共查询到19条相似文献，搜索用时 346 毫秒
1.
乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响及其机理研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在大鼠肝细胞培养液中加入不同浓度乐果,染毒12、24 h后,检测肝细胞凋亡率、细胞内Ca^2＋浓度、活性氧（ROS）及线粒体膜电位（Δψm）变化,并观察凋亡细胞。结果表明：染毒后肝细胞出现了凋亡变化;细胞凋亡率明显升高,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异显著,且呈时间-剂量效应;3μmol.L^-1组细胞内Ca^2＋浓度极显著高于对照组,之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca^2＋浓度逐渐下降;ROS水平为3-100μmol.L^-1时随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而300μmol.L^-1组略有下降,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异均极显著;Δψm除24 h 300μmol.L^-1组外其余各处理组均持续下降。表明低剂量乐果可诱导肝细胞凋亡,细胞内Ca^2＋、ROS和Δψm也可能参与这一过程。 相似文献
2.
《南京农业大学学报》2014,(2)
为了建立体外模拟氧自由基诱导的细胞氧化损伤模型,本试验采用Percoll密度梯度离心法纯化原代大鼠Leydig细胞,并鉴定特异性蛋白3β-HSD;采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、ROS以及O·-2含量,比色法测定·OH、MDA的含量以及抗氧化物酶SOD、CAT和POD的活性。结果显示:特异性蛋白3β-HSD鉴定后,荧光显微镜观察到大部分细胞呈现特异性荧光。MTT测定结果显示,300~1 000μmol·L-1H2O2处理细胞均可极显著降低细胞活力(P0.01);300μmol·L-1H2O2处理可显著提高Leydig的凋亡率以及增加ROS含量(P0.05)和·OH含量(P0.01),但可显著降低线粒体膜电位(P0.05)。H2O2处理对Leydig细胞内SOD、CAT和POD的活性无显著影响(P0.05),但可显著提高细胞内MDA的含量(P0.05)。结论:300μmol·L-1H2O2处理Leydig细胞8 h可以诱导细胞氧化损伤从而建立体外模拟氧自由基诱导细胞氧化损伤模型。 相似文献
3.
《南京农业大学学报》2014,(2)
为了建立体外模拟氧自由基诱导的细胞氧化损伤模型,本试验采用Percoll密度梯度离心法纯化原代大鼠Leydig细胞,并鉴定特异性蛋白3β-HSD;采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、ROS以及O·-2含量,比色法测定·OH、MDA的含量以及抗氧化物酶SOD、CAT和POD的活性。结果显示:特异性蛋白3β-HSD鉴定后,荧光显微镜观察到大部分细胞呈现特异性荧光。MTT测定结果显示,300~1 000μmol·L-1H2O2处理细胞均可极显著降低细胞活力(P0.01);300μmol·L-1H2O2处理可显著提高Leydig的凋亡率以及增加ROS含量(P0.05)和·OH含量(P0.01),但可显著降低线粒体膜电位(P0.05)。H2O2处理对Leydig细胞内SOD、CAT和POD的活性无显著影响(P0.05),但可显著提高细胞内MDA的含量(P0.05)。结论:300μmol·L-1H2O2处理Leydig细胞8 h可以诱导细胞氧化损伤从而建立体外模拟氧自由基诱导细胞氧化损伤模型。 相似文献
4.
以500μmol·L-1甲基苯基吡啶离子(MPP+)制备帕金森病(PD)细胞模型,MTT法测定细胞存活率,比色法测定LDH释放量;AO/EB染色法、透射电镜法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡比率并测定ROS含量,探讨青皮内生菌(Phomopsis sp.)固体发酵产物细胞松弛素H(CyH)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。结果表明:①CyH与MPP+同时加药(0.05~0.20μmol·L-1)、先加药(0.002 5~0.010 0μmol·L-1)和后加药(0.01~0.20μmol·L-1)均能使PC12细胞存活率显著增加,LDH释放率显著下降;②流式细胞仪测定表明CyH能够降低MPP+诱导的PC12细胞凋亡率(P0.001);透射电镜和AO/EB染色也显示细胞形态的改善;③CyH能显著抑制MPP+升高ROS含量的作用(P0.05)。说明CyH能抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤和凋亡,这可能与其减少细胞内ROS含量有关。 相似文献
5.
