共查询到18条相似文献，搜索用时 234 毫秒
1.
巢式PCR快速检测西瓜细菌性果斑病菌 总被引：1，自引：1，他引：1
【目的】建立nested-PCR方法,快速检测西瓜种子中的燕麦嗜酸菌西瓜亚种（Acidovorax avenae subsp. citrulli,Aac）,为西瓜细菌性果斑病（bacterial fruit blotch of watermelon,WFB）的防控提供技术支持。【方法】 根据Aac BOX短重复序列的PCR产物设计两对引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2,建立以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,以5 µL样品处理液于99℃高温裂解10 min,再放置冰上冷却5 min,以所释放病原DNA为模板进行PCR扩增,采用50 μL反应体系：5 μL 10×PCR buffer（25 mmol?L-1 MgCl2）,4 μL dNTP （D4030RA,2.5 mmol?L-1）,引物（5 μmol?L-1）各3 μL,0.4 μL Taq DNA酶（DR001B,5 U?μL-1）,通过退火温度优化,反应条件为：引物BX-L1/BX-R5各3 μL进行第一轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s;65℃,45s;72℃,1 min;35个循环;72℃,延伸7 min;取扩增后的产物1 μL为模板,以引物BX-L1/BX-S-R2各3 μL进行第二轮扩增,95℃,2 min;95℃,30 s,66℃,45 s,72℃,1 min,30个循环,72℃,7 min。在此条件下对梯度Aac菌悬液、模拟带菌种子提取液进行特异性、灵敏性及重复性检验,对不同带菌率的西瓜种子提取液进行检测。【结果】引物BX-L1/BX-R5和BX-L1/BX-S-R2在检测不同来源的Aac菌株时都产生了预期大小的片段,并且对其近源种燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种（A. avenae subsp. cattleyae）、魔芋假单胞菌（A. avenae subsp. konjaci）及其不相关菌株未扩增出目标片段。以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR,对Aac纯菌液和模拟带菌种子提取液的最低检测限4.7×101 cfu/mL,比direct-PCR灵敏度高出1 000倍。当西瓜种子带菌率在0.1%-0.5%时,nested-PCR阳性检测率为66.7%;当种子带菌率为1%-10%时,nested-PCR的阳性检测率为83%-100%。【结论】以BX-L1/BX-R5为外侧引物,BX-L1/BX-S-R2为内侧引物的nested-PCR方法,能够快速、高效检测携带微量Aac的西瓜种子,检测结果重现性高。 相似文献
2.
葫芦种子带菌对幼苗细菌性果斑病发生和侵染途径的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
采用葫芦砧木种子人工接种燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae ssp.citrulli,Aac)的方法,观察由Aac经种传方式对葫芦砧木苗期发病的影响和Aac在葫芦砧木苗期的定殖情况,并在温室条件下分析种子中不同带菌量与葫芦砧木幼苗细菌性果斑病发病的关系。结果表明:Aac在随着葫芦砧木幼苗生长过程中先侵染幼苗子叶,随后沿叶脉侵入下胚轴并定殖于下胚轴的韧皮部和木质部中,继而引起幼苗下胚轴发病;随着砧木种子带菌浓度的提高,幼苗发病率和病情指数也越高。 相似文献
3.
63种杀菌剂对西瓜、甜瓜细菌性果斑病菌的室内毒力测定 总被引：2，自引：0，他引：2
由燕麦噬酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli,简称Aac)引起的西瓜、甜瓜细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch,简称BFB)是西瓜、甜瓜生产上的一种毁灭性病害。目前资料上报道的一些药剂对果斑病菌的防效不尽一致,为明确这些药剂的防治效果及筛选更有效的药剂,试验采用抑菌圈法测定了63种杀菌剂对西瓜、甜瓜细菌性果斑病菌的室内毒力作用。结果表明:72%农用硫酸链霉素SPX等11种药剂对西瓜、甜瓜细菌性果斑病菌具有较好的抑制效果,抑菌圈平均直径>10.0mm;不同厂家生产的农用链霉素在相同浓度下抑菌效果明显不同;西瓜菌株和甜瓜菌株对同一药剂的敏感性也有较大差异。 相似文献
4.
