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1.
银杏叶片RNA提取方法的研究 总被引：3，自引：2，他引：1
为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
2.
为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明：改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。 相似文献
3.
《中国农学通报》2020,(8)
为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明:改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S r RNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。 相似文献
4.
《分子植物育种》2016,(4)
水茄果实中富含多糖、蛋白、色素和其他代谢物质,影响其总RNA提取的质量。本研究中比较Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法和两种试剂盒法5种方法提取的水茄果实总RNA,用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性,Onedrop光谱仪检测总RNA的浓度和纯度。结果表明:改良Trizol法最为有效,该方法提取的总RNA在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带,OD_(260nm)/OD280nm值在1.8~2.1之间、OD_(260nm)/OD_(230nm)的比值大于2.0;改良CTAB法获得的RNA质量较好,但步骤较为繁琐,耗时长;Trizol法和试剂盒法得到总RNA浓度较低。RT-PCR试验进一步表明,以改良Trizol法获得的总RNA可用于基因分离,所得条带清晰,与目的片段大小一致且比对正确。 相似文献
5.
百合总RNA提取方法的比较和分析 总被引：9，自引：1，他引：8
以卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花的花蕾为材料,比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA的效果,结果表明,SDS改进法能有效去除多糖,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD260/OD280值介于1．7-2．2之间,卷丹RNA得率为132．52μg／g,富田RNA得率为186．88μg／g。进一步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎的RNA,同样可以获得完整的纯度高的RNA,其中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD260／0D280值介于1．7～2．2之间,说明此方法适用于百合各个组织RNA的提取。经RT—PCR获得了花发育基因的特异性条带,说明用SDS改进法从百合中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于百合进一步的分子生物学研究。 相似文献
6.
草莓果实总RNA提取方法的比较 总被引：2，自引：1，他引：1
为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。 相似文献
7.
野生香蕉叶片总RNA提取方法研究 总被引：3，自引：1，他引：2
采用TRIZOL试剂盒法、RNAsio试剂法和改良CTAB法提取香蕉叶片总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的质量。研究结果表明：改良CTAB法提取的RNA具有28SrRNA和18SrRNA两条清晰的条带,OD260／OD280在1.80-1.95之间,OD260／OD230在1.75-2.10之间,具有较高的纯度;其它两种方法获得的RNA纯度不够,降解严重。将提取的RNA分别逆转录成cDNA,经RT-PCR扩增,只有改良CTAB法出现清晰的条带,进一步证明改良CTAB法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
8.
百合鳞片总RNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
为了筛选出适合百合鳞片的总RNA的提取方法,本研究以东方百合品种Siberia的鳞片为材料,比较了Trizol法、改良Trizol法、RNA提取试剂盒以及改良CTAB法提取RNA的效果。结果表明:Trizol法、改良Trizol法及RNA plant plus Reagent提取试剂盒均不能提取到完整的RNA;离心柱型植物总RNA提取试剂盒存在DNA污染;改良CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5～2倍,D260/D280值都在1.9～2.1之间,D260/D230值大于2,两个样品的平均得率分别为103.57μg/g和119.21μg/g,说明此方法适合百合鳞片RNA的提取。RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从百合鳞片中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学实验。 相似文献
9.
利用CTAB法、SDS法、Trizol法,从绿豆叶片中提取了总RNA：利用改进的GT法从绿豆叶、茎和子叶中提取了总RNA,提取结果通过凝胶电泳和紫外吸光光度值检测。结果显示：用改良的GT法提取的总RNA,凝胶电泳图上28S条带是18S条带亮度的两倍以上：而用其它3种方法提取的总RNA电泳条带不如GT法提取的总RNA清晰。用GT法从绿豆叶片中提取的总RNA的A260/A280值为1．94,可以用于RT-PCR、DDRT-PCR和Northern杂交等实验。通过RT-PCR,得到绿豆钙调蛋白基因约450bp,从而进一步检验了提取的总RNA的质量。改良的GT法可以认为是一种简便、快速的提取绿豆RNA的方法。 相似文献
10.
