利用正交设计优化芦笋SRAP反应体系     

李霞  于继庆  李书华  杨林  牟萌 《农学学报》2011,(3)

以芦笋(Asparagus officinalis L.)为材料,对影响SRAP-PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP-PCR分析的最佳反应体系:20μL的反应体积中包括0.2mmol/LdNTPs0.4μL;1UTaqDNA酶1.0μL;1.5mmol/LMg2+1.2μL;上下引物各30ng,每个引物0.5μL;60ng模板DNA1.0μL;10×Buffer2.0μL;无菌双蒸水13.4μL。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。  相似文献   

橡胶树SRAP体系优化及其PCR引物组合的筛选     

王惠君  王文泉  卢诚  王海燕  陈新 《贵州农业科学》2015,(2):29-34

为橡胶树遗传多样性分析及遗传图谱的构建奠定基础,分析引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA用量、Taq酶用量等因素对SRAP-PCR扩增反应的影响。结果表明,橡胶树SRAP-PCR的适宜扩增反应体系(20μL)为:引物0.2μmol/L,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs 0.20mmol/L,模板DNA50ng,Taq酶0.5U。利用该体系从400对引物组合中初筛出28组多态性好的引物组合,获得250条清晰带,多态性比率为62.8%。  相似文献   

正交设计优化广藿香基因组SRAP扩增体系的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴友根  郭巧生  何际婵  林尤奋 《江苏农业科学》2010,(4)

以改良CTAB法提取的广藿香叶片DNA为模板,采用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4因素3水平,对SRAP扩增效果进行研究,比较不同模板DNA浓度对PCR扩增的影响,确立适合广藿香SRAP-PCR反应的最佳体系.利用SRAP-PCR优化体系对引物进行了全面筛选.结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,总体积20μL的SRAP-PCR优化反应体系中含有:2 μL 10×buffer、20 ng模板DNA、1.5 mmol/L Mg2+、250 μmol/L dNTP、0.3 μmol/L Primer、Taq DNA聚合酶1.5 U.运用该体系对部分广藿香单株进行检验,证明该体系稳定可靠;以此体系为基础从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物18对.  相似文献   

八仙花SRAP反应体系的建立与优化   总被引：5，自引：0，他引：5  

李艳香  李达  李炎林  彭尽晖  朱霁琪 《湖南农业科学》2008,(6)

为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种H.macrophylla‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2 、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DNA60ng、Mg2 2.0mmol/L、dNTPs0.7mmol/L、Taq酶0.5U、引物0.7μmol/L×2、10×PCRBuffer2.5μl,该反应条件下八仙花SRAP扩增条带清晰,多态性丰富。  相似文献   

龙眼SRAP反应体系的建立和优化     

赵玉辉  郭印山  傅嘉欣  周佳  黄穗生  刘成明 《勤云标准版测试》2009,29(18)

为获得最佳的龙眼SRAP反应体系,采用分步优化的方法对影响龙眼SRAP-PCR反应的模板DNA用量、Me2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量等进行了研究.确立了适合龙眼SRAP分析的反应体系,即体系总体积25 μl,包含1×PCR Buffer,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.5 mmol/L,引物0.3 μmol/L,模板DNA 10 ng,TaqDNA聚合酶1.5 U.结果表明,该体系能很好地满足龙眼基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于龙眼遗传研究是可行的.  相似文献   

华山松SRAP-PCR反应体系的优化     

赵杨  李玉璞  代毅 《西北林学院学报》2012,27(5):87-90,173

为建立华山松SRAP-PCR反应体系,研究先采用L16(45)正交设计对影响华山松SRAP反应的5个因子(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶)在4个水平上进行优化试验。结果表明:各因素对SRAP反应的影响依次为:Mg2+>dNTPs>Taq酶>DNA模板>引物;对SRAP反应结果影响较大的3个因子(Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度)进行单因素试验;确立华山松SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+2.2mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、DNA模板60ng、Taq酶0.8mol/s、引物0.8μmol/L。将该体系用于华山松的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。  相似文献   

小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化（摘要）   总被引：1，自引：0，他引：1  

艾鹏飞  武玉芬  魏景芳 《农业科学与技术》2011,(3):366-368,374

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16（45）对小麦SRAP-PCR反应体系中的5因素（Taq聚合酶、Mg2＋、模板DNA、dNTPs、引物）在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系影响的大小顺序为：Mg2＋〉Taq聚合酶〉dNTPs〉模板DNA〉引物;优化的小麦SRAP-PCR体系为：在20μl反应体系中,包括10×PCR buffer2.0μl、Mg2＋2.0mmol/L、Taq聚合酶2.0U、dNTPs0.2mmol/L、模板DNA40ng、引物0.6μmol/L。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。  相似文献   

苔藓植物SRAP反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

张安世  邢智峰  韦慧彦  张为民  刘永英 《河南农业科学》2009,(11)

以黄灰藓总DNA为材料,对影响SRAP-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了优化,分析了各因素对SRAP-PCR扩增结果的影响。结果表明,在25μLSRAP-PCR反应体系中,最佳反应条件为:模板DNA40ng;Mg2+浓度2.0mmol/L;dNTP浓度0.2mmol/L;正反引物15pmol;TaqDNA聚合酶2.0U。在此条件下,引物组合Me5/em7对13种苔藓植物扩增的条带清晰、多态性好,表明此反应条件适合于苔藓植物的SRAP-PCR反应体系。  相似文献   

北方粳稻SRAP反应体系的建立与优化     

张安世  刘莹  徐九文  张利民  邢智峰 《江苏农业科学》2010,(2)

以粳型旱稻品种焦旱1号总DNA为材料,首先对影响北方粳稻SRAP-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了初步优化,分析了各因素对SRAP-PCR扩增结果的影响。在此基础上对影响SRAP-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等4个主要因素进行了正交优化。研究结果表明,利用引物组合Me6/em7对18个北方粳稻品种进行了成功扩增,最佳条件为:25μL SRAP-PCR反应体系中,模板DNA为20 ng;Mg2+为2.0 mmol/L;dNTP为0.3 mmol/L;正反引物为15 pmol;TaqDNA聚合酶为1.5 U。  相似文献   

薄壳山核桃SRAP标记体系的优化和遗传多样性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘广勤  王鹏良  周蓓蓓  吕智鹏  王海燕 《江苏农业学报》2010,26(5)

为确立薄壳山核桃SRAP-PCR反应体系,并对薄壳山核桃品种遗传多样性进行分析,以薄壳山核桃嫩叶提取的DNA为模板,进行Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶4个因素3个水平[L9(34)]正交试验,并比较了不同浓度模板DNA对PCR扩增效果的影响。结果显示:薄壳山核桃的SRAP-PCR最佳反应体系为Mg2+2.5mmol/L、dNTP 0.20 mmol/L、引物0.4μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5 U。DNA模板最佳浓度为10 ng利用最佳反应体系对薄壳山核桃进行引物组合多态性筛选,从90个引物组合中筛选出多态性引物组合39个。14个多态较高的引物组合对12个薄壳山核桃品种进行遗传多样性分析,通过PCR扩增,得到128个谱带,显示了较高的多态性,12个供试薄壳山核桃品种的遗传背景具有丰富的多样性。表明SRAP标记可应用于薄壳山核桃分子生物学研究。  相似文献