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1.
【目的】建立昆明小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养体系,并鉴定其定向诱导分化为神经及脂肪细胞的能力。【方法】采用贴壁培养法分离培养昆明小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,通过相差倒置显微镜对其进行形态学特征观察;通过碱性磷酸酶（AKP）染色、Hoechst 33258染色、瑞士-姬姆萨复合染色检测MSCs的表型特征;通过β-ME诱导MSCs定向分化为神经样细胞,诱导后的细胞进行H.E染色,观察其形态学特性;通过NF-200、NSE免疫荧光细胞化学方法对已分化的神经样细胞进行鉴定和分化率分析;通过马血清诱导MSCs定向分化为脂肪细胞,观察其体外生长过程,并对诱导后的脂肪细胞进行油红O染色鉴定和分化率分析。【结果】分离得到的MSCs为成纤维样细胞,可见多个核仁,AKP染色阳性率为93.2%±1.5%;β-ME诱导后,MSCs分化为多种表型的神经细胞与原代培养的小鼠全脑细胞的外形相似,诱导后的神经细胞NF-200、NSE免疫荧光细胞化学染色均呈阳性,NF-200阳性率为85.4%±1.8%,NSE阳性率为82.7%±2.1 %;马血清诱导后,MSCs可100%分化为脂肪细胞,油红O染色为阳性。【结论】 采用贴壁培养法能够成功分离和培养昆明小鼠的MSCs,分离得到的MSCs具有定向分化成多种神经细胞和脂肪细胞的能力。 相似文献
2.
为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的表达。结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs。 相似文献
3.
采用组织块贴壁培养法分离获得野猪输卵管上皮细胞,并进行传代、冻存和复苏,并对其生物学特性进行观察研究.结果表明:组织块在培养2d开始有细胞爬出,7d左右可长满全皿,原代细胞形态呈菱形,其中混有少量成纤维细胞.传代2～3次,细胞生长状态最好,4代后细胞退化;细胞经冷冻保存再解冻后细胞死亡率上升.通过此方法能够获得较纯的野猪输卵管上皮细胞,为野猪资源保存和进一步的研究提供技术支持. 相似文献
4.
[摘要〕目的研究在体外培养和纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法〔方法采用改良全骨髓贴壁
方法,分离和纯化3-4周的大鼠BMSCs,镜卜连续观察细胞的形态变化、流式细胞仪鉴定其表面抗原CD45和CD29
均表达情况〔结果原代培养的细胞呈圆形和梭形等,24 h后大部分细胞均贴壁〔8-10 d可达800Ic-90%融合,纯化
青传代周期为6-8 d〔流式细胞术鉴定表明C D45阴性,CD29阳性〔结论改良全骨髓贴壁法可有效分离培养大鼠
}''J骨髓间充质干细胞,是一种比较理想的分离培养方法、 相似文献
5.
为建立梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSC)体外分离培养方法及对梅山猪BMSC的生物学特性进行分析,本研究采用全骨髓法分离培养并传代梅山猪BMSC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,以计数法检测细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期,细胞压片进行染色体分析,免疫细胞化学和RT-PCR法检测细胞表面标志和转录因子的表达情况,并检测成骨和成脂分化能力.结果显示:梅山猪BMSC体外生长良好,细胞形态呈成纤维细胞样,具有稳定分裂增殖能力;CD29、CD44、CD90等表面标志基因及Fou5F1、Sox2、Nanog等转录因子基因表达呈阳性,CD45、Lin28表达呈阴性;在特定诱导液作用下,BMSC可分化为成骨样细胞及成脂肪样细胞.采用全骨髓法成功分离培养出大量纯度较高的梅山猪BMSC,其生长状态良好,可作为后续BMSC相关研究的种子细胞. 相似文献
6.
目的:建立脐带MSCs分离提取的优化方法.方法:运用间充质干细胞的分离、组织块培养法、酶消化培养法、细胞形态学与增殖观察等方法.结果:获得了间充质干细胞分离提取的优化方法,观察结果表明,MSCs生长状态良好,其传代后细胞形态无明显变化,性质稳定. 相似文献
7.
安淮山羊骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了分离得到安淮山羊骨骼肌卫星细胞,成功构建山羊骨骼肌卫星细胞系,为相关研究提供实验材料。以安淮山羊背最长肌肌肉组织为材料,采取胶原酶和胰蛋白酶结合的二步消化法,结合差速贴壁法纯化原代骨骼肌卫星细胞。对骨骼肌卫星细胞中特异性基因Pax7用免疫荧光染色法及PCR扩增加以鉴定。通过分离、纯化,得到纯度较高的山羊骨骼肌卫星细胞,其形态为圆形,折光性强。培养一段时间后密度增大,细胞呈梭型。所得骨骼肌卫星细胞生长状态良好,具有较为一致的生长方式和形态特点。经免疫荧光染色法以及PCR鉴定发现细胞系中有Pax7基因的表达。通过上述材料和方法,可获得较纯的山羊骨骼肌卫星细胞,并稳定传代。 相似文献
8.
