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1.
目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。 相似文献
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原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一,传统的治疗方法主要是手术切除,放射治疗和化学药物治疗。这些疗法对早期肝癌可获得较满意的疗效,但对晚期肝癌伴有局部扩散和远处转移者,疗效往往较差。分子生物学的发展使基因治疗成为可能。肝癌基因治疗策略主要包括:①免疫基因治疗,又称细胞因子基因治疗,通过转导细胞因子基因,增强机体抗肿瘤免疫能力;②自杀基因治疗,使肝癌细胞产生对某些药物前体的特异敏感性而被杀灭;③基因置换或补充,置换突变的基因或补充缺失的抑癌基因;④反义核苷酸技术,用于抑制癌基因的表达。其中自杀基因治疗是近年来研究的一个热点,本文对近年来肝癌的自杀基因治疗研究情况作一综述。1自杀基因治疗系统自杀基因是指存在于细菌、病毒和真菌中的一类基因,其编码的酶能活化一些抗感染药物前体,从而产生细胞毒作用。由于这类酶并不存在于哺乳动物中,因此,前体药物对哺乳动物细胞通常是低毒或无毒的。肿瘤的自杀基因治疗策略就是将这类基因用基因工程技术构建在一定的表达载体上并导入肿瘤细胞中,利用其在特定条件下高效表达的酶将无毒性的药物前体转化为细胞毒性药物,从而达到杀伤肿瘤细胞的治疗目的[1]。自杀基因治疗系统种类较多,主要包括单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激... 相似文献
3.
原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，传统的治疗方法主要是手术切除，放射治疗和化学药物治疗。这些疗法对早期肝癌可获得较满意的疗效，但对晚期肝癌伴有局部扩散和远处转移者，疗效往往较差。分子生物学的发展使基因治疗成为可能。肝癌基因治疗策略主要包括：①免疫基因治疗，又称细胞因子基因治疗，通过转导细胞因子基因，增强机体抗肿瘤免疫能力；②自杀基因治疗，使肝癌细胞产生对某些药物前体的特异敏感性而被杀灭；③基因置换或补充，置换突变的基因或补充缺失的抑癌基因；④反义核苷酸技术，用于抑制癌基因的表达。其中自杀基因治疗是近年来研究的一个热点，本文对近年来肝癌的自杀基因治疗研究情况作一综述。 相似文献
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鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤之一,放射治疗是首选的治疗方法,单纯放疗后5a生存率可达50%,然而还有部分患者对放疗不敏感,预后较差。survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,是目前发现的最强的凋亡抑制因子,能抑制细胞凋亡,调节细胞周期,促进细胞分裂,参与血管形成。它特异性表达于胚胎组织及人类大多数恶性肿瘤组织中,而在分化成熟的正常成人组织中不表达或低表达,这种高度的组织表达特异性提示survivin是一个具有潜在价值的肿瘤标志物,与肿瘤的诊断、预后密切相关,有望成为肿瘤靶向治疗的理想新靶点。研究发现,Survivin在鼻咽癌组织中存在高表达现象,以survivin为靶点的治疗方法可能为临床鼻咽癌治疗开辟新途径。本文就survivin与鼻咽癌的研究现状作一综述。 相似文献
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[目的]构建假单胞菌毒性基因(oprD)缺失突变株,为进一步探讨其编码的毒力因子功能奠定基础。[方法]利用pEX18Gm质粒作为基因敲除的载体,构建假单胞菌oprD基因重组自杀质粒,通过同源重组并激活自杀基因方式,筛选到目的基因缺失的突变株,再利用pBBR1MCS-2质粒作为目的基因回补的载体,构建回补载体。[结果]同源重组后,经过庆大霉素和氯霉素双抗平板、蔗糖平板筛选和PCR鉴定,成功获得了oprD基因缺失突变株,类似操作获得了回补菌株。[结论]基因缺失突变株的成功构建可为下一步的毒性机理研究奠定基础。 相似文献
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bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达 总被引：3，自引：0，他引：3
目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。 相似文献
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目的：分离并鉴定高低转移表型不同的人鼻咽癌细胞株差异表达cDNA序列,了解鼻咽癌转移抑制基因或具有抑制活性的核苷酸序列。方法：以具有高低转移潜能不同的人鼻咽癌细胞株为研究对象,应用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）和T／A克隆法构建差异表达cDNA消减文库,对差异表达的cDNA进行测序和生物信息学分析。结果：成功构建人鼻咽癌细胞克隆株差异表达cDNA消减文库,从随机测序10个克隆中获得6个在低转移鼻咽癌细胞株中高表达cDNA序列,它们都与已知的人类基因片段具有高度同源性。结论：应用抑制消减杂交技术,从一对具有高低转移表型差异的鼻咽癌细胞株中获得6条可能与肿瘤转移抑制相关的cDNA序列,它们可能在维持肿瘤细胞的稳定和抑制肿瘤转移中起重要作用。 相似文献
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[目的]用克隆载体pUC19构建乳杆菌自杀质粒及乳杆菌基因缺失工程菌[方法]在质粒pUC19的多克隆位点插入氯霉素抗性基因构建pUC19-CM载体;在pUC19-CM载体氯霉素抗性基因的两侧均添加1个用于同源重组的同源臂,再构建成自杀质粒pUC19-CM-D。将自杀质粒pUC19-CM-D转化乳杆菌进行抗性筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。[结论]pUC19-CM-D质粒的构建及应用为乳杆菌基因缺失工程菌的构建提供了一个快速有效的手段,也为乳杆菌基因功能研究奠定了基础。 相似文献
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顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。 相似文献