选择西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac)的抗利福平菌株RifAac,通过人工模拟接种试验,采用选择性平板分离、菌落PCR(Bio-PCR)和常规PCR方法,观察该病原细菌在西瓜种子、土壤、病残体和田水中的存活期。结果表明,果斑病细菌在种子表面可存活4～5个月,在田水中可存活2个月,在不含植物残体的土壤中可存活8个月,在含西瓜残体的土壤中可以存活12个月以上。 相似文献
5.
西瓜细菌性果斑病菌Taq Man探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
根据西瓜细菌性果斑病菌（Acidovorax avenae subsp．citrulli）与相关细菌16SrDNA序列差异，设计出对西瓜细菌性果斑病菌具有稳定点突变特异性探针Aac—probe，利用该探针对23种供试菌株进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明，只有西瓜细菌性果斑病菌能检测到荧光增强信号，其它细菌无荧光增强信号。该方法特异性强，灵敏度高，重复性好，可有效地应用于西瓜细菌性果斑病菌的检测。 相似文献
6.
利用SRAP标记快速检测西瓜杂交种子纯度 总被引：1，自引：0，他引：1
《新疆农业科学》2017,(9)
【目的】以设施、露地兼用西瓜杂交品种早佳(84-24)及其父本、母本为试验材料,利用SRAP分子标记技术进行DNA指纹图谱构建,筛选出能够快速检测西瓜早佳(84-24)杂交种子纯度的SRAP标记。【方法】选取28对SRAP引物,对供试西瓜品种早佳(84-24)及其父、母本的基因组DNA进行扩增,筛选出扩增多态性好、条带清晰、稳定的SRAP引物作为候选标记,利用100粒杂交种子进行纯度检测准确性验证。【结果】28对供试引物中有22对引物在F1及其父、母本之间扩增出多态性条带,多态性比率为78.6%,其中有1对为父本显示,母本缺失的显性SRAP引物(Me6F/Em2R)。用显性引物(Me6F/Em2R)对100粒西瓜杂交种子进行纯度检测,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度为99.0%,与田间形态学鉴定结果(99.1%)基本一致。【结论】利用SRAP标记(Me6F/Em2R),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以对西瓜杂交种早佳(84-24)的纯度进行快速、准确鉴定。SRAP分子标记技术在西瓜杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。 相似文献
7.
西瓜和甜瓜杂种一代种子纯度的RAPD鉴定 总被引：7，自引：0，他引：7
选用100条随机引物(S71-S190)对西瓜、甜瓜杂种一代和其父、母本的种子进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,探索西瓜和甜瓜杂交品种种子纯度鉴定的便捷途径.结果表明:在100条引物中筛选出4条有特征条带的引物,其中S92号引物能使甜籽一号、白兰蜜和黄河蜜6号与其母本有效区分开来;S162号、S181号引物能使甜籽一号与其母本区分开来;S175号引物能使白兰蜜与其母本区分开来;但未发现使T×14E与其母本区分开来的引物. 相似文献
8.
《江苏农业科学》2017,(12)
为研究哈密瓜细菌性果斑病病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli,简称Aac)在不同培养条件下形成生物膜的能力,选用微孔板体外培养、结晶紫染色、分光光度测定法检测哈密瓜细菌性果斑病病菌在不同载体、培养基、培养温度、培养时间、葡萄糖浓度、初始p H值条件下生物膜的形成能力。结果发现,在11种供试载体中,Aac在聚苯乙烯表面易形成稳定、明显的生物膜;在供试的6种培养基中,牛肉膏蛋白胨培养基(LB)形成生物膜能力最强;以LB为培养基、聚苯乙烯孔板为载体、初始p H值为7、培养温度28℃、培养24 h、葡萄糖浓度为30.0 mmol/L时,Aac形成生物膜能力最强。结果表明,不同载体、培养基、培养温度、培养时间、葡萄糖浓度、初始培养p H值均对Aac生物膜形成能力有明显影响。研究结果能为有效阻止Aac生物膜形成、有效防治哈密瓜细菌性果斑病病菌提供理论依据。 相似文献
9.