【目的】分离、培养奶山羊骨髓间质干细胞(MSCs),探讨其生物学特性,为心血管、神经退化,尤其是不育症患者的细胞移植治疗及相关细胞发育分化研究奠定基础。【方法】采用贴壁培养法进行MSCs的分离和培养,通过形态学观察、生长曲线测定、免疫细胞化学染色和RT-PCR技术等进行检测;并采用免疫细胞化学法对自发分化的细胞及定向诱导分化的神经样细胞、心肌样细胞、生殖样细胞进行检测,计算生殖样细胞的阳性率。【结果】分离得到的MSCs为成纤维样细胞,其增殖能力强,无致瘤性,已连续传代至22代;其表达胚胎干细胞(ESCs)的表面标记Oct4、Nanog、C-myc和TERT;MSCs形成类胚体自发分化的细胞表达3胚层特异标志基因AFP、β-ⅢTubulin和心肌α-actin;MSCs经β-巯基乙醇诱导,定向分化为表达Nestin和β-ⅢTubulin的早期神经样细胞,经5-氮胞苷(5-Aza)诱导,可定向分化为表达CT3及心肌α-actin的心肌样细胞,并出现肌管样结构,经维甲酸(RA)诱导,分化的细胞表达生殖细胞减数分裂前期的蛋白Vasa、Scp3和CD49f(α6整合素)等生殖细胞标记,其阳性率分别达到35.7%,24.0%和14.0%。【结论】自奶山羊骨髓分离得到MSCs,其具备间质干细胞的基本特性,并具有向神经细胞、心肌细胞、生殖细胞分化的潜能。 相似文献
9.
通过多重酶混合消化法和胰酶消化筛选法体外分离、纯化及培养绵羊脐带间充质干细胞(MSCs),并观察其生物学特性,以此建立绵羊脐带间充质干细胞的分离培养流程.试验采集健康的哈萨克羔羊脐带组织,剔除血管后剪碎,添加复合消化酶消化24 h得到细胞,胰酶消化法筛选除杂并观察细胞形态,绘制第1代、第5代及第10代细胞生长曲线;取第10代细胞检测其体外诱导成骨细胞能力和诱导成脂细胞能力,cAKP染色检测其分化状态.结果表明,获得的细胞经传代培养达10代后无明显的形态和增殖能力改变;体外诱导成骨细胞和成脂细胞试验证明其具有被诱导分化成骨细胞和脂肪的能力,cAKP染色证明其处于未分化状态.试验获得的绵羊脐带间充质干细胞能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞类似的生物学特征. 相似文献
10.
【目的】建立奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法,并对原代和传代细胞进行形态观察。【方法】分别采用组织块法和胶原酶消化法培养奶山羊原代乳腺上皮细胞,然后通过胰酶消化法结合反复贴壁法纯化细胞,免疫组化法鉴定细胞,并利用倒置显微镜观察细胞形态。【结果】组织块法和胶原酶消化法均能培养奶山羊原代乳腺上皮细胞;纯化获得的细胞呈卵圆形或多角形,形成典型的鹅卵石或铺路石样,且细胞角蛋白检测呈阳性;多次传代后乳腺上皮细胞出现分化现象,形态多样,增殖仍然旺盛。【结论】成功建立了一种简单易行、经济而实用的奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法。 相似文献
11.
Dezawa M Ishikawa H Itokazu Y Yoshihara T Hoshino M Takeda S Ide C Nabeshima Y 《Science (New York, N.Y.)》2005,309(5732):314-317
Bone marrow stromal cells (MSCs) have great potential as therapeutic agents. We report a method for inducing skeletal muscle lineage cells from human and rat general adherent MSCs with an efficiency of 89%. Induced cells differentiated into muscle fibers upon transplantation into degenerated muscles of rats and mdx-nude mice. The induced population contained Pax7-positive cells that contributed to subsequent regeneration of muscle upon repetitive damage without additional transplantation of cells. These MSCs represent a more ready supply of myogenic cells than do the rare myogenic stem cells normally found in muscle and bone marrow. 相似文献
12.
