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1.
大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定 总被引：11，自引：2，他引：11
以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物，发现冠状病毒样粒子，超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明，DXMV核酸类型为RNA，对氯仿、乙醚敏感，可耐受1％胰蛋白酶的作用，具有一定的耐酸性和耐热性，可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖，无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明，DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片，可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物，可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明，该病毒为犬冠状病毒，大熊猫可被犬冠状病毒感染。 相似文献
2.
上海株犬冠状病毒的分离鉴定及S基因的遗传进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从上海市某宠物医院临床表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过噬斑纯化、病毒理化特性检测以及动物回归实验和RT-PCR鉴定,证明所分离到的病毒为犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV),将其命名为CCV-SHdc株。根据Gen Bank公布的CCV S基因序列,设计合成4对特异性引物,利用RT-PCR成功扩增获得CCV-SHdc株S基因序列,同时进行序列测定和核苷酸系统发育进化树绘制。结果显示,CCV-SHdc株的S基因序列全长4 364 bp;该毒株与日本分离的CCV 5821株亲缘关系最近,处于同一分支,与意大利分离的CCV 23/03和CCV Elmo/02株亲缘关系较远。核苷酸与氨基酸同源性分析表明,CCV-SHdc株与CCV 23/03和CCV Elmo/02株可能属于不同基因型,已有很多点发生突变,这种突变的累积有可能引起病毒毒力的变化。 相似文献
3.
核酸探针检测犬冠状病毒方法的建立和初步应用 总被引：2，自引：0，他引：2
以^32P标记犬冠状病毒特异性RT—PCR及产物制成核酸探针，与CCV NL-18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做10～10000倍稀释的CCV NL-18株反转录产物杂交，进行核酸探针的敏感性和特异性试验。结果表明，该探针仅与CCV HLl8株反转录产物呈阳性杂交，与对照病毒和正常细胞反转录产物均呈阴性反应。初步应用试验结果，该探针可与国内CCV分离病毒YSl、CI1株杂交，且可从8份腹泻犬粪便中检出5份CCV阳性病料。本研究为在我国开展犬冠状病毒感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感、特异的检测方法。 相似文献
4.
大熊猫犬冠状病毒部分S基因的克隆与全S基因序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒，经鉴定为犬冠状病毒（命名为CCV DXMV）。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2，以及半套式引物SF3-SR3、SR13、SF13、SF4-SR4和SF14，分段扩增了CCVDXMV株部分S基因，得到了368bp、792bp、737bp、1178bp和985bp5个基因片段。将纯化的RCR产物分别克隆到pGEM—T载体中，通过筛选和鉴定，获得了5个阳性重组质粒。将重组质粒送生物公司测序，将测得的基因序列与先前测定的该株病毒部分S基因序列，拼接成全S基因序列，并与其它株CCV及TGEV HN2002和FIPV79—1146株的S基因序列进行分析比较，绘制进化树。结果表明，该株病毒与CCV K378株的同源性最高，达到99．4％；而与CCV 23／03株的同源性最低，为56．9％；与FIPV和TGEV分别有90．4％和82．1％的同源性。 相似文献
5.
犬冠状病毒 ( CCV)是引起犬发生冠状病毒性肠炎的一种重要病原 ,由于该病毒在普通细胞上培养需较长时间 ( 3～ 6天 )才出现病变 ,且病变不明显 ,不易观察 ,难以广泛开展该病毒的鉴定、克隆、滴定及中和抗体的检测等研究工作。本实验以琼脂糖作为覆盖物 ,在 DK细胞上 ,对该病毒蚀斑的形成条件进行了摸索 ,建立了犬冠状病毒的蚀斑形成方法 ,并以该方法进行了 CCV YS1株的克隆纯化 ,结果较为理想 ,现报告如下。1 材料与方法1 .1 病毒株 犬冠状病毒 YS1株 ,从 CCV肠炎犬病料中分离获得 ,人工感染犬试验 [1]表明其为一株免疫原性良好的… 相似文献
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RT-PCR检测犬粪便中的冠状病毒 总被引：1，自引：2，他引：1
根据犬冠状病毒(caninecoronavirus, CCV) 的S基因序列, 用计算机设计并合成了1对引物P1、P2, 以此引物及以从美国进口的CCV疫苗的反转录产物为模板, 初步建立了检测CCV的RT PCR。将纯化的PCR产物成功地克隆到pGEM T easy载体中, 鉴定、测序并进行同源性分析。结果表明, 与1 71和UCD 1株同源性分别为91 5%和94 3%。该RT PCR能对疫苗中CCV及CCV参考株USCV B1的S基因进行特异性地扩增,长度为575bp, 对犬的其他病毒及CRFK细胞未能扩增出任何片段, 该RT PCR能检测出0 5μLCCV培养液/2g粪便。用建立的RT PCR在上海对50条犬粪便进行检测, 结果表明CCV阳性6例。本研究建立了检测犬粪便中的CCV的RT PCR, 能用于犬冠状病毒流行病学调查。 相似文献
7.
