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1.
为明确鸡胚肠上皮细胞中Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)的表达情况,本研究采用嗜热菌蛋白酶分离培养18日龄鸡胚的肠上皮细胞,在形态学观察及免疫细胞化学法鉴定基础上,采用RT-PCR方法检测其TLR表达谱,并对不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱进行了比较研究。结果表明,应用嗜热菌蛋白酶消化法得到的鸡胚肠上皮细胞生长状况良好;采用低速离心和差速贴壁进行纯化,得到90%以上纯度的鸡胚肠上皮细胞;纯化后的细胞经形态学观察及细胞角蛋白单克隆抗体鉴定为阳性;10种TLR在鸡胚肠上皮细胞上均有mRNA表达,但其丰度存在明显差异;不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱均无显著差异。 相似文献
2.
《畜牧与兽医》2014,(12):1-4
采用实时荧光定量PCR技术,分别对胚后1、10、20和40日龄三黄鸡的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠肠壁组织中c-kit及其配体干细胞因子(SCF)mRNA的表达进行相对定量,初步阐明了正常鸡肠道中c-kit及其配体SCF的mRNA表达量的胚后变化规律。结果发现胚后不同肠段中c-kit mRNA的表达量随日龄增长呈逐渐降低趋势,且20日龄时c-kit mRNA表达极显著低于1日龄。SCF mRNA的表达量从1日龄至10日龄逐渐升高,10日龄时mRNA表达最高,之后慢慢下降,至20日龄时SCF mRNA表达显著低于10日龄。各肠段在不同日龄时的c-kit和SCF mRNA表达量的变化表现如下:1日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,回肠最低;十二指肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。10日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,空肠最低;结肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。20至40日龄时,变化趋于稳定,均是回肠中c-kit和SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。结果表明鸡肠道的胚后发育和功能形成是一个逐渐成熟的过程,而且c-kit与其配体SCF之间存在着密切的联系。 相似文献
3.
《中国家禽》2015,(6)
研究旨在探索鸡胚出壳前后ATGL m RNA在肝脏中的表达变化及延迟喂食对刚出壳雏鸡ATGL m RNA表达的影响。Ross肉鸡受精蛋120个,分别于孵化的第15(E15)、18(E18)、21胚龄(E21)和出壳后24、48、72、96和120 h,收集鸡胚或雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法,检测鸡胚出壳前后ATGL在肝脏中的表达。出壳后剩余的雏鸡随机分为两组,一组正常饲养作对照,另一组饥饿72 h(正常饮水),然后开始喂食,分别在饥饿的0、24、48、72 h(F0、F24、F48、F72)和开始喂食的4、8、12、24、48 h(SF4、SF8、SF12、SF24、SF48)取6只雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法检测延迟喂食对雏鸡肝脏ATGL表达的影响。从E15~E18,肝脏中ATGL m RNA的表达量随着胚龄的增加迅速增加,E18达到最高,为2.52±1.06(P0.05);到E21出壳时,ATGL m RNA的表达量仅为E18的36.11%。鸡胚出壳后肝脏中ATGL m RNA的表达量持续下降,到出壳后24 h达到最低,为0.11±0.02(P0.05);出壳后48 h的表达量稍高于出壳时水平,而后逐渐接近于出壳水平并趋向稳定。延迟喂食24 h,肝脏ATGL m RNA的表达量显著高于对照组(P0.05)。而开始喂食12 h后,肝脏ATGL的表达量显著低于对照组(P0.05),继续喂食,ATGL m RNA的表达量上升。肝脏中ATGL m RNA的表达量随鸡胚和雏鸡的发育而发生变化,而且短时间的喂食变化对肝脏脂肪代谢有较大影响。 相似文献
4.
