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1.
利用PCR法鉴定产SLT—Ⅱe大肠杆菌 总被引：18，自引：4，他引：14
民贺氏菌毒素Ⅱ型变异性，是仔猪水肿病的主要致病历子。根据ＳＬＴ－Ⅱｅ基因序列，合成一对针对ＳＬＴ－Ⅱｅ操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链反应扩增方法。通过对产ＳＬＴ－Ⅱｅ毒素大肠杆菌菌株ＴＢ１，产ＳＬＴ－Ⅱ毒素大肠杆菌菌株９３３Ｗ和产ＳＬＴ－Ⅰ毒素大肠杆菌菌株Ｈ３０的试验，结果表明用所设计的引物建立的ＰＣＲ方法可特异性鉴定产ＳＬＴ－Ⅱｅ大肠杆菌。 相似文献
2.
禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究 总被引：6，自引：2，他引：4
将多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）Ｃ４８－１株（Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ１型；Ｃａｒｔｅｒ分型５：Ａ）灭活后全菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ／０骨髓瘤细胞在ＰＥＧ１０００作用下融合。用全菌包被的间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体，获得了２３株能稳定分泌抗Ｐ．ｍ．１型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养２个月和冻存３个月后复苏培养，均能稳定分泌特异性单克隆抗体。２３株腹水ＥＬＩＳＡ效价分别从１０－３—１０－１１，无免疫沉淀性，也无凝集性。Ｉｇ类型鉴定表明，３株属于ＩｇＭ，２０株属于ＩｇＧ。间接ＥＬＩＳＡ检测结果表明：２３株单抗只与Ｐ．ｍ．１型起反应，而不与Ｐ．ｍ．３、４、１６型起反应，也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应，具有型的特异性。用ＩＣ８Ｈ９腹水建立的夹心ＥＬＩＳＡ方法检定Ｐ．ｍ．１型菌株，其敏感性高，特异性强，也更为方便。 相似文献
3.
李斯特氏菌属特异单抗试剂的研制与鉴定 总被引：4，自引：1，他引：3
以单核细胞增生症李斯特氏菌制备免疫原，应用常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ试验筛选，得到６株分泌特异性单抗的细胞系，分别命名为Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５、Ｂ６、Ｄ２、Ｃ５。单抗与标准菌株反应结果显示，Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５三株单抗能与全部２４株李斯特氏菌发生反应，所试菌株中包括Ｌ．Ｍ．１４株，以及无害李斯特氏菌、伊凡诺夫李斯特氏菌、西里杰氏李斯特氏菌、威斯福尔氏李斯特氏菌和格氏李斯特氏菌 相似文献
4.
抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。 相似文献
5.
大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达 总被引：13，自引：0，他引：13
用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因的质粒ｐＸＳＬＴ１,回收０８４ｋｂ的ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因,再将载体ｐＥＴ—２８ｂ（＋）用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,然后将其与ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因连接,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒ｐＸＥＴＳＬＴ１。重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３２１％,而且无天然ＳＴ１生物毒性。 相似文献
6.
表达大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合蛋白双价基因工程菌株的构建 总被引：4，自引：0，他引：4
重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１－ＬＴＢ 融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３．２１％ ,而且已失去天然ＳＴ１肠毒素生物毒性。用从ＩＰＴＧ 诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠,结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＭＬＤ 的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ,ＳＴ＋ ,ＬＴ＋ ）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后,采集的血清能够中和天然ＳＴ１肠毒素的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株 相似文献
7.
以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。 相似文献
8.
猪水肿病菌株毒素的抽提、鉴定和产毒量比较 总被引：2，自引：0，他引：2
对分离自江苏、上海等地的１５株仔猪水肿病菌株进行了毒素抽提，细胞毒性和动物试验鉴定结果表明，其中１４株能产生水肿病毒素（ＳＬＴ－Ⅱｖ），说明水肿病的发生与毒素密切相关。本文比较了这些菌株的产毒量，筛选出４株高产毒素菌株。 相似文献
9.
猪水肿病毒株毒素的抽提,鉴定和产毒量比较 总被引：2，自引：0，他引：2
对分离自江苏，上海等地的１５株仔猪水肿病毒株进行了毒素抽提，细胞毒性和动物试验鉴定结果表明，其中１４株能产生水肿病毒素（ＳＬＴ－Ⅱ）说明水肿病的发生与毒素密切相关，本文比较了这些菌株的产毒量，筛选出了４株高产毒菌株。 相似文献
10.
猪水肿病是由产Ⅱ型变异类志贺氏毒素（ＳＬＴ－Ⅱｖ）的埃希氏大肠杆菌所致。基因修饰的ＳＬＴ－Ⅱ，（Ｅ１６７Ｑ）对猪无毒性，并能使猪产生抗ＳＬＴ－Ⅱ抗体。在１和２周龄对哺乳仔猪免疫５０μｇＥ１６７Ｑ断奶后（３～４周龄）对免疫猪和非免疫猪口服接ＳＬＴ－Ⅱ）的埃希氏大肠杆菌，饲喂低蛋白的非免猪表现为亚临床症状，组织学变化为血管损伤，饲喂高蛋白日粮的非免猪出现临床水肿病，表现为明显的血管损伤，增重下降，共 相似文献
11.
