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1.
[目的]得到适用于罗布麻RAPD的最优体系.[方法]以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分析的罗布麻基因组DNA.[结果]通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为:Mg2+ (2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol./L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Tap酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min),最后在72℃延伸7 min.[结论]提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析;Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果;对罗布麻RAPD-PCR中Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Tap酶(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min),最后在72℃延伸7min. 相似文献
2.
以东北蓖麻为材料建立蓖麻RAPD反应优化体系,用于蓖麻遗传多样性分析.用CTAB提取蓖麻基因组DNA,采用正交试验对影响蓖麻RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化.结果表明最佳的蓖麻RAPD-PCR反应体系(25μ1)中含10xbuffer 2.5μ1,模板DNA 4ng/μ1,dNTP 0.4mmol/L,引物0.321μmol/L及Taq酶0.1U/μ1.扩增程序为94℃预变性2min;94℃变性30s,35℃退火30s,72℃延伸1min20s;40个循环;72℃延伸5min.通过正交体系优化,获得了较优的蓖麻凡RAPD-PCR反应体系,为蓖麻RAPD分子标记提供了理论基础. 相似文献
3.
人参黑斑病菌RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
采用改良的CTAB法提取人参黑斑病菌的基因组DNA,建立人参黑斑病菌RAPD反应的体系.最佳体系容积为25μL,其中包括10×Taq配套缓冲液2.5μL,模板DNA 20 ng/μL,引物15 pmol/L,dNTP 150μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,其余部分用DW补充.PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃延伸7 min. 相似文献
4.
该试验以弥渡紫皮大蒜叶片基因组DNA为试材,采用不同浓度MgCl2、引物、dNTP、TapDNA聚合酶对大蒜的RAPD体系进行单因素反应条件优化.结果表明,25μL总反应体积中,最佳浓度配比为模板DNA 40ng,MgCl2 2.0 mmol/L,引物12 pmol,dNTP 50μmol/L,Taq DNA聚合酶1 unit,10×反应缓冲液2.5μL.扩增程序为94℃变性3 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃最终延伸10 min. 相似文献
5.
对小麦黄化苗、叶片和种子基因组DNA提取,以及对影响RAPD结果的反应体系和反应条件的各项因素进行了研究。建立了快速、高效的适合于多种情况的DNA提取方法。构建了适用面宽而且稳定可靠的RAPD反应条件和反应体系。即反应条件为94℃预变性3 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环2次,94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,再从94℃变性1 min开始循环38次,最后72℃延伸10min;20μL反应体系为2.5 mmol/L Mg2 ,0.2 mmol/L dNTP,10 pmol引物,25 ng模板,0.8 UTaq酶。 相似文献
6.
以杜仲优良品种的幼叶为材料提取总DNA,采用单因素梯度试验筛选法进行了杜仲RAPD反应的优化.确定的优化反应体系为:25 μL反应体积中,10×buffer 2.5 μL,TAqDNA聚合酶1 U,随机引物(5 μmol/L)2.0 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0 μL,dNTP(2.5 mmol/L)2.0 μL,模板2 mg/L,补ddH2O至25 μL.扩增程序为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,35个循环,72 ℃延伸10 min,4 ℃保持产物.在此条件下得到的RAPD图谱清晰、稳定,为进一步利用该技术开展杜仲有关分子生物学研究提供了技术参考. 相似文献
7.
以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存. 相似文献
8.
枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。 相似文献
9.
结球甘蓝RAPD反应条件的优化 总被引：5，自引：1，他引：4
以甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)基因组DNA为模板,比较筛选RAPD扩增体系的各影响因素,优化了甘蓝的RAPD反应体系,调整了扩增程序.该体系反应总体积为20μL,其中25mmol/L MgCl2 2.0μL,10×PCR Buffer 2.0μL,10mmol/L dNTP 0.5μL,5U/μL Taq E 0.5μL,20ng/μL Primer 1.5μL,10ng/μL模板DNA 3μL,灭菌双蒸水10.5μL.适宜的扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,37℃复性1min,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10min后15℃保存. 相似文献
10.
采用CTAB改良法,以苹果梨及其变异单系叶片为材料,进行苹果梨基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化.结果表明,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为25μL(15 ng DNA模板,1.0 mmol·L-1dNTP,1.0 mmol·L-1MgCl2,2.5μL Buffer,15 pmol·L-1引物,1UTaqDNA聚合酶,15.67μL ddH2O).扩增反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸1.5 min;45个循环;最后72℃延伸7min;终止温度为4℃. 相似文献