作物种子DNA的提取及分子标记分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

葛建殚  刘晓鑫  易红梅  徐东  李晓辉 《农业与技术》2008,28(2):37-40

为寻找适用于分子标记快速检测作物种子DNA的方法.本研究采用改良CTAB法、SDS法和碱提法分别提取4种农作物(玉米、水稻、大豆和高粱)种子DNA,用于RAPD、SSR标记检测.结果表明CTAB法较SDS法更适合于提取玉米胚和高粱种子DNA用于RAPD检测;碱提法提取大豆和水稻种子DNA纯化后,用于RAPD检测得到清晰扩增条带.三种DNA提取方法对作物种子提取的DNA均适用于SSR标记检测.根据分子标记方法选择不同DNA的提取方法提取作物种子DNA,才能快速获得准确有效的分子标记检测结果.  相似文献   

SRAP技术在水稻品种鉴定和纯度检测中的应用研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘强  高新学  刘铁山  张成华  董瑞  郭庆法  叶金才  张春庆 《山东农业科学》2008,(1):26-28

以水稻杂交种为试材,用25对SRAP引物组合对水稻种子的DNA指纹进行了分析,筛选出12对多态性较好的引物组合,利用这些引物组合可以有效地进行水稻品种鉴定和纯度检测。改进了提取DNA的SDS方法,采用干种子提取,获得了高质量的DNA和SRAP扩增结果,提高了水稻纯度检测的工作效率。  相似文献   

一种简便快速制备水稻PCR模板的方法及其应用   总被引：5，自引：0，他引：5  

杨杰  仲维功  王才林  陈志德  赵凌  朱镇  张亚东 《江西农业学报》2005,17(4):75-78

目前在水稻分子生物学实验中DNA提取的常用方法有CTAB提取法和SDS提取法。CTAB提取法提取的DNA质量高而且量大，主要用于RFLP、Southem杂交等实验；SDS方法提取的DNA杂质略多，也可以大量提取，适合用于基于PCR的分子标记实验。但这两种DNA提取方法所需成本较高，技术性强，叶片用量大，难以满足水稻育种实践的需要，实用性不强。因此，在水稻分子育种实践中，急需一种叶片用量小、提取程序简单快捷的方法提取DNA，以满足开展分子标记辅助选择育种、分子标记快速检测种子纯度等应用研究的需要。许多分子标记都基于PCR技术，如AFLP、SSR、RAPD、SNP、EST等。目前已开发出大量的水稻SSR标记。由于水稻基因组中存在着丰富的SSR标记而且多态性较好，在水稻群体分子标记连锁图谱构建、基因定位、QTL分析等研究中广泛应用，在水稻种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种方面已有研究报道。本文报道了一种简便的DNA提取方法，既能快速提取DNA。又只需要少量叶片，同时利用SSR标记鉴定了“两优培九”种子的纯度。  相似文献   

一种简单快速的DNA提取方法在水稻上的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙林静  马忠友  苏京平  刘学军  王春敏  王胜军  闫双勇 《天津农学院学报》2007,14(3):1-4

采用了一种简单快速的DNA提取方法来提取水稻DNA,并用提取的DNA进行了PCR扩增。结果表明,该方法提取DNA不需要碾磨、离心等步骤,通过简单的加热、稀释等操作便能制备100个PCR反应的DNA模板,1h能提取96个样品的DNA。本研究成功地将该方法用于水稻SSR分析、白叶枯抗病基因Xa21的分子标记辅助育种和不育系纯度鉴定等方面。  相似文献   

黄瓜种子DNA快速提取新方法及其在SSR检测种子纯度中的应用     

郭依蓬 《现代农业科技》2014,(18)

研究快速提取黄瓜种子DNA的新方法,目的在于解决多年来无法快速提取黄瓜种子DNA进行种子纯度鉴定这一困扰业界的难题。结果表明:使用该法提取黄瓜种子DNA操作简便,只需简单捣碎,不需研磨,不用离心、沉淀,耗费低;同时不使用有毒试剂,对人体危害较小;提取速度较快。SSR分析结果表明,该法提取的DNA能够满足利用SSR进行种子纯度检测的目的,值得大力推广。  相似文献   

