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黑木耳原生质体制备、再生及单核体荧光鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用正交试验研究了黑木耳原生质体制备、再生的最佳条件,结果表明,原生质体制备最佳条件是酶解温度31℃、酶浓度1．0％、菌龄5d、酶解时间4h,原生质体再生的最佳条件是酶解温度27℃、酶解时间4h、酶浓度1．5％、菌龄11d。稳渗剂种类对黑木耳原生质体再生率的试验结果表明,采用0．5mol／L蔗糖为稳渗剂,各黑木耳菌株的原生质体再生率最高。HW2号菌株原生质体经核染色其单核化比率最高;在荧光显微镜下观察菌丝核相,单、双核清晰可辨。 相似文献
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灵芝原生质体制备与再生条件的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
本文研究了不同酶浓度、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂及菌龄等对灵芝菌丝原生质体制备与再生的影响，结果表明，菌龄为60h的菌丝，采用浓度为2％的溶壁酶以0．6M的甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.5，30℃下酶解2h，当酶解液中湿菌体含量对0．1g/mL时，其原生质体数可达2^*10^7个/mL，且再生率达8．5％。 相似文献
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厚环乳牛肝的原生质体分离与再生 总被引：2，自引：0，他引：2
探讨了外生菌根菌耳环乳牛肝（Ｓｕｉｌｌｕｓｇｒｅｖｉｌｌｅｉ）的原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养基培养菌丝７天、宋用１．５％Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ，以０．６ｍｏｌ甘露醇为稳渗剂，在酶解液ｐＮ值５．５，温度３１℃，酶解４ｈｒ的条件下，每０．１ｇ湿菌丝的原生质体产量这６×１０￣６／ｍｌ。用ＳＯ培养基培养菌丝能提高原生质体产量，但再生率下降。综合产量和再生率考虑以ＭＹＧ培养菌丝效果较好。 相似文献
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枇杷原生质体植株再生 总被引：15，自引：0，他引：15
以普通批粑（价iobotlya joponica Lindl．）‘解放钟’等品种的不同发育期胚为材料诱导愈伤组织。起源于鱼雷形胚的胚性愈伤组织是游离原生质体的合适材料。最合适的游离原生质体的酶混合液为：l％纤继素酶＋2％果胶酶干！2％甘露醇，其原生质体得率高于L 07／g愈伤组织，原生质体成活率在 95％以上。原生质体经液体培养 4天后，出现第一次细胞分裂，并继续分裂，形成大量肉眼可见的小愈伤组织。愈伤组织在含3％山梨醇的培养基土培养3周后，其表面出现茎原基，并进一步发育成芽苗。芽苗移入生根培养基后生成完整植株。已获得解放钟和‘白梨’移栽成活的原生质体再生植株。 相似文献
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采用L16(4)正交设计,得出猪苓原生质体制备最佳条件是取菌龄7d的菌丝体,以2%溶壁酶,0.6mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定荆,在33℃下酶解3h,原生质体数达到2.62×107个·mL-1.原生质体再生的最佳条件是取菌龄5d的菌丝体.以2%溶壁酶,0.6mol·L-1蔗糖作为渗透压稳定剂,在27℃的条件下,酶解3h.猪苓原生质体再生的最佳培养基为葡萄糖10g、麦芽糖5g、酵母粉4g、0.6mol·L-1甘露醇、琼脂5.5g,定容到1 000mL.再生率可达到0.65%. 相似文献
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碘乙酰胺和罗丹明对不结球白菜子叶原生质体线粒体失活效果的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
以 91H秋 - 2 1(矮脚黄 )不结球白菜为试材 ,研究了碘乙酰胺 (IOA)和罗丹明 (R 6G)对子叶原生质体线粒体失活效果的影响。结果表明 ,0 .5mmol·L-1的IOA ,在 2 5℃条件下处理 2 0min(分 ) ,就能将植板率从 15 .0 %降到 6 .6 % ;1.0mmol·L-1的IOA ,在 2 5℃条件下处理 10min(分 )可使不结球白菜子叶原生质体失活。 40 μg·mL-1的R 6G ,在 2 5℃条件下处理 30min(分 ) ,可有效地抑制不结球白菜子叶原生质体的分裂和愈伤组织的形成。利用R 6G使原生质体线粒体失活 ,更有利于非对称细胞融合的进行 相似文献
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苹果原生质体分离培养及植株再生 总被引：22，自引：1，他引：21
以悬浮培养细胞及叶片作为分离原生质体的起始材料 ,对影响苹果原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。优化的原生质体培养基为 :改良MT 维生素C 5mg/L BA0 .5～ 1mg/L 2 ,4 D 0 .2mg/L 蔗糖 0 .6 5mol/L 谷氨酰胺 50 0mg/L CH 10 0mg/L ME50 0mg/L ;以葡萄糖代替蔗糖作渗透压调节物质效果好 ,且在培养过程中不需降压 ;适宜的低密度培养 (0 .5× 10 5/mL)可减少褐变。悬浮系原生质体培养 5～ 6d出现第 1次细胞分裂 ,15～ 2 0d形成多细胞团 ,4 0～ 50d形成肉眼可见的小愈伤组织。经培养诱导出不定芽 ,并进一步诱导生根长成完整植株。获得了平邑甜茶、M2 6 、嘎啦 3种基因型的原生质体再生植株。 相似文献
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以‘新梨7号’梨叶片为材料，探究影响原生质体分离的主要因素，制备高产优质的叶肉原生质体，并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶，0.1%果胶酶，0.4%离析酶，0.5 mol·L-1甘露醇，20 mmol·L-1 KCl,20 mmol·L-1 MES,10 mmol·L-1 CaCl2,1.0 g·L-1 BSA)中酶解12 h，可制备出产量为1.09×106 protopl·mL-1、活力为90%的原生质体。将1～2μg·mL-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40%PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h，可以观察到GFP绿色荧光信号，转化率可达40%。 相似文献
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野生茄子原生质体制备及电融合条件研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以野生茄子蒜芥茄（Solanum sisymbriifolium）和水茄（S. torvum）叶片为原生质体融合材料，对原生质体制备中酶解液浓度、酶解时间和电融合参数进行研究。结果显示：在0.3%（m/V）纤维素酶+0.1%（m/V）离析酶浓度条件下镜检观测到的单细胞数量最多；蒜芥茄酶解最适时间为14 h，原生质体产量达最大值15.06×106个 · g-1，水茄酶解最适时间为13 h，原生质体产量达最大值15.92×106个 · g-1；最适电融合参数为交流电场强度80 V · cm-1，作用时间10 s，直流脉冲强度1 250 V ·cm-1，作用时间 45 μs，次数1 次时，显微镜观测到融合效果最佳。 相似文献
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糙皮侧耳原生质体制备与再生条件 总被引：4，自引：3，他引：1
原生质体制备是通过体杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了糙皮侧耳原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养菌丝，以甘露醇为稳渗剂，用１．５％溶壁酶Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ进行酶解脱壁，在菌龄７天，酶液ｐＨＷＦＨＧ４．５，温度２８℃，酶解４ｈｒ的条件下原生质体产量最高（２０×１０＾６／ｍｌ，０．１ｇ湿菌丝），其再生率大于８％，菌丝培养前对接种物进行予切碎处理可进一步使产量提高约２倍，而再生率不并显著下降。 相似文献