【目的】研究不同剂量吡啶甲酸铬（CrPic）对新生仔猪原代肝细胞氧化作用的影响。【方法】选用3日龄新生仔猪作为细胞供体,用剪切消化法分离肝细胞,分别用0、8、200、400 μmol?L-1的吡啶甲酸铬处理细胞48 h,研究吡啶甲酸铬对细胞内活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）的含量、培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性以及对细胞DNA单链断裂(彗星试验)的影响。【结果】与对照组相比,各处理组ROS水平、LDH活力和彗星试验指标无显著差异（P＞0.05）,8 μmol?L-1组MDA含量显著降低（P＜0.05）;与8 μmol?L-1组相比,400 μmol?L-1处理组ROS、MDA、LDH和DNA损伤程度均显著升高(P＜0.05),随着吡啶甲酸铬添加水平的升高,ROS、LDH分别呈先下降后上升的二次曲线型变化趋势（P＜0.05）。【结论】体外条件下适量的吡啶甲酸铬能抑制肝细胞内脂质过氧化物的生成,增强猪肝细胞的抗氧化能力;400 μmol?L-1吡啶甲酸铬对猪肝细胞无抗氧化作用,也不会引起肝细胞的氧化损伤。 相似文献
6.
氧化应激在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用 总被引：2，自引：1，他引：1
【目的】探讨氧化应激在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用。【方法】采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉处理细胞,或者Z-VAD-fmk、NAC和镉共同处理细胞。应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内ROS水平和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3活性、GSH和MDA含量。【结果】结果表明,肝细胞暴露于浓度为2.5、5、10 μmol•L-1的镉后,细胞相对存活率显著下降（P＜0.01）,凋亡率显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,呈剂量-效应关系;2.5和5 μmol•L-1镉组在1.5 h之前导致细胞内ROS水平显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）;镉暴露可使肝细胞Δψm显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;NAC能够显著减少镉引起的凋亡细胞数量和极显著降低凋亡率（P＜0.01）,可以显著降低单独镉暴露组ROS水平升高和阻止ΔΨm降低（P＜0.05）;细胞内GSH含量12 h时随镉剂量增高而降低,部分剂量组极显著低于对照组（P＜0.01）,24 h时随剂量增高而升高,部分剂量组显著或极显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;细胞内MDA含量随着镉浓度的增大而升高,10 μmol•L-1剂量组MDA的含量显著高于对照组（P＜0.05）;未见caspase-3活性升高,caspase抑制剂Z-VAD-fmk对镉致细胞凋亡无影响。【结论】醋酸镉致肝细胞凋亡与其引起ROS产生并导致氧化损伤的非caspase途径有关。 相似文献
7.
外源钙对镉胁迫下芥菜型油菜幼苗生长和生理特性的影响 总被引：5，自引：1，他引：4
通过水培试验研究5、10mmol·L-1Ca2+搠寸不同水平镉处理下的油菜幼苗生物量、根长、丙二醛(MDA)和H2O2含量以及抗氧化酶活性的影响,利用HPLC分析外源钙对油菜幼苗镉胁迫下还原型谷胱甘肽(GSH)含量的变化情况.结果表明,镉处理浓度为150、300、450μmol·L-1时,5和10mmol·L-1Ca2+均能有效增加植株的生物量和根长,5 mmol·L-1Ca2+能显著减少油菜幼苗中MDA和过氧化氢(H2O2)含量,增强超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽转移酶(GST)的活性及GSH的含量.镉胁迫浓度为600 μmol·L-1时,施钙后油菜幼苗出现生物量低、MDA含量高、抗氧化酶活性和GSH含量均下降,与CK相比差异不显著(P＞0.05).镉处理浓度≤450 μmol·L-1时,5 mmol·L-1Ca2+能明显缓解芥菜型油菜生长和生理所受胁迫,外源钙可作为减轻镉胁迫对油菜毒害的保护剂. 相似文献
8.
赭曲霉毒素A对BHK细胞毒害作用的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以叙利亚仓鼠肾细胞(BHK cell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量.结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用.染毒12 h后,2.5、5、10、20和40 μg·mL-1 OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P＜0.05),至染毒24 h,40 μg·mL-1 OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%.OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5 μg·mL-1剂量组外,其余各剂量组的彗尾DNA含量和拖尾率差异极显著(P＜0.01),40 μg·mL-1剂量组的细胞拖尾率是对照组的80倍.40 μg·mL-1 OTA处理BHK细胞24 h后检测到特征性的凋亡梯形条带,而对照组则未检测到.OTA作用于BHK细胞使细胞内SOD活力显著降低(P＜0.05),细胞培养液中MDA含量则显著升高(P＜0.05).OTA染毒24 h后,40 μg·mL-1 OTA剂量组细胞内SOD活力降低至对照组的25%,培养液中MDA含量较对照组增高了500%.上述结果表明:OTA对BHK细胞活力的影响与细胞内过氧化物的大量生成和抗氧化酶活力下降有关,且对细胞DNA造成损伤,引起细胞凋亡. 相似文献
9.