一种高通量水稻DNA提取方法及其在种子纯度检测中的应用     

《上海农业学报》2016,(5)

以杂交节水抗旱稻‘旱优73'和‘旱优3号'及其亲本为材料,采取一种高通量96深孔板提取水稻DNA的方法进行杂交种子纯度鉴定。结果表明:该提取方法获得的DNA纯度高,能满足正常的SSR分析,利用引物RM208和RM336扩增的条带清晰可辨,可对‘旱优73'和‘旱优3号'杂交种子纯度进行准确鉴定。  相似文献   

5种主要农作物DNA快速提取方法研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

王伟威  孟庆虹  张瑞英  关海涛  陈凯新  高锋  赵琳  姚鑫淼 《黑龙江农业科学》2008,(5):1-2

以玉米、小麦、大豆、高梁,水稻的种子和幼苗的4种处理组织为材料,利用碱煮法对DNA提取程序进行了研究,建立了一种简单、快速的DNA提取程序。该程序提取的DNA可用SSR引物进行扩增,扩增产物质量良好,并且能满足这5种常见作物的分子标记研究。  相似文献   

水稻基因组DNA提取方法的研究     

马文东 《黑龙江农业科学》2014,(1):7-11

为探索分子标记辅助选择育种中快速有效的DNA提取方法,以水稻新鲜叶片、衰老叶片、水稻种子为材料,以CTAB法和SDS法为提取方法,利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳进行DNA纯度检测,对水稻基因组DNA提取方法和实验体系进行了优化和摸索。结果表明:新鲜叶片提取效果最好,其次是种子,再次是衰老叶片;CTAB法和SDS法差别不大;为避免酚类物质氧化污染,可在提取液中添加β-巯基乙醇。  相似文献   

一种适用于高通量基因分型的水稻 DNA样本制备技术研究     

夏澳运  彭子艾  李丹丹  赵壮壮  王慧  陈志强  郭涛 《广东农业科学》2019,46(8):1-7

【目的】提供一种基于 96 孔板的水稻根部 DNA 提取技术,可显著提升 DNA 提取效率。【方法】 在 96 孔深孔板的每个孔中放入一粒萌发的种子,在深孔板下方对应放置 96 孔 PCR 板,在适当光温下促使水稻 根伸入 PCR 板中;当水稻幼苗发育至一叶一心时,将 PCR 板移至干冰与 95% 乙醇混合液体中,利用冷冻处理 捕获幼根;用改良的 TRIS-EDTA 法批量提取 DNA 并进行浓度和纯度检测。【结果】从播种到根部组织样品的 获取全部在 96 孔板中进行,实现了样本组织的批量获取及目标个体的精确对应。改良的 TRIS-EDTA 法提取 96 个水稻样本 DNA 的效率显著高于传统的 CTAB 法。【结论】基于 96 孔板的水稻根部组织批量获取及 DNA 高效 提取方法,对于提升水稻分子育种效率具有实践意义。  相似文献   

RAPD标记鉴定作物品种单粒种子提取DNA方法的改进   总被引：3，自引：0，他引：3  

李余良  吉田晋弥 《广东农业科学》2000,(3):15-16

利用改进的方法从洒米单粒种子的糙米中提取ＤＮＡ用于ＲＡＰＤ分析,结果表明,该提取方法简捷、扩增多态性好、谱带清晰,对其他作物如玉米、小麦、水稻等直接利用种子提取ＤＮＡ提供借鉴。  相似文献   

一种DNA提取新方法在转基因水稻种子检测中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

张富丽  刘勇  宋君  雷绍荣  郭灵安  王东  尹全  刘文娟  常丽娟 《湖北农业科学》2012,51(10):2118-2120

将水稻种子打磨成粉,取100 mg粉末加入SDS和NaC1等试剂配制成高盐提取液,然后提取基因组DNA.超微量分光光度计NanoDrop 1000检测及Eco RV酶切反应的结果表明,该方法比CTAB法的DNA浓度更高、纯度更好.以提取得到的DNA为模板,采用PCR法分别对水稻特异性内源基因SPS及转基因水稻外源基因Bt进行扩增,均能扩增到清晰的目标条带.这种DNA提取新方法不仅简单快速、成本低廉,而且提取到的DNA质量高,扩增效果好,可有效地用于水稻种子转基因成分的检测.  相似文献   

