾病的监测等，为进一步探究SelW的生物学功能奠定基础。 相似文献
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本试验旨在研究谷胱甘肽过氧化物酶6（glutathione peroxidase 6,GPx6）在大白公猪附睾细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。选取15月龄的公猪和母猪各3头,取睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精囊腺、卵巢和输卵管,提取蛋白,通过蛋白免疫印迹和免疫组化（IHC）检测组织和细胞中GPx6蛋白的表达和定位;根据评定大白公猪受精能力的数学模型,按照公猪配种胎次≥20胎、3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集符合要求的20头公猪精液,同时,统计相对应的1 279头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标（包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力）。提取精子蛋白和精清蛋白,通过BCA和ELISA检测精子和精清中GPx6蛋白的含量。使用SPSS软件的独立样本t检验及单因素方差分析（one-way ANOVA）,进行差异显著性分析,用双变量Pearson进行相关性分析,P<0.05表示差异或相关显著。结果表明,GPx6蛋白在附睾中高表达,IHC结果显示,GPx6蛋白在附睾的顶细胞、基底细胞、晕细胞、主细胞和精子中表达,在肌样细胞中不表达;精清蛋白中GPx6的含量是精子蛋白的7倍,精液中GPx6蛋白的含量与窝产活仔数、窝产总仔数呈负相关关系。结果提示,GPx6在附睾的顶细胞、基底细胞、晕细胞、主细胞和精子中表达,且其在精液中的含量会影响公猪的繁殖性能,这为GPx6对公猪受精能力影响的研究奠定了理论和试验基础。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2020,(2)
本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调(P0.01);细胞外基质中纤连蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)含量均极显著增加(P0.01)。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞(P0.01);Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。 相似文献
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试验旨在研究还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）对氟中毒小鼠附睾的影响。将50只3周龄ICR雄性小鼠随机分为5组,分别为对照组和4组染氟组。对照组饮用蒸馏水,染氟组分别供给含100 mg/L NaF的蒸馏水,自由饮水30 d。之后在染氟组中选择3组每日分别灌胃200、400和800 mg/（kg·只）GSH,同时各组小鼠再自由饮含氟水30 d。试验结束后,摘取小鼠附睾进行活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、GSH含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）和谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测,同时制作石蜡切片,HE染色后进行组织形态结构分析。结果显示,与对照组相比,100 mg/L NaF组精子密度、精子活力、GSH含量、GPx和GR活性均显著下降（P<0.05）,而GSH添加组较100 mg/L NaF组均有所升高;100 mg/L NaF组精子畸形率、ROS和MDA含量较对照组均显著升高（P<0.05）,而GSH添加组较100 mg/L NaF组均降低,其中800 mg/kg GSH组效果明显。与对照组相比,100 mg/L NaF组附睾头、附睾体及附睾尾管腔厚度升高,管腔内精子数量下降;GSH添加组附睾头、附睾体及附睾尾的管腔厚度与管腔内精子数量都有所恢复,其中800 mg/kg GSH组效果较好。综上所述,添加GSH后氟中毒小鼠谷胱甘肽抗氧化系统酶活性有所升高,附睾组织形态结构一定程度上有所恢复,对附睾有一定的改善作用。 相似文献
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宿主的Synaptogyrin-2(SYNGR2)蛋白影响猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的感染能力。本研究旨在研究宿主因子SYNGR2对PCV2在细胞水平增殖的影响，并进一步对SYNGR2影响PCV2体外增殖的机制进行探究。本研究利用基因敲除、过表达、定点突变等手段，在PK15细胞上研究SYNGR2基因敲除及其p.Arg63Cys点突变对PCV2增殖的影响。为探究SYNGR2参与PCV2感染的具体机制，作者对SYNGR2基因敲除的细胞及野生型对照细胞进行转录组测序，筛选SYNGR2功能相关的基因及通路，根据差异表达基因进行表达模式聚类分析，并通过实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)验证差异表达基因的表达情况。结果显示，SYNGR2基因敲除或p.Arg63Cys点突变显著降低PCV2对PK15细胞的感染能力，对敲除细胞过表达不同基因型的SYNGR2,PCV2的增殖能力均恢复。转录组差异表达基因分析结果显示，SYNGR2的功能主要是参与膜成分及囊泡等被膜细胞器的组成。对差异表达基因肌球蛋白VIIA与Rab互作蛋白(... 相似文献
8.
为探究硒对铝诱导小鼠脾脏氧化应激和炎症反应的颉颃作用机制,试验设4组：空白对照组、铝中毒组、硒对照组、硒＋铝组,各组小鼠灌胃给药处理4周后取脾脏组织。通过观察病理组织HE染色切片及免疫荧光染色切片来评价脾脏组织病理学变化;检测小鼠脾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量的变化;以实时荧光定量PCR检测脾脏组织中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-4、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）、血红素氧合酶1（HO-1）和NF-κB mRNA的表达水平;用Western blotting法检测脾脏组织中p-p65、IL-1β和HO-1蛋白表达水平。结果显示,铝处理后可使脾脏局部细胞间距增大,淋巴细胞减少,并伴有红细胞浸润,中性粒细胞增多,降低脾脏组织中GPx活性及NO和GSH的含量,导致MDA积累,IL-1β和NF-κB等炎症相关基因mRNA及蛋白表达水平升高,表现出对脾脏的氧化损伤和炎症反应;硒的加入可缓解铝的毒性作用,提高GPx活性及其他抗氧化物质的含量,降低脂质过氧化物MDA生成及炎症相关基因mRNA和蛋白的表达水平。本试验结果表明,铝能通过诱发小鼠氧化应激及炎症反应损伤脾脏,硒能缓解铝诱导的小鼠脾脏损伤,其机制可能与硒增强了脾脏的抗氧化水平有关。 相似文献
9.
研究RNA干扰（RNA interference,RNAi）表达载体对UCP基因的抑制作用。针对鸡解耦联蛋白（avianuncoupling protein,av UCP）基因,构建4种RNAi质粒表达载体（分别称为A、B、C和D号载体）。再经过脂质体法转染成肌纤维细胞,应用荧光定量PCR及流式细胞术检测其对av UCP mRNA及蛋白表达的影响。构建的4种表达载体均抑制了av UCP的mRNA及蛋白的表达,其中转染C号载体的成肌纤维细胞av UCPmRNA表达相当于空白对照组的14.6%,蛋白抑制率达93.7%。RNAi表达载体可以有效的抑制avUCP基因的表达。 相似文献
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本研究旨在揭示肌抑素（MSTN）与基质金属蛋白酶（MMPs）的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系：单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调（P < 0.01）;细胞外基质中纤连蛋白（FN）和层连接蛋白（LN）含量均极显著增加（P < 0.01）。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞（P < 0.01）;Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。 相似文献