Chamberlain JR Schwarze U Wang PR Hirata RK Hankenson KD Pace JM Underwood RA Song KM Sussman M Byers PH Russell DW 《Science (New York, N.Y.)》2004,303(5661):1198-1201
Adult stem cells offer the potential to treat many diseases through a combination of ex vivo genetic manipulation and autologous transplantation. Mesenchymal stem cells (MSCs, also referred to as marrow stromal cells) are adult stem cells that can be isolated as proliferating, adherent cells from bones. MSCs can differentiate into multiple cell types present in several tissues, including bone, fat, cartilage, and muscle, making them ideal candidates for a variety of cell-based therapies. Here, we have used adeno-associated virus vectors to disrupt dominant-negative mutant COL1A1 collagen genes in MSCs from individuals with the brittle bone disorder osteogenesis imperfecta, demonstrating successful gene targeting in adult human stem cells. 相似文献
13.
[目的]建立牛胎肺间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）体外培养体系并对其进行生物学特性研究。[方法]取3～5月龄牛胎儿肺脏,得到MSCs。通过控制胰酶消化时间,去除难消化的上皮样贴壁细胞,获得纯化的牛肺MSCs,研究其形态、增殖情况及体外诱导分化潜能。[结果]牛胎肺MSCs可在体外扩增培养,传至24代以上,表达CD29、CIM4和CDl66,不表达CDM、CIM5和BOL-DR,并具有向成骨细胞诱导分化的潜能。[结论]从牛胎肺中可以分离出MSCs,可以在体外培养,并可诱导分化为成骨细胞。 相似文献
14.
分离鉴定羚牛骨髓间充质干细胞,为开展羚牛细胞治疗与体细胞核移植的深入研究提供有效载体。分离培养来源于羚牛骨髓的间充质干细胞;通过染色体G显带技术进行核型分析;利用流式细胞技术检测细胞表面标记物;通过定向诱导培养探究细胞的分化潜能。结果表明,羚牛骨髓间充质干细胞能够维持正常核型,对间充质干细胞特异性表面标记 CD105、CD73、CD90、CD166、CD44呈阳性,对 CD14(单核细胞和巨噬细胞标记物),CD19(b细胞标记物),CD34(造血干细胞标记物),CD45(泛白细胞标记物)和 HLA-DR均呈阴性,具有成脂、成骨与成软骨多向分化潜能。表明成功分离羚牛骨髓间充质干细胞并对其表面抗原与分化潜能进行鉴定,为羚牛生物多样性保护与内源物种间充质干细胞的应用研究奠定基础。 相似文献
15.
为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6~7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。 相似文献
16.
目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射＋MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结果辐射组和MSCs组在照射期间体质量下降,在观察期间内,小鼠体质量随时间逐渐增加,并且MSCs组小鼠体质量略高于辐射组.对照组小鼠胸腺指数随周龄增大而逐渐减小,辐射组和MSCs组小鼠随照射后时间的延长胸腺指数逐渐增加,MSCs组90 d时胸腺指数与对照组小鼠接近.通过观察病理结果可知,正常对照组小鼠胸腺组织皮、髓质结构清楚.辐射组小鼠30 d时胸腺组织淋巴细胞可见变性、坏死,细胞数量减少;60 d时辐射组可见胸腺淋巴细胞出现修复性再生与增生;90 d时辐射组可见胸腺瘤癌前病变.MSCs移植30 d时胸腺组织皮质高度增生,髓质缩小,皮髓质内可见新生的淋巴组织;60 d时胸腺结构趋于正常.结论 MSCs可促进损伤胸腺再生与修复. 相似文献
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The restoration of marrow in a mechanically depleted segment of rabbit femur is locally determined and apparently initiated by cells normally resident in bone. This conclusion follows from results of two types of radiation experiments: local x-irradiation of the femur shaft immediately before depopulation and x-irradiation of the total body with exception of the femur diaphysis which was depopulated either just before or after irradiation. In contrast to the rapid initiation of marrow restoration in an unirradiated femur, there was little regeneration during the first 3 weeks in an irradiated femur. Recovery of the shielded depopulated femur in the rabbit that otherwise received total-body irradiation was similar to that in the unirradiated animal. Hence, it would appear that the seeding of circulating hemic stem cells is not essential to repopulation and that cells with hematopoietic potential are present in osseous tissue. 相似文献
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Endogenous regulation of macrophage proliferative expansion by colony-stimulating factor-induced interferon 总被引：19，自引：0，他引：19
Stimulation of cultures of murine bone-marrow cells with specific macrophage growth factor (colony-stimulating factor I) resulted in the production of type I interferon. Neutralization of this endogenous interferon by antiserum directed against interferons alpha and beta resulted in a significant enhancement of mononuclear phagocyte proliferation from committed marrow precursors. The effect of the antiserum was lost in cultures depleted of adherent cells, an indication that an adherent regulatory cell (or cells) in the marrow limits mononuclear phagocyte proliferation by producing antiproliferative interferon in response to high levels of specific growth factor. 相似文献