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黄瓜绿斑驳花叶病毒的鉴定及分子检测 总被引：5，自引：1，他引：4
【研究目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）的快速鉴定检测是控制该潜在危险性有害生物蔓延的有效途径。【方法】通过汁液摩擦接种、透射电镜观察、双抗夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）和RT-PCR方法对该病毒进行鉴定;同时对RT-PCR反应体系及扩增程序进行优化,建立CGMMV免疫捕获RT-PCR（IC-RT-PCR）检测方法。【结果】血清学、生物学、电镜观察和分子生物学方法证明供试样本为黄瓜绿斑驳花叶病毒引致。IC-RT-PCR方法可以简化RNA的提取,降低对试验材料要求。【结论】IC-RT-PCR的建立为CGMMV的检测提供了操作更为简便、特异性更强的快速、准确的检测方法。 相似文献
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利用RT-PCR对黄瓜病毒病毒原种类进行检测 总被引：1，自引：1，他引：0
根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶序列和西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜绿斑花叶病毒(CGMMV)的外壳蛋白基因序列以及南瓜花叶病毒(SQMV)的运动蛋白序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增。对2002～2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果表明,天津地区黄瓜主要毒原种类有CMV,WMV-2和TMV,感染率分别为样本数的96．94％,77．55％和38．67％,CMV和WMV-2 2种病毒的复合感染率为76．53％,3种病毒的复合感染率达到14．67％。 相似文献
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明确黄瓜绿斑驳花叶病毒在寿光地区黄瓜上的分布及危害，为寿光高品质黄瓜的生产提供参考依据。2017—2018年对寿光不同区域、品种、时间和生育期的黄瓜进行黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)系统跟踪调查，分析山东寿光黄瓜上CGMMV的分布及危害。所调查的10个乡镇均不同程度受CGMMV影响，其中稻田镇发病最为严重，发病率达49.64%；光皮黄瓜受害较带刺黄瓜严重；全年病毒高发期集中在5—8月，6月发病最为严重，发病率高达63.33%；黄瓜上发病最为严重的生育期是成熟期。分析原因除品种抗性差异外，温、湿度及个人管理模式等因素有利于CGMMV的发生和流行，因此，合理降温和加强管理可减轻CGMMV的危害。 相似文献
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为揭示黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子流行学特征,通过RT-PCR和cDNA克隆技术获得并分析了从北京甜瓜和山东西瓜上分离的2个黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)分离物CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong的全序列.结果表明CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong的基因组分别由6423和6427个核苷酸组成,包括5'及3'端非编码区和4个开放性的阅读框,分别编码129kDa和186kDa复制相关蛋白、29kDa的移动蛋白及17.4kDa的外壳蛋白.寄主范围测定显示在供试的6科11种植物中CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong均可侵染葫芦科的葫芦、南瓜和西瓜以及茄科的本氏烟和藜科的苋色藜,不侵染供试的其它植物.CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong基因组的核苷酸同源性为99.5%,186kDa蛋白的核酸和氨基酸同源性分别为99.7%和99.8%,移动蛋白的核酸和氨基酸同源性分别为99.3%和98.1%,外壳蛋白的核苷酸同源性为100%.多序列比对分析结果显示,CGMMV的各分离物之间的分子差异并不明显,核苷酸同源性均在98%以上.将CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong与侵染葫芦科植物的烟草花叶病毒属其它成员比较,结果显示其亲缘关系较远,基因组的核苷酸同源性介于56.7%～59.6%,外壳蛋白的氨基酸同源性在44.7%～54.0%之间.综合分析显示,CGMMV分离物之间的差异并不明显,可能具有共同的侵染来源. 相似文献
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RNA依赖性RNA聚合酶(RDRs)是RNA沉默途径中一类重要的蛋白,能够以单链核糖核酸(ssRNA)为模板合成双链核糖核酸(dsRNAs),启动新一轮的RNA沉默。众所周知,RDR基因在植物抵御病毒侵染中发挥重要的作用,而甜瓜作为一种易受到病害侵染的经济作物,其RDR基因的鉴定尚未见报道。因此,本研究利用生物信息学手段,在全基因组水平对甜瓜RDR基因进行了鉴定,分析其序列特征、亚细胞定位、进化关系和启动子上的逆境和激素响应元件。此外,利用RT-qPCR对甜瓜CmRDR基因的表达特征进行了分析,结果发现,接种黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)后,大部分甜瓜CmRDR基因的表达显著下调。本研究首次鉴定了甜瓜RDRs家族基因的特性,初步揭示了CmRDR基因在CGMMV病毒响应中的功能,为后期甜瓜抗病育种提供了一定的理论依据。 相似文献
