李痘病毒单克隆抗体及TAS-ELISA试剂盒的研制     

马洁  魏梅生  粟智平  李桂芬 《植物检疫》2012,(2):9-12

将纯化的李痘病毒(Plum pox virus,PPV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经李痘病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出2株稳定分泌李痘病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株3F1,7A8。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定分别为IgG1、IgG3。间接ELISA方法测定腹水效价分别为3F1:1.0×106,7A8:1.0×105。以多克隆抗体为包被抗体、单克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA试剂盒与李痘病毒的D株系、M株系的病毒分离物均有反应,与同属的马铃薯A病毒、莴苣花叶病毒、西瓜花叶病毒2号、马铃薯Y病毒坏死株系不发生交叉反应。  相似文献   

番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测     

李桂芬  马洁  魏梅生  朱水芳 《植物检疫》2009,23(6)

将纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)制剂免疫BALB/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株分泌ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为1H8、1D4.用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG1亚类.间接ELISA效价测定结果1H8为1:105,1D4为1:106.TAS-ELISA实验结果表明此2株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的从德国引进的番茄环斑病毒分离物、从美国ATCC引进的番茄环斑病毒分离物PV-100、PV-174、PV-239发生特异性反应,而不与同属其它3种病毒:烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)发生反应.  相似文献   

黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制   总被引：2，自引：0，他引：2  

李桂芬  曹振  马杰  李明福  陈笑瑜  丁建云  李娜 《植物保护》2009,35(6):40-42

将纯化的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)制剂免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了3株分泌CGMMV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3C9,3F7,2G10。用ELISA方法对所获得的3个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG2a,kappa链。 间接ELISA效价测定结果分别为3C9：1.024×107,3F7：2.56×106,2G10：1.28×106。此3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的其他3种不同的CGMMV分离物发生特异性反应,而不与其他3种同属成员病毒 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)、齿瓣兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV) 发生反应。  相似文献   

番茄溃疡病菌单克隆抗体的制备与鉴定     

孔君  刘箐  韩跃武  刘金芝  朱小清  席国雄 《植物检疫》2011,(4)

为制备并鉴定番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)的单克隆抗体(McAbs),用全菌皮下免疫BALB/C小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、间接ELISA筛选和克隆等,获得稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,得到了抗番茄溃疡病菌的单克隆抗体。经免疫后获得3株单抗分别为1A4、1C3和1B7,经亚类鉴定分别是IgM、IgG1、IgG1;纯化腹水间接ELISA效价分别为1:3.2×106、1:8.1×105、1:3.2×106;与其他同属不同亚种无交叉反应。结果表明:3株单克隆抗体均具有较高特异性和敏感性,可作为番茄溃疡病菌的检测抗体,其中,1A4的效果最好。番茄溃疡病菌单克隆抗体的获得为进一步研发番茄溃疡病检测试剂盒奠定了基础。  相似文献   

香石竹斑驳病毒单克隆抗体的制备及检测应用     

吴建祥  王贵珍  洪健  张仲凯  周雪平 《植物病理学报》2005,35(4):322-326

 用香石竹斑驳病毒(CarMV)免疫的BALB/c鼠脾细胞与Sp2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得5株能稳定传代且分泌抗CarMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞,并分别制备它们的单克隆抗体腹水。5株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-6,其中3G1、1B9、2A9和2F8的抗体类型及亚类均为IgG1,而2F₂为IgG3。Western-blot分析表明,5株单克隆抗体均与CarMV 38 kD的外壳蛋白亚基有特异性反应。利用2A9单抗建立的抗原包被的间接ELISA (ACP-ELISA)检测CarMV方法,病叶1:800倍稀释、提纯CarMV病毒浓度为1 ng/mL (绝对检测量为0.1 ng)时仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA对田间香石竹样品的检测表明,CarMV在香石竹上发病很普遍。  相似文献   

南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒的单抗制备及其检测应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘欢  倪跃群  饶黎霞  吴建祥  周雪平 《植物病理学报》2013,43(1):27-34

 用与牛血清白蛋白偶联的南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）衣壳蛋白的C端12个氨基酸多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗SRBSDV和水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV）单克隆抗体（MAb）的杂交瘤细胞株3F1、5G1。3F1、5G1单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-6,抗体类型及亚类均为IgG1, kappa链。 Western blot分析表明,2株单克隆抗体均与SRBSDV和RBSDV的外壳蛋白亚基有特异反应。利用单克隆抗体3F1建立的dot-ELISA检测方法能准确、特异、灵敏地检测田间稻飞虱及水稻样品中的SRBSDV和RBSDV。SRBSDV和RBSDV单克隆抗体的制备及检测方法的建立为水稻黑条矮缩病的诊断、预测预报及科学防控提供了技术支撑。  相似文献   