利用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）克隆了黑龙江籽鹅IGF-Ⅰ基因，并检测了生长期间该基因mRNA在各组织中的表达量变化。结果表明，鹅IGF-Ⅰ基因与鸡、鸭IGF-Ⅰ基因的同源性分别为97．6％、99．3％；鹅肝组织中IGF-ⅠmRNA的表达水平在30日龄和60日龄较高，而30日龄的表达量极显著高于22、28日龄鹅胚和1日龄籽鹅，显著高于10日龄雏鹅；30日龄雏鹅IGF-ⅠmRNA在肝、卵巢、胸肌、肺、脾、腿肌、垂体、肌胃、肾、心等组织中都有表达，其中肝、卵巢、胸肌、肺的表达量较高。 相似文献
5.
为了明确肉蛋兼用品种无量山乌骨鸡胚胎期肝脏组织的发育特征，试验同时孵化爱拔益加肉鸡(AA鸡)、海兰灰蛋鸡与无量山乌骨鸡3个品种的种蛋，在10,12,14,16,18,20胚龄(E10、E12、E14、E16、E18、E20)和出壳当日(D0)分别测定胚胎重和肝脏重，比较品种间相对肝脏重；取肝脏制备石蜡切片(H.E.染色)和冰冻切片(油红O染色)检测肝脏中脂质沉积情况；通过实时荧光定量PCR扩增检测脂代谢相关基因(FAS基因和ATGL基因)的mRNA相对表达量。结果表明：在E10和E14时，无量山乌骨鸡相对肝脏重分别显著高于AA鸡和海兰灰蛋鸡(P<0.05);在E18时，肝脏组织油红O染色红色最深；无量山乌骨鸡FAS基因和ATGL基因mRNA相对表达量在E10、E12、E14、E16、E18时最高且与AA鸡和海兰灰蛋鸡差异显著(P<0.05);无量山乌骨鸡FAS基因和ATGL基因均在D0时达到表达高峰，且与其他胚龄相比差异极显著(P<0.01)。说明无量山乌骨鸡脂代谢活动在出壳后更为活跃。 相似文献
6.
为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。 相似文献
7.
《畜牧兽医学报》2017,(5)
本研究旨在探讨单色绿光对鸡胚松果体发育以及褪黑激素合成的影响,为研究单色绿光影响鸡胚发育提供依据,选用120枚质量为(65±3)g的受精鸡胚,随机分为两组,分别在绿光(波长560nm,光强15lx)和黑暗条件下孵化,每组设4个重复,每个重复5枚鸡胚,分别在E(胚龄)15、E18和E21取材,探索鸡胚孵化过程中单色绿光对松果体的发育以及褪黑激素合成的影响。结果表明:(1)孵化期间给予绿光照射,鸡胚质量增加11.19%~21.41%(P0.05);(2)单色绿光促进松果体小叶发育;(3)褪黑激素合成关键酶——乙酰基转移酶(AANAT)转录水平的表达随着胚龄的增加而升高,其中黑暗组E21时AANAT mRNA表达较E15和E18时显著高29.84%~47.06%(P0.05),但是E15与E18间差异不显著(P0.05);而绿光组中,E18 mRNA水平较E15 AANAT mRNA的表达显著高17.76%(P0.05),E21时较E15和E18时松果体中AANAT mRNA表达水平显著高26.37%~48.81%(P0.05);并且单色绿光组高于黑暗组12.85%~15.95%(E18~E21,P0.05);(4)血浆褪黑激素含量随着胚龄的增加而升高,黑暗组E21褪黑激素含量为E15和E18的2.6和1.9倍,绿光组中E21为E15和E18的2.8和1.8倍;在E21和E18,绿光组鸡胚外周血褪黑激素水平高于黑暗组的13.13%和18.20%(P0.05),并且与外周血中生长激素水平极显著正相关(P0.001)。由此可知,在鸡胚孵化期间给予单色绿光刺激可促进松果体发育以及褪黑激素的合成与释放,进而促进生长激素水平,最终促进鸡胚发育。 相似文献
8.
