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1.
锥栗自然居群ISSR-PCR分析技术的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
提取野生锥栗的基因组DNA作为ISSR-PCR模板,对反应体系中的模板用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶用量5个主要影响因素进行梯度试验,并对扩增程序中的退火温度与循环次数进行了探讨,初步确立了适合野生锥栗的ISSR-PCR分析技术体系,即25μL反应体系中,模板DNA40或50ng、Mg2+2.25mmol.L-1、dNTPs0.2mmol.L-1、引物0.2μmol.L-1、TaqDNA聚合酶1.0U;PCR扩增程序为:94℃预变性3min;然后94℃变性45s,(Tm+2～4℃)退火45s,72℃延伸2min,共32个循环;最后72℃充分延伸5min;1.5%琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。 相似文献
2.
采用改良CTAB法提取了桦褐孔菌总DNA,确定ISSR最适25 μL反应体系为模板DNA浓度15 ng·μL-1,dNTPs 浓度150 μmol· L-1,引物浓度25 μmol·L-1,Taq DNA聚合酶浓度2.0 U,Mg2+浓度1.4 mmol· L-1,10×buffer 2.5 μL,其余用ddH2O补足;确定ISSR扩增程序为:94℃预变性5 min,35个循环:94℃变性1 min、45℃～51℃退火1 min(退火温度因不同引物而定)、72℃延伸1 min,最后72℃延伸5 min,4℃保存.筛选出16条ISSR引物,并成功应用引物UBC842完成了21株桦褐孔菌的ISSR-PCR反应. 相似文献
3.
通过对TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTP、通用引物、模板DNA浓度等反应参数的系统研究,建立了中国樱桃S-RNase基因特异PCR扩增体系。该体系反应的总体积25μL,其中Taq酶1.25U,MgCl22.5mmol/L,dNTP0.15mmol/L,通用引物0.25μmol/L,模板DNA 50 ng。反应程序为:94℃预变性3 min;33个循环的94℃变性1 min,56℃退火45 s,72℃延伸1.5 min;最后72℃延伸10 min。利用优化的扩增体系在中国樱桃的不同品种中获得有效扩增,进一步证明了该体系具有良好的稳定性和重复性。 相似文献
4.
以羽衣甘蓝基因组DNA为模板,对相关序列扩增多态性聚合酶链式反应(SRAPPCR)体系的各影响因子进行了单因素梯度设置,并优化了反应程序,筛选和建立了可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP反应体系和程序。结果表明:羽衣甘蓝最佳SRAP-PCR反应体系总体积10μL,包含DNA模板50ng,1×buffer,dNTPs 0.20mmol/L,Taq酶1U,引物各0.60μmol/L。羽衣甘蓝最佳SRAP-PCR反应程序为94℃预变性5min,94℃变性30s,35℃退火30s,72℃延伸30s,5个循环;94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃终延伸7min,4℃保存。经22个羽衣甘蓝F2群体单株对上述优化的反应体系和程序进行验证,均获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明该程序和体系能很好地满足羽衣甘蓝基因组SRAP扩增要求。 相似文献
5.
快速微量提取番茄DNA及SSR-PCR反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以番茄叶片为试材,采用改进的CTAB法,电钻研磨,提取过程中加入醋酸铜,设计4因素3水平的正交试验对PCR反应体系进行优化,同时利用梯度PCR对退火温度进行选择选择。结果表明:优化的10μL反应体系含:1×buffer,1.2 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1.2μmol/L引物,0.75 UTaqDNA聚合酶,10 ng模板DNA。扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,49.2℃退火30 s,68℃延伸30 s,共35个循环;最后72℃延伸8 min。优化的反应体系可以用于SSR分子标记机的研究,在所有SSR引物中基本都能有效扩增;改进的CTAB法提取的DNA纯度更高。 相似文献
6.
以野蔷薇(Rosa multiflora)的冬末初春芽和夏初叶片为材料,研究了DNA的提取方法,并对影响随机扩增多态DNA(RAPD)的反应因素进行了优化.建立了适合野蔷薇RAPD的反应体系和反应程序,在20μL反应体系中,25ng模板DNA,2.0mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdNTPs,1UTaqDNA聚合酶,0.1μmol/L引物.扩增程序为:94℃预变性4min,然后94℃变性45s,37℃退火1min,72℃延伸1min,37个循环,最后72℃延伸5min,4℃保存. 相似文献
7.
辣椒SSR反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验研究了辣椒SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,同时进行了退火温度梯度和循环次数试验。优化后的反应体系为:总体积20μL,1.5μL模板DNA(25ng/μL)、1U Taq酶、0.375μmol.L-1引物、1.875mmol.L-1Mg2 、0.2mmol.L-1dNTPs、1XPCR buffer。扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性45s,58℃(以SSR005为例)退火45s,72℃延伸90s,35个循环,最后一个循环延伸增加为8min,4℃保存至电泳。 相似文献
8.
锦带花ISSR-PCR反应体系的建立与优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以锦带花幼叶为试材,提取锦带花基因组的DNA,并对其纯度、浓度进行检测,建立适合锦带花的ISSR-RCR反应体系.结果表明:DNA扩增效果良好,完全能满足进一步试验的需要.同时对锦带花ISSR-PCR反应体系中各个影响因素进行优化,建立了适合锦带花ISSR分子标记的最佳反应体系,即在20μL的反应体系中,含稀释浓度为3倍的DNA模板,0.20 mmol/LdNTP,稀释10倍体积高保真PCR缓冲液含(Mg2+)3.0 μL;1.00 μmol/L引物,1.25 U Taq酶.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,52.0℃退火45 s,72℃延伸1.50 min,45个循环;最后72℃延伸5 min,4℃保存.应用该ISSR体系对3份锦带花种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性. 相似文献
9.
干用辣椒RAPD-PCR反应体系及扩增程序的优化 总被引：2，自引：0，他引：2
以干用辣椒叶片为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的影响因素,包括Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物、模板DTA浓度、退火温度、退火时间及循环次数等,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有Taq酶1.5 U、Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 0.6mmol/L、引物0.8μmol/L、模板DNA 60 ng.扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;最后72℃延伸5 min.该优化体系在干用辣椒RAPD分析中获得较理想的扩增结果,为应用RAPD技术对干用辣椒遗传多样性奠定基础. 相似文献
10.
以刺梨为试材,对影响ISSR．PCR扩增结果的主要影响因素包括Mg^2＋、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模版DNA的浓度及引物退火温度进行了优化筛选。确立了适合刺梨ISSR．PCR分析的最佳反应体系,即20μL反应体系中各组分浓度分别为：10×buffer 2．0μL,Mgz＋1．875mInoI／L。TaqDNA聚合酶1．0U,dNTPs0．1mmol／L,引物2．0μmol／L,模板DNA20ng。PCR扩增程序：94。c预变性5min,94℃变性1min,48℃退火温度45S,72℃延伸1min,34个循环,72℃后延伸6min。利用优化体系对3个刺梨品种进行体系稳定性检测,结果表明该优化体系的重复性和稳定性良好。 相似文献