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【目的】从云南栘叶片中提取高质量的总DNA,并建立稳定的SSR-PCR反应体系。【方法】以云南栘幼嫩叶片为材料,采用尿素法、改良尿素法、SDS法、CTAB法、MAGEN试剂盒法和磁珠试剂盒法提取总DNA,从中筛选提取云南栘总DNA的最佳方法;利用L16(45)的正交设计试验优化影响云南栘SSRPCR扩增体系的影响因子,建立云南栘SSR-PCR反应体系。【结果】改良尿素法为云南栘总DNA的最佳提取方法,提取的总DNA质量浓度、总量和A260/A280分别为382.64 ng/μL、38.26μg和1.87,且琼脂糖凝胶电泳的条带清晰明亮,说明DNA完整性好、质量浓度高。优化后的SSR-PCR扩增反应体系为：模板DNA30 ng,Taq DNA聚合酶0.5 U,引物1.25μmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs 2.5 mmol/L,10×PCR buffer 2.5μL,补水至25μL。【结论】改良尿素法能够从云南栘中提取高质量的总DNA,所建立的SSR-PCR反... 相似文献
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野生桃幼叶DNA提取方法的改良研究 总被引：2，自引：2，他引：2
以野生桃幼叶为材料,为适应AFLP分析要求,对常规SDS法、CTAB法、SDS-CTAB结合法以及改良CTAB法等4种基因组总DNA的提取方法的效果进行了比较研究。结果表明,常规SDS法难以去除桃幼叶组织中的蛋白质、多糖和酚类等杂质,使所提取的DNA呈黏稠状的浅褐色沉淀,难以溶解;CTAB法和SDS-CTAB结合法提取的桃基因组DNA,虽然蛋白质和酚类等杂质去除较干净,但对多糖类物质的去除能力仍然有限,且提取效果在品种间重复性较差;而改良CTAB法提取DNA完整性较好,杂质少,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。 相似文献
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以黄瓜白粉病菌为试验材料,比较分析了改良CTAB法、SDS法和真菌试剂盒法对黄瓜白粉病菌基因组DNA提取的效果。结果表明,CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA在纯度(R=A_(260 nm)/A_(280 nm))和产量上均优于SDS法和真菌试剂盒法,且杂质少。CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA产率为204.3μg/g,而SDS法和真菌试剂盒法分别为147.7、117.7μg/g,且方法产率之间差异极显著。采用CTAB法提取的DNA纯度较高,为1.969 6;SDS法和真菌试剂盒法提取的DND纯度较低,分别为1.832 2和1.507 9。 相似文献
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中药材附子基因组DNA提取方法研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。 相似文献
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对用 SDS法、尿素法、改良 SDS法、氯化苄和 CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较。结果表明 ,改良 SDS法提取的 DNA具有典型的天然 DNA分子的标准紫外吸收光谱特点 ,其 A2 6 0 /A2 80 为 1 .7～ 1 .9,A2 6 0 /A2 30 为 1 .8～ 2 .0 ,叶片的 DNA产量为 40 0μg/g。用该法提取的大白菜 DNA适于进行 RAPD分析。 相似文献
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提取大白菜基因组DNA的几种方法比较 总被引：5，自引：0，他引：5
对用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄和CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较,结果表明,改良SDS法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A20／A280为1．7－1．9,A260／A230为1．8－2．0,叶片的DNA产量为400μg/g。用该法提取的大白菜DNA适于进行RAPD分析。 相似文献
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改良CTAB法提取濒危药用植物绶草基因组DNA 总被引：3，自引：2，他引：1
以绶草的根、茎、叶和花为材料,采用改良CTAB法提取绶草基因组DNA,经紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对所提DNA的质量和纯度进行比较.结果表明,改良CTAB法(2.5 mmol/L NaCI、30 mmol/L EDTA、100 mmo/LTris-HC1、2%CTAB、2%β-巯基乙醇、2%PVP-40)适合绶草根的基因组DNA提取,几乎没有蛋白质、酚及色素等杂质的污染,紫外吸收检测DNA的OD260nm/OD280nm为1.83,DNA浓度为8.819 μg/μl,产率为1102.4μg/g;提取的茎、叶DNA有少量杂质;花DNA的提取效果最差,含有较多的蛋白质、酚及色素等杂质.加入2%PVP-40的CTAB提取液对绶草DNA的提取效果最好. 相似文献
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4种提取鹰嘴豆基因组DNA方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
采用CTAB法、SDS-CTAB法、SDS法、尿素法4种方法对鹰嘴豆DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率等方面对其进行比较研究,从而确定鹰嘴豆DNA提取适用流程。所提DNA纯度为：CTAB法〉SDS-CTAB法〉SDS法〉尿素法;所提DNA的浓度（μg／mL）为：SDS-CTAB法〉CTAB法〉SDS法〉尿素法。综合分析,CTAB法是提取鹰嘴可DNA的最佳方法。 相似文献