细菌性果斑病(Acidovorax citrulli)是一种由燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp. Citrulli)引起的严重危害葫芦科作物的世界性病害,该病主要通过种子远距离传播,如果能够在种植瓜果之前就检测出种子是否带病,就能有效防止果斑病及其他更多的病菌对果农造成经济损失。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和PCR检测法对5份西瓜种子进行细菌性果斑病检测,旨在对两种不同的检测方法进行比较并探究各自的优劣。经过实验对比两种方法发现,ELISA检测方法实验结果容易受外界影响,对操作要求比较高,且精度不如PCR检测法,但在PCR检测法中引物选择十分重要,引物选择直接关系到实验的准确性,因此对PCR检测细菌性果斑病引物选择方面的探索还要继续进行。 相似文献
10.
西瓜炭疽病菌Colletetrichum orbiculare的分子检测 总被引：6，自引：0，他引：6
【研究目的】探索西瓜炭疽病菌(Colletetrichum orbiculare )的分子检测技术，为西瓜、甜瓜等生长期和采后炭疽病的快速、准确鉴定和检测提供技术和方法。【采用的主要方法和研究结果】根据GeneBank中Colletetrichum属的24个种的ITS系列，比较设计出一对引物CY1/CY2，可以特异的从西瓜炭疽病菌C. orbiculare和菜豆炭疽病菌C. lindemuthianum菌株中扩增到一条442bp的条带，将这两个种的炭疽菌和其它菌分开。进一步利用RAPD随机引物扩增C. orbiculare和C. lindemuthianum，找出在C. orbiculare中的特异性条带，经过克隆、测序后，设计出一对SCAR引物RB/RC，可以特异的在C. orbiculare中扩增出一条216bp的条带，将C. orbiculare和C.lindemuthianum分开。采用两对引物组成双重PCR，能够将C. orbiculare和其它相关和近似菌株分开。【主要结论】利用上述两对引物组成双重PCR检测体系，可以快速鉴定C. orbiculare，并且能够直接在植物组织中将西瓜炭疽病菌C. orbiculare检测出来，灵敏度可以达到1pg/μl。 相似文献
11.
根据病原菌的生物学特性、生理生化特性包括革兰氏染色反应、氧化酶反应、过氧化氢酶反应、氧需求等和特异性PCR扩增结果，以及病原菌危害造成的田间症状，发现燕麦嗜酸菌属西瓜亚种（Acidovorax avenae subsp．Citrulli）可在新寄主一籽瓜上造成严重危害。该病菌在田间主要侵染籽瓜的果实和子叶，症状在果实上尤为明显，形成黑色的星状开裂。为了控制该病的发生，对种子携带病原菌的快速检测方法进行了研究。结果表明，特异性PCR作为检测种传病原菌具有快速、准确和灵敏的特点。当种子浸出液为PCR反应的模板时，可检测出的种子带菌率极限最低为4％；当以种子浸出液提取的DNA为模板时，种子带菌率检测极限为2％甚至更低。 相似文献
12.