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为了获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列,研究其与黄瓜芽黄突变现象的关系,本研究采用TRNzol法提取芽黄突变的黄瓜叶片总RNA,并以其为模板反转录合成cDNA第一链。根据NCBI预测的黄瓜ClpP基因序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增得到目的条带后测序,并构建植物表达载体;成功获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列,并提交到NCBI。该基因编码区全长495 bp,共编码氨基酸158个。预测其理论等电点为5.22,理论蛋白质分子量为41.00356 KDa,编码的蛋白包含S14_ClpP_2保守结构域,无信号肽。通过与其他植物Clp蛋白酶的氨基酸序列比对发现与毛茛属植物的Clp蛋白酶同源性较高。并成功构建了以CaMV35S为启动子的植物表达载体pBI121-ClpP。黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列的获得说明该基因在黄瓜中确实存在,这是首次克隆得到了黄瓜中的ClpP基因的cDNA全序列。 相似文献
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山东葫芦科蔬菜上病毒病种类检测及黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了检测和鉴定山东地区葫芦科蔬菜上病毒病种类,从山东诸地11个蔬菜种植区采集了867个葫芦科蔬菜疑似感病样品。利用黄瓜花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、西瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、小西葫芦黄花叶病毒、南瓜花叶病毒、甜瓜黄斑病毒、瓜类褪绿黄化病毒、李属坏死环斑病毒及甜瓜坏死斑点病毒等特异性引物对疑似感病样品分别进行RT-PCR检测,各病毒检出率分别为34.8%,10.4%,20.0%,41.7%,27.0%,7.8%,2.6%,1.7%,0,0.9%。表明除PNRSV外,其他9种病毒在山东各地均有发生,且CMV和TMV发病率较高,2种或2种以上病毒复合侵染也很普遍。同时为明确山东地区CMV分离物的株系分化状况,选取11个地区有代表性的CMV阳性样品,测定其外壳蛋白(Coat protein,CP)和RNA3核苷酸序列并进行序列比对和进化分析,结果显示侵染山东地区葫芦科蔬菜的CMV分离物均属于IB亚组,与韩国分离物As(AF013291)相似性最高,未发现其他株系。 相似文献
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为明确引起广西番茄呈现褪绿斑驳和花叶症状的病毒病原，采集4个疑似病毒感染的番茄样品，利用小RNA深度测序、RT-PCR、序列分析、遗传进化树的构建等方法对样品进行鉴定及遗传进化分析。研究结果发现，小RNA数据中的41条contigs分别被注释为番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)和番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV);RT-PCR证实了s RNA的结果，且所有样品均存在ToMV和To CV的复合侵染。通过拼接获得ToMV和ToCV RNA2的近全基因序列，ToMV近全基因序列为6383 bp，命名为ToMV-GX;ToCV RNA2的近全基因序列为8031 bp，命名为ToCV-GX。进化树分析发现，本研究获得的ToMV-GX与ToMV中国山西、内蒙古、呼和浩特3个分离物处于一个分支，说明其具有较近的亲缘关系；ToCV-GX与ToCV中国台湾、广东分离物处于一个大分支，说明具有较近的亲缘关系。上述结果证实，引起广西番茄呈现褪绿斑驳和花叶症状的病原是To MV和ToCV，本研究是ToMV和ToCV复合侵染广西番茄的首次报道。 相似文献
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Summary Melon germplasm was screened for cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV), powdery mildew (Sphaerotheca fuliginea), downy mildew (Pseudoperonospora cubensis) and Fusarium wilt (Fusarium oxysporum f. sp. melonis) resistance under artificial conditions except downy mildew for which screening was done under natural epiphytotic conditions. High level resistance to all the four diseases was not recorded in any of the collections tested. Nevertheless, ertheless, resistance to three diseases was located in three germplasm. Wild Cucumis species C. figarei exhibited absolute resistance to CGMMV and Fusarium wilt and high level resistance to downy mildew. Phoot or snapmelon (Cucumis melo var. momordica) — a non-dessert from of Indian origin—was highly resistant to downy mildew and resistant to CGMMV and medium resistant to Fusarium wilt. Iroquois was resistant to powdery mildew and medium resistant to downy mildew and CGMMV. 相似文献
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温度及烟草CMV病株对烟蚜生长发育的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
研究了19℃、22℃、25℃、28℃和31℃恒温条件下，CMV烟草病株和健康烟草与烟蚜Myzus persicae (Sulzer)生长发育和繁殖的关系。研究表明，随着温度的升高，在健康烟株（对照）和病株（处理）叶碟饲养条件下，烟蚜的成虫寿命和世代历期都显著缩短，繁殖力减弱。19℃时烟蚜的成虫寿命和世代历期最长，31℃时烟蚜最短。CMV烟草病株对烟蚜存活率和繁殖力有显著影响，与对照相比，烟草病株造成烟蚜成活率降低。烟蚜取食CMV烟草病株时，19℃烟蚜的繁殖力最强为36.9头，31℃最弱为2.17头。净增殖率R0在22℃时最大，在31℃时最小。周限增长率λ和内禀增长率rm在28℃和31℃时最大，在22℃时最小。世代平均周期T和种群加倍时间t在22℃时最大，在31℃时最小。研究结果说明，烟蚜的生长发育和繁殖与温度和感染CMV的烟草有关。 相似文献