甘薯潜隐病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定     

乔奇  张振臣  秦艳红  张德胜  田雨婷  王爽  王永江 《植物病理学报》2017,47(2):240-245

以原核表达的甘薯潜隐病毒(SPLV)的外壳蛋白(CP)为抗原免疫小鼠,经过细胞融合和亚克隆,筛选出2株稳定分泌抗SPLV CP的单克隆抗体杂交瘤细胞株(5B11-2和5G8-2),并分别制备了单克隆抗体腹水。间接ELISA结果表明,用SPLV CP包被酶联板,5B11-2和5G8-2单克隆抗体的效价均为1∶512 000;用感染SPLV的甘薯叶片汁液包被酶联板,2株单克隆抗体的效价均为1∶6 400。抗体类型及亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体均为IgG1、κ轻链。Western blot分析表明,2株单抗均能与SPLV CP和感染SPLV的甘薯叶片汁液有特异性反应。利用单克隆抗体建立的间接抗原包被ELISA(ACP-ELISA)检测SPLV方法,病叶1∶3 840倍稀释仍能检测到病毒。血清学和RT-PCR检测结果表明,制备的单克隆抗体可用于田间甘薯样品的检测。  相似文献   

用于检测马铃薯X病毒HB株系的单克隆抗体的研制   总被引：1，自引：0，他引：1  

李汝刚  刘佳 《植物病理学报》1993,23(1):5-9

 经诱导耐受性免疫、细胞融合及克隆化培养,建立了2类6株稳定分泌抗马铃薯X病毒(PVX)株系特异性高滴度的单克隆抗体(McAb)小鼠杂交瘤细胞系。间接DAS-ELISA测定表明:Ⅰ类细胞系(1-6G8,1-7E8,2-5G9)分泌的抗体只与PVX-HB和PVX-c反应,Ⅱ类细胞系(1-6F1,1-9C11,1-9C8)分泌的抗体与测试的5个株系均有反应,但当用病毒直接包被ELISA板时,Ⅲ类抗体同PVX-C不产生反应。因此将两类单克隆抗体配合使用可鉴别诊断PVX-HB株系。用辣根过氧化物酶(HRP)对McAb1-7E8进行了标记并成功地以DAS-ELISA法检测。这两类能鉴别诊断PVX-HB株系的抗体对马铃薯抗病品种的选育、无病毒种薯的生产及进口种苗的检测都是相当有用的试剂。  相似文献   

大豆花叶病毒单克隆抗体(SMV-McAb)的研究     

郭景荣  陈永萱 《植物病理学报》1990,20(2):131-133

 用大豆花叶病毒免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sq2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗大豆花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,S-1、S-2和S-3。它们的鼠腹水滴度高达1:10⁷,能被大豆花叶病毒兔抗血清所阻断。单克隆抗体与其它三种植物病毒不起反应,对大豆花叶病毒的不同株系有特异性差异。  相似文献   

水稻条纹病毒单克隆抗体的制备及检测应用   总被引：15，自引：0，他引：15  

王贵珍  周益军  陈正贤  周雪平 《植物病理学报》2004,34(4):302-306

 用水稻条纹病毒(RSV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代且分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞。各株单抗腹水的ELISA效价均在1:80000~1:5120000之间。Westernblot分析表明,4株单抗均与RSV的35kDa的外壳蛋白亚基有特异反应。建立了间接ELISA测定RSV的方法,4株单抗检测病汁液的稀释度能达到2560倍以上,与其它病毒无交叉反应。对江苏省部分县市的大田灰飞虱带毒率进行检测,结果显示灰飞虱的带毒率为12.5%~41.5%  相似文献   

Establishment of a relationship between grapevine leafroll closteroviruses 1 and 3 by use of monoclonal antibodies     

Seddas  Haidar  Greif  Jacquet  Cloquemin  & Walter 《Plant pathology》2000,49(1):80-85

Five stable hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (Mabs) specific for GLRaV-1, one of the agents involved in the aetiology of grapevine leafroll disease, were produced by fusing a nonsecreting myeloma cell line with spleen cells from BALB/c mice immunized with purified GLRaV-1. The Mabs were characterized for their recognition of virus coat protein by DAS-ELISA and Western blotting. Mab (1G10) reacted specifically in ELISA, immuno-electron microscopy and immunoblotting with both GLRaV-1 and GLRaV-3 coat proteins. Mab 1C4 detected 25 of the 33 GLRaV-1 isolates, while Mab 1B7 reacted with 32 isolates including the eight isolates not recognized by Mab 1C4. Two of these hybridoma lines (2F11 and 2F3) are now used routinely for the immunodiagnosis of GLRaV-1.  相似文献   