Application of droplet digital PCR in detection of seed-transmitted pathogen Acidovorax citrulli 
下载免费PDF全文
下载免费PDF全文 LU Yu ZHANG Hai-jun ZHAO Zi-jing WEN Chang-long WU Ping SONG Shun-hua YU Shuan-cang Luo Lai-xin XU Xiu-lan 《农业科学学报》2020,19(2):561-569
Bacterial fruit blotch caused by Acidovorax citrulli is a serious threat to cucurbit industry worldwide. The pathogen is seed-transmitted, so seed detection to prevent distribution of contaminated seed is crucial in disease management. In this study, we adapted a quantitative real-time PCR (qPCR) assay to droplet digital PCR (ddPCR) format for A. citrulli detection by optimizing reaction conditions. The performance of ddPCR in detecting A. citrulli pure culture, DNA, infested watermelon/melon seed and commercial seed samples were compared with multiplex PCR, qPCR, and dilution plating method. The lowest concentrations detected (LCD) by ddPCR reached up to 2 fg DNA, and 102 CFU mL−1 bacterial cells, which were ten times more sensitive than those of the qPCR. When testing artificially infested watermelon and melon seed, 0.1% infestation level was detectable using ddPCR and dilution plating method. The 26 positive samples were identified in 201 commercial seed samples through ddPCR, which was the highest positive number among all the methods. High detection sensitivity achieved by ddPCR demonstrated a promising technique for improving seed-transmitted pathogen detection threshold in the future. 相似文献
13.
为了探索西瓜无公害防病壮苗技术,以常规种子在瓜类连作土上播种为带菌土对照(CK1),以土壤高温消毒为无病菌土对照(CK2),比较了专用种衣剂包衣和3种放线菌剂处理对西瓜防病壮苗的效果。结果表明,CK1西瓜苗期土传病害严重,发病率高达90%;CK2发病率仅为13.3%,防病效果达85.2%;应用种衣剂包衣西瓜种子可以有效防治病害,其发病率为25.6%,防病效果为71.6%;3种放线菌剂A、B、C均有一定的防病促生效果,防病效果分别达16.2%,17.0%和13.3%。综合分析各项指标认为,放线菌剂A处理的西瓜幼苗长势较好,植株健壮,壮苗指数高,叶绿素含量高,根系活力强;种衣剂包衣也是防病壮苗有效而简易实用的方法。 相似文献
14.
【目的】西瓜是一种广受欢迎的夏季水果,籽用西瓜（籽瓜）、黏籽西瓜和普通西瓜是3种重要的栽培类型,但对其果实中代谢物全面鉴定的研究很少,比较这3种西瓜果实的代谢组学差异,为明确驯化改良对不同类型西瓜代谢组的影响提供新见解。【方法】试验以5份籽用西瓜、5份黏籽西瓜和6份普通西瓜为材料,对成熟期果肉进行广泛靶向代谢组学检测,采用SIMCA-P、MetaboAnalyst 5.0、Origin等软件对代谢组数据进行分析。【结果】LC-MS分析共检测到323种代谢物,包括51种氨基酸及其衍生物、21种核苷酸及其衍生物、14种碳水化合物、32种有机酸、52种脂质、36种类黄酮、32种羟基肉桂酰衍生物等。PCA和聚类分析显示,籽用西瓜和黏籽西瓜的代谢组学轮廓差异较小,籽用西瓜的代谢组轮廓介于黏籽西瓜和普通西瓜之间。对分类贡献率较大的代谢物是蔗糖、柠檬酸、L-谷氨酸、L-苏氨酸、葫芦素类、香草酸糖苷异构体、脂质类等。聚类热图分析显示黏籽西瓜中特有的代谢物是葫芦素及其衍生物等,籽用西瓜中的绿原酸、LysoPE脂质类等化合物含量较高,普通西瓜中的糖类、精氨酸、阿魏酸及C18-2和C18-3不饱和脂肪酸等物质含量较高。比较分析共鉴定出156种差异代谢物,籽用西瓜与黏籽西瓜的主要差异代谢物有对香豆醛、阿魏酸、肉桂酸、蔗糖、葫芦素D O-葡萄糖苷、葫芦素E异构体、牡荆素、松柏醇等。籽用西瓜与普通西瓜的主要差异代谢物有脂质类、类黄酮类、有机酸类和糖类等。随着作物进化的程度增加,营养类代谢物质含量增加,抗性相关的代谢物质含量减少。【结论】籽用西瓜和黏籽西瓜的果实代谢组差异比籽用西瓜和普通西瓜的差异小,籽用西瓜的代谢轮廓介于黏籽西瓜和普通西瓜之间。除了表型和基因组差异外,代谢组差异也可以作为区分品种的重要依据。本研究首次在代谢组学水平比较了3种类型西瓜果实的差异,对深入理解西瓜种质资源,培育保健型西瓜新品种有重要的指导意义。 相似文献
15.