剑麻不同组织RNA提取方法比较分析 总被引：6，自引：0，他引：6
本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。 相似文献
11.
高质量提取银杏种仁总RNA的改良方法 总被引：3，自引：1，他引：2
提取高质量的RNA是获取银杏(Ginkgo biloba L.)种仁药用蛋白基因以及从基因表达水平研究林木良种银杏种子发育和后熟的必要条件。现有提取方法难以获得高纯度的银杏种仁总RNA。本研究旨在改良现有提取方法,以满足抽提富含蛋白质、多糖、多酚等特殊材料高质量RNA的需要。文中将改进的CTAB法和Trizol一步法相结合,优化了试剂组合并改进实验细节,从银杏种仁中获得了高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28SrRNA、18SrRNA条带,亮度满足2：1比例关系。OD260/OD280比值在1.85~2.00之间。将提取的总RNA用于Northern杂交分析可检测到清晰的信号,而用于RT-PCR和5'-RACE也可获得清晰的目的条带。说明这种方法获得的总RNA完整度和纯度很高,完全可以满足下游分子生物学实验要求。 相似文献
12.
高质量的小麦种子总RNA的快速提取方法 总被引：5，自引：0，他引：5
提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究小麦种子发育的必要条件。现有提取方法难以快速得到高纯度的小麦种子总RNA。本试验将冷酚法和Trizol一步法相结合,在5h左右就可得到高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,OD260/DO280比值在1．90-2．00之间。将提取的总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,在cDNA—AFLP分析上可得到清晰的条带。说明这种方法获得的总RNA纯度和完整度非常高,完全满足分子生物学研究的要求。 相似文献
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三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究 总被引：2，自引：1，他引：1
为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果.结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染.用TRJzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染.若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质.可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选. 相似文献
14.
拟南芥和烟草幼嫩种子RNA不同提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
采用4种方法分别对拟南芥和烟草幼嫩种子的总RNA进行了提取和分析。结果表明,其中3种方法所提取的总RNA均能满足一般的下游操作。Trizol法提取的RNA质量低。CTAB-异丙醇法提取的总RNA产量最高,并具有提取步骤少,操作时间短,价格便宜等优点,可用于大量样品提取;百泰克试剂盒提取时间短,可在常温下操作;CTAB-LiCl法提取的总RNA基本无基因组DNA的污染,但是不利于小分子RNA的沉淀。经紫外分光光度计检测,3种方法提取的总RNAOD260/OD280均在1.80~1.97,表明蛋白质及其它有机溶剂的污染很少,OD260/OD230在2.03~2.37,表明盐类小分子的污染也较少;电泳检测28S rRNA和18S rRNA条带清晰,28S rRNA的亮度基本为18S rRNA的2倍,所提取的总RNA质量较高。将提取的总RNA 用于反转录,可获得高质量的cDNA,ds cDNA清晰的分布在100 bp~3000 bp之间。 相似文献
15.
3种烟草RNA高效提取方法的比较 总被引：2，自引：1，他引：1
为了寻求烟草叶片RNA高效提取方法,为烟草分子生物学研究提供理论基础,试验以烟草叶片为材料,采用试剂盒法、Trizol法、RNAiso法提取RNA,凝胶电泳和分光光度计检测确定高效、经济的RNA提取方法。结果表明：试剂盒法操作简单,但提取量较少;Trizol法方便快捷,但有部分蛋白质污染,并出现RNA降解现象;相比以上2种方法,RNAiso法提取的RNA浓度在100~500 ng/μL之间,A 260/A 280在1.8~2.0之间,条带清晰明亮,无RNA降解,且28 S条带亮度约是18 S的两倍;RT-PCR检测结果显示,RNAiso法提取的RNA可以扩增出目的基因,大小约2500 bp,与参考序列大小吻合,可用于后续的功能验证。因此,在烟草RNA提取方法比较中,RNAiso法较适合烟草叶片RNA提取,并已在很多实验室推广利用。 相似文献