马铃薯Y病毒属三种病毒通用型单克隆抗体的鉴定   总被引：3，自引：0，他引：3  

尤晴  李小宇  张春雨  张淋淋  宋景荣  王永志  李启云 《植物保护》2016,42(6):76-79

构建了马铃薯Y病毒属的大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,CLYVV)的原核表达载体pET28-SMV CP、pET28-PVY CP和pET28-CLYVV CP,经IPTG诱导、表达和纯化,获得SMV、PVY和CLYVV的CP蛋白。采用ELISA方法,用9株实验室制备的单克隆抗体对含SMV、PVY、CLYVV的病毒汁液和纯化的重组CP蛋白进行检测分析。结果表明,9株单克隆抗体均识别SMV病毒,2D3、4F9、4G12和6E7单克隆抗体能够识别PVY病毒,4F9和4G12能够识别CLYVV病毒,但PVY、CLYVV病毒与抗体的亲和力低于SMV病毒;对于重组表达的衣壳蛋白:SMV、CLYVV与抗体2D3、4F9、4G12和6E7反应强烈,PVY与4F9和4G12抗体反应稍强。综上,本研究鉴定出能识别SMV、PVY、CLYVV的通用单克隆抗体4F9和4G12。  相似文献   

Comparison and differentiation of Wheat Yellow Mosaic Virus(WYMV), Wheat Spindle Streak Mosaic Virus (WSSMV) and Barley Yellow Mosaic Virus (BaYMV) isolates using WYMV monoclonal antibodies     

Djabbar Hariri  Thierry Delaunay  Laure Gomes  Sophie Filleur  Christelle Plovie  Hervé Lapierre 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1996,102(3):283-292

Twelve monoclonal antibodies (MAbs) were obtained by immunizing mice with a French isolate (F1) of wheat yellow mosaic virus (WYMV). Three of these (3D12, 2C1, 6C3) belong to the IgM class and the nine others to the IgG class (3D8, 3H1, 2B8, 1F2, 3C10, 4F12, 3H9, 1G5, 54). In antigen-coated plate (ACP) ELISA and indirect double antibody sandwich (IDAS) ELISA, all MAbs recognize the WYMV (F1) both in the form of purified particles and in wheat leaf extract. The analysis of numerous French isolates of WYMV shows a variable reactivity with MAbs 3D8, 3H1, 2B8, 3C10, 3H9 and 1G5 in IDAS — and ACP-ELISA. The Japanese isolate of WYMV and United States isolates of wheat spindle streak mosaic virus (WSSMV) were detected in IDAS- and ACP-ELISA by ten of the MAbs tested showing that the wheat bymoviruses originating from the three locations share a high epitopic homology. French isolates of barley yellow mosaic virus (BaYMV; pathotypes 1 and 2) were only detected in ACP-ELISA with MAbs 6C3, 3D8, 3H1 and 2B8 whereas the two Japanese strains (I-1, II-1) of MaYMV were recognized with these and also with that of 3C10. In IDAS-ELISA, the two Japanese strains were clearly detected by MAbs, 6C3, 3D8, 3H1, 1F2, 3C10 and 1G5 and the British and Belgian (pathotype 2) isolates only by that of 6C3. Only the Japanese strain of BaYMV, 1-1 could be detected with MAb 3H9 in this ELISA system.  相似文献   

分泌抗玉米细菌性枯萎菌单克隆抗体细胞瘤株的建立及抗体测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈京  阙晓枫 《植物病理学报》1990,20(1):37-40

 用玉米细菌性枯萎菌(745)免疫BALB/C小鼠得到的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,获得G₅、C₂和D₁3株稳定分泌抗745菌的单克隆抗体的细胞瘤株。用ELISA间接法测定抗体滴度为1:25600。其中G₅和D₁能与所有供试的9个745菌株系有不同程度的反应,而C₂只与7个745菌株反应。3个单克隆抗体均不与供试的同属其它菌反应。  相似文献   

马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的制备   总被引：3，自引：0，他引：3  

高德香  何礼远 《植物病理学报》1993,23(1):11-16

 用马铃薯环腐病棒杆菌的细胞壁蛋白粗提物作为抗原,应用杂交瘤技术,成功地建立了六株分泌抗马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株CH₁、CH₂、CH₃、CH₄、CH₅和cH₆。对这些杂交瘤细胞株所分泌的相应六种单抗McAb₁、McAb₂、McAb₃、McAb₄、McAb₅和McAb₆进行专化性测定的结果表明,McAb₄对环腐病菌具有亚种特异性,其它5种单抗除与环腐病菌呈阳性反应外,还与其它亚种的棒杆菌有不同程度的交叉反应。细胞株CH₄经体外培养传代30余代和液氮冻存5个月,其分泌抗体的滴度无明显改变。McAb₄属于IgG2a亚类,其诱发的小鼠腹水抗体效价达1:2×10⁵,CH₄的染色体数为95-102条。应用ELISA夹心法,McAb₄所能检测环腐病菌的最低浓度为10³个细菌/毫升。检测感染环染环腐病的马铃薯汁液,稀释1000倍仍呈阳性反应。  相似文献