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1.
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合、筛选,最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系1B3、3C2、4A5,染色体平均记数为89对、92对、90对,间接ELISA检测1B3、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1/4000、1/1000、1/4000,腹水效价分别为2×10~4、2×10~5、2×10~5。通过间接ELISA做病原检测,这3株单抗不与猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪轮状病毒发生交叉反应,而与传染性胃肠炎病毒显示良好的特异性。用制备的单抗通过间接免疫荧光做病原检测,发现染色后TGEV感染的细胞培养物在胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,所制备的抗重组TGEVM蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为TGEV准确快速的病原诊断和TGEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。 相似文献
2.
旨在建立一种在感染初期对猪传染性胃肠炎(TGE)进行快速准确诊断的方法。本试验使用猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)经蔗糖梯度离心后用于免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,经4次亚克隆及Western blot、间接免疫荧光(IFA)鉴定后筛选出1株能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3G11。通过试剂盒将3G11单抗与辣根过氧化物酶(HRP)偶联,然后以HRP-3G11作为一抗,利用免疫酶组织化学法检测小肠组织病料中的TGEV。结果表明：HRP-3G11作为一抗经镜检可见特异性红棕色沉淀,即HRP-3G11单抗可以与小肠组织中病毒发生特异结合,试验过程耗时少且可视化显色结果优于未标记一抗使用酶标二抗组,证实了标记后单抗HRP-3G11可以作为直接检测抗体应用于免疫酶组织化学法中检测用小肠组织中的TGEV。 相似文献
3.
以禽流感H5亚型病毒分别免疫BABL／C小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA检测细胞上清液，结果获得了3株抗禽流感H5亚型病毒特异性单克隆抗体，分别命名为186，1D4，7D1；其中1D4株为抗禽流感H5亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株．186株和7D1株为针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体细胞株。经3次亚克隆后，100％杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒抗体的能力。这些单克隆抗体小鼠腹水ELISA效价为10^5，HI效价为2^11-12。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与相应的禽流感病毒株发生特异性反应，而不与鸡新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、鹅副粘病毒等反应。所有这些单抗在禽流感诊断中将发挥重要作用。 相似文献
4.
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆,获得2株稳定分泌抗TGEV重组S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为C7C882和B5G8G7,其染色体平均计数均为88±10对,制备腹水抗体效价分别为1:2×105和1:104,分泌抗体亚类均为IgM型.2株杂交瘤细胞上清与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)均无交叉反应,与TGEV感染细胞经间接免疫荧光检测均呈黄绿色荧光. 相似文献
5.
抗猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及其部分特性鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合,间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法进行细胞克隆,经过3次克隆筛选,最终获得一株分泌抗重组TGEV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(命名为E10F10D5),其染色体平均记数为87±10对,间接ELISA检测制备的腹水效价达1:12 800,以全病毒为抗原对杂交瘤细胞(E10F10D5)产生的腹水进行Westernblot分析,该腹水识别病毒结构蛋白质分子量约43ku,即TGEV天然N蛋白. 相似文献
6.
为制备猪δ冠状病毒（PDCoV）N蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于临床样品中PDCoV抗原的免疫组织化学（IHC）检测,本研究以原核表达的PDCo V N蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,基于纯化的N蛋白建立的间接ELISA方法筛选获得稳定分泌N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体的免疫反应特异性、亚类进行系统鉴定。结果显示：通过3次亚克隆筛选获得8株可分泌PDCo V N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA和Western blot分析,证实制备的单克隆抗体均与猪δ冠状病毒反应,且不与猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）反应,特异性良好。单克隆抗体亚类鉴定结果表明,1A11、3C6、1E7、1E12株单克隆抗体属Ig G1型,4F3、2A3株单克隆抗体为Ig G2a型,3E4单克隆抗体为Ig M型,8株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用1A11单克隆抗体对PDCo V、PDEV、TGEV感染猪的空肠、回肠组织进行IHC检测,结果表明1A11能与感染PDCo V的组织发生特异性免疫反应,而不与感染PDEV和TGEV的组织发生... 相似文献
7.
用猪传染性胃肠炎（TGEV）华毒株弱毒H－155代感染iBRS2传代细胞，通过冻融、PEG6000沉淀、蔗糖密度梯度离心提纯制备的TGEV抗原，免疫BALB／C小鼠，取血清抗体阳性的免疫鼠的脾细胞，在50％PEG4000作用下，与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤，用ELISA间接法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释法进行3次克隆，获得了2株分泌抗TGEV的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其所分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类、特异性、中和反应性等特性作了初步鉴定。 相似文献
8.
采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)尿囊液作为免疫原免疫6～8周龄Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗SIV-H3N2的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价可达1×106。通过抗体亚型测定,间接免疫荧光试验及免疫印迹试验分析鉴定,该7株单抗均为抗H3N2亚型SIV的特异性单克隆抗体,而且与其他亚型猪流感病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒和猪瘟病毒等均无交叉反应,为H3N2亚型SIV的鉴别诊断奠定了基础。 相似文献
9.
TGEV-PL株在PK15细胞上增殖,经浓缩纯化获得TGEV抗原,建立了间接ELISA检测方法.应用杂交瘤技术获得3株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞.经检测其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤细胞染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,腹水抗体效价达1∶6×104,与6株毒(菌)株的抗原之间无交叉反应.经阻断试验证实,其分泌的McAb能识别抗原是TGEV所特有的抗原决定基. 相似文献
10.
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）重组M蛋白免疫新西兰兔，制备免疫血清，用间接ELISA测得免疫血清效价达1：14000。通过间接ELISA进行病原检测，表明制备的免疫血清与全病毒具有较好的特异性。用免疫血清进行病原间接免疫荧光检测，TGEV感染的细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光，且荧光强度强，而未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光，表明用所制备的抗TGEV重组M蛋白的免疫血清进行病原间接免疫荧光检测具有较高的特异性，为TGEV准确快速诊断与鉴别奠定了基础。 相似文献