【目的】研究母鼠妊娠期铅镉联合暴露对新生鼠大脑bcl-2、Bax、c-fos mRNA表达的影响及N-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine, NAC）的保护作用。【方法】35只怀孕SD母鼠被随机分为7组,即A组为对照组（饮用蒸馏水）、B组为铅组（300 mg?L-1）、C组为铅+NAC组（300 mg?L-1 +20 mmol?L-1）、D组为镉组（10 mg?L-1）、E组为镉+NAC组（10 mg?L-1+20 mmol?L-1）、F组为铅+镉组（300 mg?L-1+10 mg?L-1）、G组为铅+镉+NAC组（300 mg+10 mg?L-1+20 mmol?L-1）。采用饮水染毒,染毒时间为21d,分娩后应用实时荧光定量PCR检测新生鼠大脑bcl-2、Bax、c-fos mRNA的相对表达。【结果】与对照组比较,各染毒组bcl-2 mRNA表达降低,除B组外,D组、F组均差异显著（P＜0.05）,Bax、c-fos mRNA表达显著升高（P＜0.05）,其中以F组作用最为明显;NAC拮抗组与相应染毒组比较,除C组bcl-2 mRNA表达与B组无显著性差异外（P﹥0.05）,其余各组差异显著（P＜0.05）;Bax、c-fos mRNA表达均显著降低（P＜0.05）。【结论】铅镉联合表现协同毒性效应,NAC对铅、镉致新生鼠大脑凋亡基因表达异常引起的脑细胞凋亡具有明显的保护作用。 相似文献
10.
泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选 总被引：1，自引：1，他引：0
以豫杂一号泡桐为材料,通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500 ng模板DNA,3 U的Pst 1和Mse I,在37℃下双酶切3 h;20μL最佳连接体系中为酶切产物15 μL,0.25 μmol·L-1Pst I接头,2.5 μmol·L-1 Mse I接头,1 μL 10×T4 Buff-er,2 U T4连接酶,22℃连接18 h;20 μL最佳预扩反应体系中5 μL稀释10倍的连接产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,250 μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.20 μL最佳选择性扩增反应体系中5 μL稀释20倍预扩增产物,100 μmol·L-1dNTP,2 U Taq酶,350 μmol·L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT),2 μL 10×PCR Buffer.最后,筛选出了97对适宜于泡桐AFLP分析的引物. 相似文献
11.
二氢杨梅素诱导MDA-MB-231细胞凋亡 总被引：5，自引：0，他引：5
为了探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制,利用倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测DMY对MDA-MB-231细胞的致凋亡能力和细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位(ΔΨm)的改变,用蛋白质印迹(Western blotting)分析检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的变化。结果表明:MDA-MB-231细胞随DMY质量浓度加大而变圆变小,细胞存活数减少;流式细胞仪检测显示随DMY质量浓度的增加,DMY对MDA-MB-231细胞有促凋亡作用,胞内钙离子浓度逐渐增加,而线粒体跨膜电位(ΔΨm)逐渐减少;Western blotting结果显示DMY可诱导MDA-MB-231细胞中caspase-3和caspase-9蛋白质活化,并呈现浓度依赖关系。表明DMY可通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡。 相似文献
12.
[目的]超低温保存后花粉生活力呈多种变化情况,已有研究表明活性氧(ROS)是超低温保存后花粉生活力变化的主要原因之一.因此,本研究探讨液氮冻存后花粉生活力与ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡间的关系,以进一步揭示ROS在超低温保存后花粉生活力变化中的作用机制.[方法]以芍药'粉玉奴'的花粉为材料,对比分析超低温保存不... 相似文献
13.
[目的]比较不同粒径(15、30、100 nm)纳米二氧化硅(nano-SiO2)和常规二氧化硅(Micro-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)生长的抑制作用及凋亡的影响。[方法]采用不同浓度(2.5、5、10μg/ml)不同粒径(15、30、100 nm)的nano-SiO2和10μg/ml的Micro-SiO2(1～5μm)染毒体外培养的HaCaT细胞24 h,同时设溶剂对照组(nano-SiO2和Micro-SiO2的分散液染毒组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HaCaT细胞暴露于不同浓度、不同粒径的nano-SiO2后的细胞活力,用Annexinⅴ-PI双染法和Hoechest33342染色法测定细胞凋亡情况;使用2’,7’-二乙酰二氯荧光素荧光探针检测细胞内活性活性氧(ROS)水平。[结果]不同粒径的nano-SiO2纳米对HaCaT细胞的半数抑制浓度分别为(19.4±1.3)、(27.7±1.5)、(35.9±1.6)μg/ml。当染毒浓度固定时,随着nano-SiO2粒径的减小,凋亡率逐渐增加。当粒径固定时,胞内ROS的水平也随着nano-SiO2浓度的增大而增高。相关分析表明,细胞存活率和凋亡率与胞内活性氧的水平的相关性分别为-0.952和0.898(P<0.01)。[结论]nano-SiO2能抑制HaCaT细胞生长并可诱导其凋亡,这种现象的发生可能与胞内产生的活性氧水平有关。 相似文献
14.