采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。 相似文献
12.
抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立 总被引：6，自引：1，他引：5
将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均 相似文献
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影响产蛋下降综合征H_(91)疫苗株HA效价的因素 总被引：1，自引：0，他引：1
鸡产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）Ｈ９１－１疫苗株ＨＡ效价受接种种毒的浓度和收获时间、鸡红细胞浓度、ＨＡ反应温度、灭活用甲醛溶液浓度、灭活尿囊液存放时间等因素影响，分析了提高ＥＤＳ－７６Ｈ９１株ＨＡ效价的方法 相似文献
14.
抗鸡致病性大肠埃希氏菌O88单克隆抗体的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用纯化的鸡致病性大肠埃希氏菌Ｏ８８菌株（ＭＧ３８ｅ）热灭活抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠,再用该菌株粗提的脂多糖尾静脉注射加强免疫后,取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合,经有限稀释法克隆,用间接ＥＬＩＳＡ及凝集试验（ＩＨＴ）筛选,获得４株能稳定分泌该菌株单克隆抗体的杂交瘤细胞。哪样我瘤细胞培养液ＥＬＩＡＳ和ＩＨＴ效价分别为１：１００～１：１０００和３ｌｏｇ２～４ｌｏｇ２;腹水效价分别为１：１００～１：４ 相似文献
15.
猪水肿病（ＥＤ）是断奶仔猪常见的一种传染病，与类志贺氏毒素Ⅱ变种（ＳＬＴ－Ⅱｖ）密切相关。本试验用多粘菌素Ｂ从基因工程菌大肠杆菌ＴＢ１中提取ＳＬＴ－Ⅱｖ，作中和试验检测来自江苏等地２６７份屠宰猪血清，发现９份血清有ＳＬＴ－Ⅱｖ的抗体，滴度由１∶４～１∶２５６不等，显示致猪水肿病毒素在猪群的实际存在 相似文献
16.
大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的高效表达 总被引：3，自引：0，他引：3
用限制性核酸内切酶Ｅｃｏ ＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ＳＴ１－ＬＴＢ融合基因的质粒ｐＸＳＬＴ１,回收０．８４ｋｂ的ＳＴ１－ＬＴＢ融合基因,再将载体ｐＥＴ－２８ｂ（＋）用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,然后将其与ＳＴ１－ＬＴＢ融合基因连接,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＥｃｏＲⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＢａｍＨⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒ｐＸＥＴ－ＳＬＴ１。 相似文献
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小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞和用产气荚膜梭菌ε类毒素免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠的脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂进行融合，获得分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株１３株，经鉴定，杂交瘤所分泌的单克隆抗体在ＥＬＩＳＡ中均特异地与产气荚膜梭菌ε毒素反应，而不与α和β毒素反应，１３株单克隆抗体均为ＩｇＧ１亚类，经毒素抗毒素中和试验测定，１３株单克隆抗体中，１２株具有中和ε毒素的活性。 相似文献
18.
大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的构建 总被引：13，自引：0，他引：13
用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴＢ）基因的质粒ｐＸＬＴ１－１,回收５０５ｂｐ的ＬＴＢ基因片段,再用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌耐热肠毒素（ＳＴ１）基因的质粒ｐＸＳＴ１,与上述回收的ＬＴＢ基因片段连接,转化至受体菌ＪＭ１０９中。经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组子质粒ｐＸＳＬＴ１。ＥＬＩＳＡ检测到了ＳＴ１－ＬＴＢ融合蛋白,而且该融合蛋白无天然ＳＴ１生物毒性。 相似文献
19.
抗水貂肠炎细小病毒单克隆抗体的建立 总被引：3，自引：1，他引：2
以我国分离的水貂肠炎细小病毒（ＭＥＶ）为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠获得的脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞融合，筛选出８株分泌抗ＭＥＶ的单克隆抗体杂交瘤细胞。经鉴定，８株杂交瘤细胞都属于Ｂ型抗ＭＥＶ单克隆抗体。 相似文献
20.
产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备 总被引：2，自引：1，他引：1
以粗提的ＥＤＳ－７６病毒（ＮＥ－４株）作为抗原，按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，采用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ进行双重筛选，共检出２５个阳性孔，阳性率为１４．８８％。对其中的１１个阳性值较高的孔进行３次克隆，最后获得的１１株杂交瘤细胞，经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体；ＥＬＩＳＡ阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定，１１株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性，腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３２００～１：５１２００和１：１２８～１：２０４８。杂交瘤细胞的染色体数目为８０～１１２，平均９２。尤为重要的是，１１株杂交瘤细胞中有４株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒血凝素决定簇的中和单抗，细胞培养上清和腹水的ＨＩ价分别为２１０～２￣（１２）和２￣（２２）～２￣（２４），腹水的中和效价为１：１２８０～１：５１２０。 相似文献