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本研究以黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、核酸斑点杂交（NASH）技术,进行了检测灵敏度比较研究。三种检测方法灵敏度实验结果表明：RT-PCR检测灵敏度高于地高辛标记的核酸斑点杂交技术,以血清学为基础的DAS-ELISA检测灵敏度最低。通过灵敏度对比分析得出,核酸斑点杂交技术可以替代RT-PCR应用于基层的检疫检测。 相似文献
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Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) is a severe threat for cucumber production worldwide. At present, there are no cultivars available in the market which show an effective resistance or tolerance to CGMMV infection, only wild Cucumis species were reported as resistant. Germplasm accessions of Cucumis sativus, as well as C. anguria and C. metuliferus, were mechanically infected with the European and Asian strains of CGMMV and screened for resistance, by scoring symptom severity, and conventional RT-PCR. The viral loads of both CGMMV strains were determined in a selected number of genotypes using quantitative RT-PCR. Severe symptoms were found following inoculation in C. metuliferus and in 44 C. sativus accessions, including C. sativus var. hardwickii. Ten C. sativus accessions, including C. sativus var. sikkimensis, showed intermediate symptoms and only 2 C. sativus accessions showed mild symptoms. C. anguria was resistant to both strains of CGMMV because no symptoms were expressed and the virus was not detected in systemic leaves. High amounts of virus were found in plants showing severe symptoms, whereas low viral amounts found in those with mild symptoms. In addition, the viral amounts detected in plants which showed intermediate symptoms at 23 and 33 dpi, were significantly higher in plants inoculated with the Asian CGMMV strain than those with the European strain. This difference was statistically significant. Also, the amounts of virus detected over time in plants did not change significantly. Finally, the two newly identified partially resistant C. sativus accessions may well be candidates for breeding programs and reduce the losses produced by CGMMV with resistant commercial cultivars. 相似文献
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棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病发病动态及其田间扩展研究初报 总被引：1，自引：1，他引：0
为明确棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病发生规律,对该病害的发病、蔓延和影响因素进行研究。毛竹搭建塑料大棚,无毒土壤上常规或低密度移栽健康嫁接西瓜苗,移栽后6、30天剪除部分瓜苗顶叶或倒2叶约半片后,将伤口浸渍在毒源中进行接种诱发,常规密度移栽苗自然生长,低密度移栽苗经整枝始终保持单株独立;健康植株用毒源污染剪刀、手指后整枝或毒源与健康藤蔓摩擦诱发。调查病田病株自然扩展以及拔除清除病健株后直播种子和套种瓜苗的控病效果。目测法定期调查显症病株,酶联免疫双抗体夹心检测法确定病株。接种后植株染病率高。低密度移栽苗：移栽后6天接种的瓜苗24天显症、34天突增、85天高峰,分别比移栽后30天接种的植株长4、4和30天;未接种的也在移栽后70天显症、95天高峰。常规密度移栽苗接种株也有类似趋势。显症病株率和带毒株率与日平均温度关系密切。病株中不同藤蔓上的叶片和相同藤蔓内的叶片既表现显症,也有隐症,甚至终生带毒隐症。病健藤蔓摩擦病株率100.0%,而染毒手指、剪刀整枝病株率则为91.7%和83.3%。病田内病情自然扩展先相邻连续,后点片;病地拔除清除病健株后,直播瓜苗和套种嫁接苗带毒株率分别为82.4%和77.0%,控病效果17.6%和23.0%。棚栽嫁接西瓜苗（植株）从感染黄瓜绿斑驳花叶病毒病到表现症状需要20天左右的潜伏期,继之产生显症病株突增和高峰,温度高,潜伏期短、进入突增和高峰快;隐症病株表现在株间、不同分枝藤蔓叶片间和相同藤蔓不同叶片间;移栽密度对发病无明显影响。田间扩展再侵染先相邻后点片,除了其他途径外,病健藤蔓接触摩擦传病作用大;病地当年连作重发的机率高。 相似文献