安徽红籽瓜及其自交一代粗脂肪含量分析 总被引：6，自引：0，他引：6
对安徽红籽瓜及其自交一代进行了分析比较,结果表明:①安徽红籽瓜种仁粗脂肪含量丰富.②含山、凤阳、合肥红籽瓜自交一代粗脂肪含量并没有显著差异;但是含山和凤阳的红籽瓜自交一代与黑籽瓜自交一代之间存在显著差异.③变异系数的比较显示含山的红籽瓜自交一代更有希望选育出优良自交系.④由相关回归分析可知,粗脂肪含量与种子长×宽、千粒重、种子长呈正相关,其回归方程分别为:y=27.215x1+22.398,y=0.115x2+33.746和y=12.858x23+27.427,(y为粗脂肪含量%;x1为种子长宽乘积mm2;x2为种子千粒重g;x3为种子长mm.) 相似文献
16.
【目的】探明不同砧木嫁接对西瓜抗生理性凋萎症的作用机理,为抗性砧木筛选和育种提供理论依据。【方法】选用葫芦、南瓜、冬瓜、野生西瓜等12个砧木与广西三号无籽西瓜进行嫁接试验、田间栽培试验,测定不同嫁接组合对西瓜生长后期叶片生理生化指标的影响。【结果】不同的嫁接组合中,以白籽南瓜、广西本地葫芦、杂交葫芦、伙伴野生西瓜、日本南瓜、大蒲瓜、超丰F1作砧木西瓜生理性凋萎症发病率较低,为0～6．00％,最低的为白籽南瓜。发病率低的组合,其叶片叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素含量和POD活性、SOD活性、Pro含量均极显著高于对照,MDA含量则显著低于对照。【结论】日本南瓜、广西本地葫芦、杂交葫芦、伙伴野生西瓜对西瓜生理性凋萎症抗性较强,可在生产上示范应用。 相似文献
17.
为探讨植物源抗病促生剂诱导后西瓜苗的生长和抗枯萎病情况,采用盆栽试验研究了0、2、5、10、15、20 g/L植物源抗病促生剂对枯萎病病情指数、西瓜苗生物量、抗病生理指标的影响。结果表明:植物源抗病促生剂诱导浓度在2～20 g/L时,西瓜枯萎病的相对防效为5.54%～22.21%;与喷清水处理相比,西瓜苗鲜重提高31.76%～56.76%,株高增幅0.76%～19.74%;西瓜苗中丙二醛(MDA)含量和氧自由基(O2.-)产生速率降低,苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性升高,差异均达显著水平。综合分析,当施用浓度为10～15 g/L时,植物源抗病促生剂对西瓜苗的抗病促生效果较好。 相似文献
18.
利用西瓜植株残体 (根、茎、叶 )的水浸提液进行西瓜种子发芽和幼苗生长试验。结果表明 :西瓜残体水浸提液对西瓜种子萌发和幼苗体内相关酶活性有一定的抑制作用。当浸提液浓度大于 1 0 g/L时 ,对种子萌发有明显的抑制作用 ,并随着浓度升高 ,抑制作用增强。水培过程中 ,浸提液浓度大于 2 0 g/L时 ,幼苗根部酶活性受抑显著。不同部位相比 ,西瓜叶的抑制作用最为明显 ,茎、根次之。进而说明西瓜根、茎、叶残体的淋洗物及其分解产物 (化感物质 )对西瓜根系生长有一定的毒害作用 ,其物质积累过多成为西瓜产生连作障碍的原因之一。 相似文献