《中国畜牧兽医》2020,(7)
为研究IGFBP-3基因表达与鸡生长性状的相关性,以生长速度差异较大的花山麻鸡和清远麻鸡两个黄羽肉鸡品种为研究素材,用实时荧光定量PCR法检测胚胎期和出雏后两个品种鸡胸肌和肝脏中IGFBP-3基因的表达规律,并将其与体重、胸肌重和肝脏重进行相关性分析。结果表明,在9胚龄时两个品种鸡胸肌和肝脏中均可检测到IGFBP-3基因表达,同一胚龄或日龄品种内组织间比较,胚胎期两个品种鸡胸肌IGFBP-3 mRNA表达量均高于肝脏,出雏后肝脏IGFBP-3 mRNA表达量迅速上升,胸肌IGFBP-3 mRNA表达量下降,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量均极显著高于胸肌(P0.01);组织中IGFBP-3 mRNA表达量与组织重量和体重相关研究表明,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重呈显著或极显著正相关(P0.05;P0.01),胸肌IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重均呈极显著负相关(P0.01)。研究结果揭示,IGFBP-3 mRNA在鸡中的表达具有品种、年龄和组织特异性,出雏前肝脏并不是鸡产生IGFBP-3的主要器官,出雏后鸡IGFBP-3可能主要由肝脏合成,肝脏中IGFBP-3 mRNA水平差异是导致两个品种鸡出雏后体重和胸肌重差异的重要因素。 相似文献
9.
为研究IGFBP-3基因表达与鸡生长性状的相关性,以生长速度差异较大的花山麻鸡和清远麻鸡两个黄羽肉鸡品种为研究素材,用实时荧光定量PCR法检测胚胎期和出雏后两个品种鸡胸肌和肝脏中IGFBP-3基因的表达规律,并将其与体重、胸肌重和肝脏重进行相关性分析。结果表明,在9胚龄时两个品种鸡胸肌和肝脏中均可检测到IGFBP-3基因表达,同一胚龄或日龄品种内组织间比较,胚胎期两个品种鸡胸肌IGFBP-3 mRNA表达量均高于肝脏,出雏后肝脏IGFBP-3 mRNA表达量迅速上升,胸肌IGFBP-3 mRNA表达量下降,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量均极显著高于胸肌（P<0.01）;组织中IGFBP-3 mRNA表达量与组织重量和体重相关研究表明,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重呈显著或极显著正相关（P<0.05;P<0.01）,胸肌IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重均呈极显著负相关（P<0.01）。研究结果揭示,IGFBP-3 mRNA在鸡中的表达具有品种、年龄和组织特异性,出雏前肝脏并不是鸡产生IGFBP-3的主要器官,出雏后鸡IGFBP-3可能主要由肝脏合成,肝脏中IGFBP-3 mRNA水平差异是导致两个品种鸡出雏后体重和胸肌重差异的重要因素。 相似文献
10.
以籽鹅为实验材料,根据鸡生长激素受体(GHR)基因mRNA序列设计并合成引物,通过PCR技术克隆了鹅GHR基因,并利用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测籽鹅出壳到90日龄GHRmRNA在部分组织中的表达量变化。结果表明:鹅与鸡和鸭的GHR基因核苷酸序列同源性为97.1%和99.1%,氨基酸同源性均为99.1%。籽鹅肝组织中GHRmRNA表达水平在10到90日龄都较高,显著高于1日龄,以30日龄的表达量最高。30日龄GHRmRNA在肝脏等检测的组织中都有表达,但在肝脏和骨骼肌中的表达量高。肝组织中GHRmRNA表达量与日增重呈显著正相关(r=0.9116)。本实验结果揭示了生长期籽鹅组织中GHRmRNA表达水平的差异,为进一步研究生长轴相关基因对鹅生长及繁殖的调控作用奠定基础。 相似文献
11.
建立并利用鸡白细胞介素18（chicken interleukin-18,ChIL-18）荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）感染SPF鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平除感染后14d脾脏外,在感染后7,14,21,28,35,42,49d均显著升高（P〈0.05）。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础。 相似文献
12.