水稻醇溶蛋白提取剂的优化及其多态性研究     

杨宝峰  李杰  蒋冬花 《上海交通大学学报(农业科学版)》2008,26(1):38-41

以4个不同的水稻品种为材料,分别采用6种不同的单一组分和复合组分的醇溶蛋白提取剂,在同一条件下提取水稻种子的醇溶蛋白。通过比较SDS—PAGE电泳图谱发现：单一组分提取剂中100％乙二醇效果最好,用此提取剂提取的醇溶蛋白经SDS-PAGE电泳后,图谱中带型清晰,分辨率高,条带位置准确,是水稻醇溶蛋白理想的提取剂;5％2-巯基乙醇提取效果最差。此外,还用得出的最佳提取剂提取了另外36个水稻品系的醇溶蛋白,用考马斯亮蓝G-250染色法和SDS—PAGE比较分析了醇溶蛋白的总含量和组成的多态性。结果表明：不同水稻品系在醇溶蛋白总量、各组分的百分含量等上表现出一定的多态性。  相似文献   

从植物种子中快速获取高质量DNA的方法(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

张富丽  刘勇  宋君  尹全  代晓航  雷绍荣  游米沙 《农业科学与技术》2012,(3):485-488

[目的]该研究旨在寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法。[方法]将种子打磨成粉,取100mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。[结果]从100mg7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。[结论]该方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。  相似文献   

高粱总DNA不同提取方法的比较     

郑卓  李健  圣忠华  彭智勇  罗宝 《安徽农业科学》2007,35(36):11758-11759

[目的]探索高粱总DNA的快速、高效提取方法,为将其导入水稻提供大量、高质量的DNA。[方法]以高粱幼叶为材料,分别采用SDS法、CTAB法、尿素法和NaOH法提取高粱总DNA,并对不同方法提取DNA的纯度、浓度和产量进行检测。[结果]尿素法提取DNA纯度和质量最好,SDS法和CTAB法次之,NaOH法最差。采用尿素法、SDS法、CTAB法和NaOH法分别可从1g高粱样品中提取到约292.00、21.75、152.25和243.75μg的DNA。4种方法提取的高粱总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果表明NaOH法不能有效提取高粱总DNA,其他3种方法在提取高粱总DNA时能较好地保证其完整性。高粱总DNA分子量约为50KB。[结论]尿素法提取DNA的纯度最好、产率最高,是一种理想的高粱总DNA提取方法。  相似文献   

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较     

胡祎晨  孙正海  王锦  李世峰  辛培尧  范萱 《安徽农业科学》2011,39(36):22215-22216,22363

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。  相似文献   

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法     

宋贵生  翟红利  魏刚  朱祯 《中国农业科技导报》2007,9(4):111-115

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.  相似文献   

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡祎晨  孙正海  王锦  李世峰  辛培尧  范萱 《（《农业科学与技术》）编辑部》2011,(10)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。  相似文献   

高光谱技术在常规水稻种子活力检测中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴小芬  赵光武  祁亨年 《安徽农业科学》2017,45(29)

[目的]实现常规水稻种子活力的快速自动化检测。[方法]采用高光谱成像技术(波长范围874~1 734 nm),提取甬籼69和中早39 2种常规水稻种子未老化、老化48 h和老化72 h的光谱反射率,在提取样本光谱时采用小波变换(WT)剔除像素点光谱噪声部分,并基于全波段光谱建立了支持向量机(SVM)判别分析模型。[结果]未老化种子与老化种子可以准确识别,而老化48 h种子与老化72 h种子之间无法准确识别,与基于种子活力参数的测量结果相符,且不同水稻品种对老化的反应存在差异。[结论]高光谱成像技术结合化学计量学方法用于种子活力的快速自动化无损检测是可行的。  相似文献