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本试验采用三种不同的方法提取葡萄幼叶基因组DNA,即:改良的CTAB法、高盐法和SDS法。并通过紫外/可见分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳检测、RAPD-PCR扩增对三种方法提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。结果表明,三种不同的方法提取葡萄幼叶DNA均能满足RAPD扩增要求,扩增效果为:CTAB高盐法SDS法。因此,改良的CTAB法是一种适合新疆葡萄基因组DNA提取的最佳方法。 相似文献
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为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13 相似文献
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[目的]筛选一种适合牡丹、芍药基因组DNA的提取方法。[方法]以新鲜的牡丹、芍药叶片为材料,采用CTAB法和SDS法提取基因组DNA,通过紫外光谱分析法、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增等检测方法对牡丹、芍药基因组DNA的提取方法进行筛选。[结果]在牡丹、芍药基因组DNA的提取过程中,叶片内的酚类、色素、丹宁、糖类等物质与DNA结合,影响DNA的提取质量。在这两种DNA提取方法中,SDS法略好于CTAB法。SDS法DNA得率虽低,但其纯度高,去糖去蛋白等杂质比较干净,且在未加RNA酶的情况下,RNA污染较少,在进行PCR扩增时,能得到比较理想的产物。[结论]取材时间是影响DNA提取质量的关键因素之一。在提取牡丹、芍药基因组DNA时应该取完全展开的幼嫩叶片。 相似文献
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[目的]探索高粱总DNA的快速、高效提取方法,为将其导入水稻提供大量、高质量的DNA。[方法]以高粱幼叶为材料,分别采用SDS法、CTAB法、尿素法和NaOH法提取高粱总DNA,并对不同方法提取DNA的纯度、浓度和产量进行检测。[结果]尿素法提取DNA纯度和质量最好,SDS法和CTAB法次之,NaOH法最差。采用尿素法、SDS法、CTAB法和NaOH法分别可从1g高粱样品中提取到约292.00、21.75、152.25和243.75μg的DNA。4种方法提取的高粱总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果表明NaOH法不能有效提取高粱总DNA,其他3种方法在提取高粱总DNA时能较好地保证其完整性。高粱总DNA分子量约为50KB。[结论]尿素法提取DNA的纯度最好、产率最高,是一种理想的高粱总DNA提取方法。 相似文献
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茶树基因组DNA的高效提取方法 总被引：37，自引：4，他引：37
为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组DNA，对4种植物DNA提取方法进行改良后，以茶树春梢为材料，对提取效果进行了比较，并首次采用CTAB区室法提取茶树基因组DNA。结果表明，用该4种方法提取的DNA，其OD260／OD280都在1．8以上，相对分子质量均大于21kb，能完全被EcoRI酶切消化，也能获得清晰的PCR扩增图谱。因此，只要操作合理，4种方法均能提取出高质量的DNA。 相似文献
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[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。 相似文献
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4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文) 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。 相似文献
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《（《农业科学与技术》）编辑部》2008,(4)
[Objective] The aim of this study is to isolate Chlorella vulgaris(chlorella)and extract its genomic DNA.[Method] Both the dilution method and drip method were employed to isolate chlorella from lake water samples;the conditions for culturing chlorella were optimized and its genomic DNA was extracted by improved CTAB method and SDS method.[Result] The proper conditions for chlorella culture were as following:temperature 20-25 ℃,illumination 4.39-5.86 W/m2 and rotational speed 100-150r/min;improved CTAB method was suitable for extracting genomic DNA from chlorella.[Conclusion] The study is helpful to study the chlorella at molecular level and promote the exploitation and utilization of chlorella resources. 相似文献
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[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。 相似文献