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探讨自杀基因HSV1-TK原核表达情况,为进一步将细菌载体应用于肿瘤基因治疗奠定基础。首先以质粒pHSV-106为模板,通过PCR获得HSV1-TK基因克隆并将其与原核表达载体pGEX-6P-1连接,重组质粒经鉴定后将其转化到E.coli BL21,观察其蛋白表达情况。结果表明,TK基因全长1 128 bp,与理论值相符。经测序发现插入到载体pGEX-6P-1上的DNA片段与TK基因的同源性为100%;SDS-PAGE可明显看出大小为41 ku的TK酶表达,并随时间的延长表达量不断增加。试验证明来源于单纯疱疹病毒的胸苷激酶能够实现原核表达,这一结果是应用细菌载体携带自杀基因TK治疗肿瘤的前提。 相似文献
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CNE-2Z细胞系一直被广泛应用于鼻咽癌研究的几乎各个领域,本文就CNE-2Z的生物学特性及其在鼻咽癌细胞生物学、分子生物学及实验治疗方面的应用进展情况作了综述。 相似文献
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《新农村(黑龙江)》2015,(1)
前不久，一份《农村老年人自杀的社会学研究》让许多人震惊。研究发现，农村老人自杀现象“已经严重到触目惊心的地步”。老人之所以自杀，除了生存艰难、疾病缠身，更重要的原因，是缺乏亲情。 相似文献
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程序性细胞死亡（ＰＣＤ）是一种与“坏死”不同的主动性“细胞自杀”过程。其调控重要而复杂，是一个多基因参与的系统工程。它的实现严格地控制着细胞死亡和增殖的平衡，这一过程的失衡则会导致疾病的发生。本文仅就程序性细胞死亡及有关基因及其调控做一简介。 相似文献
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[目的]用克降载体pUC19构建乳杆菌自杀质粒及乳杆菌基因缺失工程菌.[方法]以鼠李糖乳杆菌为研究对象,在质粒pUC19的多克隆位点插入氯霉素抗性基因构建pUC19-CCM载体;在pUC19-CM载体氯霉抗性基因的两侧均添加1个用于同源重组的同源臂,再构建成自杀质粒pUC19-CM-D.将自杀质粒pUC19-CM-D.将自杀质粒pUC19-CM-D转化乳杆菌进行抗生筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株.[结果]通过改造pUC19质粒,获得了可应用于构建鼠李糖乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因缺陷型菌株的自杀质粒pUC19-CM-D.运用抗性基因替换方法来构建基因缺陷型菌株,在一定程度上避免了质粒整合带来的问题,同时提供了一个筛选标记,能够通过一次筛选即可得到缺陷型菌株.这种自杀质粒的改造和基因缺陷型菌株的构建方法具有通用性,可以应用于其他的载体和菌株.[结论]pUC19-CM-D质粒的构建及应用为乳杆菌基因缺失工程菌的构建提供了1个快速有效的手段,也为乳杆菌基因功能研究奠定了基础.
Abstract：
[Objective] The aims were to construct a new suicide plasmid of Lactobacillus and gene deletion engineering bacteria of Lactobacillus with pUC19 vector,[Methods]pUC19-CM was constructed by inserting a chloramphenicol resistant gene into the multi-cloning site of pUC19,and then two homologous fragments were cloned into each side of the pUC19-CM to construct suicide plasmid pUC19-CM-D.[Results]A replacement mutant strain,whose target gene was replaced by resistant gene,could be obtained by transforming the suicide plasmid pUC19-CMD into Lactobacillus for resistance screening. [Conclusion] The construction and application of pUC19-CM-D provided a fast and efficient means of construction of gene deletion engineering bacteria of Lactobacillus,and laid a foundation for study of gene function of Lactobacillus. 相似文献
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面颈联野放疗治疗鼻咽癌的临床疗效观察杨志雄，陈梓宏，廖思海，余忠华（广东医学院附属医院放疗科，湛江５２４００１）鼻咽癌放射治疗失败的主要原因是原发灶复发与外侵，多与因设野不当，原发灶侵犯区域剂量不足有关［１］，精心设计每个治疗方案是提高鼻咽癌生存率及... 相似文献
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鼻咽癌 (NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤 ,广东为高发区。鼻咽癌是指鼻咽粘膜上皮发生的癌肿 ,大多为低分化鳞癌 ,其恶性度高 ,发病部位隐蔽 ,特别是在咽隐窝和鼻咽顶部者 ,早期症状不明显 ,因而难以早期发现 ,误诊误治率较高 ,可达12 .2 % [1 ] 。在确诊的鼻咽癌中 ,其 5年生存率长期徘徊在 5 0 %～ 6 0 %左右[2 ] 。对鼻咽癌进行早期诊断以便早期治疗 ,提高患者的生存率一直是 NPC临床研究的重要课题之一。本文就有关早期鼻咽癌的免疫组化和血清学指标的研究进展作一综述。1 EB病毒血清学标记物1.1 标记物传统的 EB病毒壳抗原一免疫… 相似文献
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[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapext ension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。 相似文献
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[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。 相似文献