通过地塞米松体内给药建立小鼠胸腺细胞凋亡模型,普通光镜下观察凋亡细胞形态学改变并统计凋亡率,结合琼脂糖凝胶电泳检测,定性定量研究不同浓度聚乙二醇1000VE琥珀酸酯(TPGS)对胸腺细胞凋亡的影响。结果表明,TPGS能够抑制地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡,降低凋亡率,该抑制作用呈现剂量依赖性,在低浓度(1倍需要量和5倍需要量)下最为显著,当浓度升高至10倍需要量和20倍需要量时,凋亡率与阳性对照组无显著差别。 相似文献
15.
[目的]探讨槲皮素对肝癌细胞株CBRH-7919增殖及线粒体膜电位的影响。[方法]体外培养肝癌CBRH-7919细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶(APA)法检测OD405;倒置显微镜观测CBRH-7919细胞形态变化;Rhodamine 123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)变化。[结果]槲皮素对肝癌CBRH-7919细胞有明显的增殖抑制作用,并与剂量和作用时间成正比;光学显微镜下可见槲皮素作用后细胞密度明显降低;经10μg/ml槲皮素作用122、4、48 h后,流式细胞术检测到Rhodamine 123染色弱荧光细胞百分比逐步增加,线粒体膜电位下降。[结论]槲皮素体外能抑制肝癌细胞株CBRH-7919增殖,引起线粒体膜电位下降。 相似文献
16.
[目的]探讨槲皮素对肝癌细胞株CBRH-7919增殖及线粒体膜电位的影响。[方法]体外培养肝癌CBRH-7919细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶(APA)法检测OD405nm;倒置显微镜观测CBRH-7919细胞形态变化;Rhodamine123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)变化。[结果]槲皮素对肝癌CBRH-7919细胞有明显的增殖抑制作用,并与剂量和时间成正比。光学显微镜下可见槲皮素作用后细胞密度明显降低。经10μg/ml槲皮素作用12、24、48h后,流式细胞术检测到Rhodamine123染色弱荧光细胞百分比逐步增加,线粒体膜电位下降。[结论]槲皮素体外能抑制肝癌细胞株CBRH-7919增殖,引起线粒体膜电位下降。 相似文献
17.
为探讨姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.以人肝癌细胞系HepG2细胞为对象,使用流式细胞仪检测姬松茸多糖对HepG2细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,激光共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i的变化.结果表明姬松茸多糖能显著诱导HePG2细胞凋亡,并不同程度降低HepG2细胞线粒体跨膜电位,升高细胞[Ca2+]i,造成钙稳态失衡.姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡的机制与降低线粒体膜电位,造成细胞内Ca2+超载有关. 相似文献
18.
[目的]研究食品添加剂纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用。[方法]采用不同浓度（5、10、25、50、100、250μg/ml）的纳米氧化锌对HL-7702细胞进行染毒;光学显微镜下观察细胞的形态学变化;采用MTT法检测纳米氧化锌对HL-7702细胞生长活性的影响;应用荧光探针活性氧检测技术检测细胞内活性氧（ROS）的生成情况。[结果]纳米氧化锌可引起HL-7702细胞形态变化;MTT检测显示,纳米氧化锌对HL-7702细胞的生长活性具有明显的抑制作用;荧光探针活性氧检测发现,染毒后HL-7702细胞内ROS的生成量增加。[结论]纳米氧化锌作为一种新型锌源,建议控制其添加量或使用量。 相似文献
19.
为了建立一种便捷、经济、耗时短并能应用于水稻细胞凋亡研究的体系,运用研磨法建立水稻细胞(团)体系,该体系经过500mg/L水杨酸、250mmol/LCaCl2、ZnCl2和MgCl2诱导,应用琼脂糖凝胶电泳检测.结果显示,体系在水杨酸诱导6h后,便出现小于1kb的小片段,并随着时间的延长,小片断显著增加.CaCl2、ZnCl2和MgCl2诱导4h后,均能使DNA片段化,并产生典型的DNALadder现象,由此可以初步断定已建立起细胞凋亡体系. 相似文献