某犬群发生具有呼吸道和消化道症状的传染病,86只幼犬发病,治愈65只,死亡21只.为确诊病原,用MDCK细胞,从死亡犬肠道病料中分离到2株病毒,经理化学鉴定、动物复归试验、电镜检查、PCR检测证明为犬冠状病毒和犬腺病毒2型,定名为CCV-KM和CAV2-KM,确认此次犬群发病由CCV和CAV2混合感染所致.其中对CCV的分离采用含CCV和CAV2的混合感染病料攻击耐过CAV2的幼犬,导致幼犬单纯感染CCV发病后采集的病料.动物试验表明,CCV-KM株可以导致幼犬发病,具有较强的毒力;CCV-KM能被较高浓度的抗CCV1-71参考毒株的血清中和,而抗CCV-KM的血清却不能中和CCV1-71毒株,说明两者在抗原性和致病性上存在差异;基因测序结果表明,CCV-KM的M基因212 bp序列同其他已知CCV的基因序列差异较大,在进化树的位置上介于CCVⅠ型和CCVⅡ型之间,较偏向CCVⅠ型.提示CCV-KM株可能是一个新的变异株. 相似文献
8.
《现代畜牧兽医》2020,(10)
为研究上海地区犬细小病毒的流行情况,采集疑似犬细小病毒感染犬的肠内容物,无菌处理病料后同步接种猫肾脏F81细胞,盲传至第5代出现细胞病变,从肠内容物中分离出1株病毒。采用细胞培养病变观察、病毒形态学鉴定、直接免疫荧光抗体检测、细胞敏感谱试验、红细胞凝集试验、部分理化特性鉴定和VP2序列的测定等方法,鉴定分离株为犬细小病毒,命名为CPV-2/canine/Shanghai/01/2018。该病毒的TCID50为105.3/0.1 mL,血凝效价为28,病毒测得VP2基因序列的全长为1 755 bp。与已知序列比较,其核苷酸同源性为98.3%～99.1%,氨基酸同源性为97.3%～99.3%。对其VP2基因的氨基酸序列进行分析,确定该细小病毒属于CPV-2c亚型。研究提示,上海地区CPV存在不同的基因亚型,在进行疫苗免疫时应当选择正确的疫苗株。 相似文献
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早在 8 0年代中期 ,国外就已研制出弱毒苗和灭活苗对犬进行免疫研究 [1,2 ] ,国内开展犬冠状病毒( CCV)的研究起步较晚 ,但发生 CCV性肠炎的报道很多 ,且远比国外报道的严重。 1 997年 ,胡桂学等 [3 ]利用犬胎原代细胞从一肠炎犬病料中成功分离获得 1株 CCV强毒 YS1株 ,随后我们采用静水压和 BEI灭活病毒的方法对该株强毒进行灭活 ,研制出两种新型的犬冠状病毒灭活苗 ,并对犬进行了免疫试验 ,同时我们还应用反转录 -聚合酶链反应( RT- PCR)技术对免疫后犬组织中的犬冠状病毒进行检测 ,并设立了传统的犬冠状病毒福尔马林灭活苗免疫犬… 相似文献
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犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较 总被引：10，自引：0，他引：10
以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶ ＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株形成的细胞病变相似；电镜负染和超薄切片观察，分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子，并形成胞浆内包涵体；经理化学、生物学鉴定，濉有ＣＣＶ的特性；间接免疫荧 相似文献
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采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。 相似文献
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Two pairs of PCR primers were designed according to sequence of canine distemper virus （CDV） and canine coronavirus （CCV） from GenBank, respectively, which could amplify 550 bp fragment for CDV and 225 bp fragment for CCV. The products of PCR were cloned to pMD18-T for sequencing, which proved to be specific. Positive plasma were developed for standard DNA, and the sensitivity result of duplex PCR showed that the method could amplify 0.1 ng/μL nucleic acid for both of viruses. The result of rudimentary application showed that the method was specific, sensitive, efficient, and was a new detecting method for the mixed infection of CDV and CCV. 相似文献
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Isolation and identification of a canine coronavirus strain from giant pandas (Ailuropoda melanoleuca) 总被引：1，自引：0，他引：1
Feng-Shan Gao Gui-Xue Hu Xian-zhu Xia Yu-Wei Gao Ya-Duo Bai Xiao-Huan Zou 《Journal of veterinary science (Suw?n-si, Korea)》2009,10(3):261-263
Two giant pandas (Ailuropoda melanoleuca) died of unknown causes in a Chinese zoo. The clinical disease profile suggested that the pandas may have suffered a viral infection. Therefore, a series of detection including virus isolation, electron microscopy, cytobiological assay, serum neutralization and RT-PCR were used to identify the virus. It was determined that the isolated virus was a canine coronavirus (CCV), on the basis of coronavirus, neutralization by canine anti-CCV serum, and 84.3% to 100% amino acid sequence similarity with CCV. The results suggest that the affected pandas had been infected with CCV. 相似文献