试验旨在从免疫遗传学的角度初步探讨藏鸡（TC）和隐性白羽鸡（RWC）对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）易感性差异的分子机制,分别用1×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡。应用实时荧光定量PCR检测藏鸡和隐性白羽鸡感染前0 d和感染后第2、4、6和8天脾脏、盲肠、胸腺、法氏囊中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、IL-16、Toll样受体（TLR3）和TLR15免疫相关基因的转录水平变化。结果显示,藏鸡脾脏IFN-γ、IL-2、IL-16及TLR3、TLR15免疫相关基因转录水平于感染后第4和8天明显上调,隐性白羽鸡则无明显变化。藏鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第2天显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第4天起显著上调（P<0.05）,其余免疫相关基因变化幅度不大;隐性白羽鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第8天显著上调（P<0.05）,IL-2在感染后第2天起显著上调（P<0.05）,IL-16在感染后第6天起显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第2和8天显著上调（P<0.05）,TLR15变化幅度不大。各免疫相关基因在2个品种鸡胸腺和法氏囊中均出现上调或下调,但除藏鸡法氏囊TLR3和TLR15转录水平变化幅度相对较大外,其余免疫相关基因与感染前相比变化幅度不大。以上结果显示,球虫感染主要导致藏鸡和隐性白羽鸡脾脏和盲肠中的各免疫相关基因出现显著变化,表明宿主的遗传背景在一定程度上可影响球虫感染的免疫应答。 相似文献
13.
采用马齿苋多糖口腔灌注雏鸡,观察对雏难法氏囊免疫功能的影响。试验选取80只1日龄雏鸡随机分为4组,1个空白对照组及3个POP试验组,POP剂量分别为25,50和100mg/kg,每天口腔灌注1次,连续20d。结果显示,POP能显著提升外周血CD4+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比值(P0.05),显著提高法氏囊指数(P0.05)及法氏囊淋巴细胞增殖指数(P0.05)。试验表明,马齿苋多糖可通过改变法氏囊免疫系统的动态变化,促进免疫器官发育,直接作用于免疫细胞,提高雏鸡的免疫能力。 相似文献
14.
150只一日龄罗曼混合肉雏被随机分为四组,分别饲喂含维生素A为0、750、3000和6000IU的日粮。在20、30和45日龄时,每组剖检5只鸡,分离并称重免疫器官后,取材,石蜡包埋,切片,镜检。结果表明:维生素A缺乏和不足使免疫器官组织萎缩,间质结缔组织增生,上皮角化,腔上囊和胸腺的相对重量明显减少(P<0.01)。对免疫器官的损害程度是腔上囊>胸腺>脾脏>盲肠扁桃体。提高日粮中维生素A含量有提高肉雏增重、饲料报酬和免疫器官相对重量之趋势。 相似文献
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建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18 mRNA转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL 18的分泌水平在感染后7和14 d均显著升高(P＜0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P＜0.05).本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础. 相似文献
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17.
【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。 相似文献
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Abdalla SA Horiuchi H Furusawa S Matsuda H 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2004,66(6):643-650
CD30 ligand (CD30L) and tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) are members of the TNF-superfamily that have many important biological activities in cell proliferation and apoptotic death. In this study, both genes in the chicken were cloned and their expression was analyzed. Complementary DNA fragments were obtained from a suppressive subtractive hybridization library with or without lipopolysaccharide (LPS)-stimulation. Chicken CD30L consists of 1,152 base pairs (bp) with an open reading frame (ORF) of 720 bp having 36.4% identity with human CD30L, whereas chicken TRAIL is 1,134 bp long with an ORF of 912 bp having 54.4% identity with human TRAIL. Chicken CD30L was expressed at high levels in the spleen, bursa of Fabricius and in the chicken monocytic leukemia cell line, IN24. Stimulation with LPS in the spleen, bursa of Fabricius and the IN24 cell line did not affect CD30L expression. The gene expression of chicken TRAIL was essentially to the same level in all tissues examined. The time course of expression was not significantly altered by LPS-stimulation in the spleen, thymus and bursa of Fabricius, but reached a maximal level 8 hr after stimulation in the IN24 cell line. The high level expression of both genes in lymphoid organs and IN24 cell line indicates that chicken CD30L and TRAIL may also play an important role in apoptotic signal transduction and the regulation of cell proliferation in the immune system. 相似文献
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从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。 相似文献