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B J Tennant R M Gaskell D F Kelly S D Carter C J Gaskell 《Research in veterinary science》1991,51(1):11-18
The pathogenesis of canine coronavirus (CCV) infection in 10-week-old puppies was studied up to 14 days after oronasal inoculation. Mild diarrhoea was seen from three to 11 days after inoculation, approximately coincident with faecal virus shedding. Virus was initially isolated from the tonsils on day 3, and then from both small and large intestinal tissues up to 14 days after inoculation. Virus was also isolated from liver and lung. Histological changes were not seen in any tissues, but CCV antigen was detected, using a peroxidase antiperoxidase staining technique, mainly in epithelium overlying gut-associated lymphoid tissue. Virus neutralising antibody was first detected on day 10. Specific anti-CCV IgM was first detected in plasma three days after inoculation and IgG on days 4 to 7. Small amounts of anti-CCV IgG, IgM and IgA were detected in duodenal secretion, but none in bile. 相似文献
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应用纯化后的犬冠状病毒 (CCV)YS1株细胞培养致弱的弱毒 (CCVYS1V60 ) ,经口鼻和肌肉接种CCV ,SN抗体小于 1∶2的易感犬作安全试验 ,结果未见任何CCV临床症状与病理解剖学改变 ;用不同剂量的该CCV弱毒分组免疫CCV易感犬 ,经SN抗体测定与用CCV强毒攻毒试验 ,结果SN抗体达 1∶60以上的犬 90 %以上可获得免疫保护 ;应用该CCV弱毒分别免疫母源抗体达 1∶4和 1∶8的 2组试验犬 ,第 1次免疫 1 4d后SN抗体均未见升高 ,追加 2～ 3次免疫后 ,SN抗体才逐渐上升至 1∶60以上的免疫保护水平 ;用CCV易感犬和猫肾传代细胞 (CRFK)分别将该CCV细胞培养弱毒连续传 5代和 2 0代 ,结果对犬仍然安全 ,免疫原性也未见下降 ;与犬瘟热病毒 (CDV)、犬传染性肝炎病毒 (ICHV)和犬细小病毒(CPV)弱毒作免疫互扰试验 ,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异 ;该毒的免疫期在 1年以上 ,- 2 0℃冻结保存的保存期为 9个月。 相似文献
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Monospecific antisera were prepared in rabbits against canine coronavirus (CCV) and transmissible gastroenteritis virus of pigs (TGEV), and in 24 pigs and 3 cats against TGEV alone. Neutralizing antibody titres were higher for the immunizing than the heterologous virus, although cross-neutralization usually was detected. This confirmed that CCV and TGEV are distinct, but antigenically related coronaviruses. In sera from 41 dogs, CCV-neutralizing titres were on average 2.7 fold higher than TGEV-neutralizing titres, suggesting that CCV was the causal agent. Sera from 29 cats in colonies with feline infectious peritonitis (FIP) and known to contain TGEV-neutralizing antibody, were found to have titres 12.3 fold higher against CCV. The FIP virus (FIPV) is probably more closely related to CCV than TGEV as judged by antigens involved in virus neutralization.Antisera to two isolates of bovine coronavirus, three isolates of haemagglutinating encephalomyelitis virus, seven strains of avian infectious bronchitis virus and the 229E strain of human coronavirus all failed to neutralize CCV and TGEV. Thus CCV, TGEV and probably FIPV fall into a group of antigenically related agents, separable from other members of the family Coronaviridae, by both virus neutralization and immunofluorescence tests. 相似文献