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凝集素是无脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成成份,可凝集外来病原菌、进行非己识别、调理和介导血细胞吞噬。开展了锯缘青蟹血清凝集素的提取、单克隆抗体制备及凝集素定位研究,以N-乙酰基葡萄糖胺（N-Acetyl-D-glucosamine,GlcNac）为配基制备了Sepharose 4B亲和层析柱,可选择性结合青蟹血清凝集素;青蟹血清通过亲和层析柱后,以0.45 mol/L NaCl洗脱,得到有较高凝集活性的单一洗脱峰,该洗脱峰凝集素比活为血清凝集活性的32.6倍,SDSPAGE显示存在87 ku和79 ku主要蛋白成分;以纯化青蟹凝集素免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、单抗筛选获得BF82等7株可稳定分泌抗凝集素单抗的小鼠杂交瘤细胞株,单抗腹水的ELISA效价为1∶104～1∶105;单抗可特异性抑制青蟹凝集素的血凝,血凝抑制效价为1∶32～1∶64,亚型鉴定表明7株单抗均为IgG1型,免疫印迹表明单抗可特异性结合87 ku、79 ku蛋白;采用凝集素单抗间接免疫荧光法进行了青蟹血淋巴细胞染色,结果显示凝集素主要分布于颗粒细胞的细胞质颗粒和透明细胞的细胞膜上。 相似文献
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通过血凝试验及糖抑制试验, 测定褶纹冠蚌的血清及肌肉提取液的凝血活性及糖抑制专一性, 同时进行热稳定性、pH 及Ca2+ 影响试验。结果表明, 血清和肌肉凝集素都可以凝集多种脊椎动物的红细胞, 其中对鸡红细胞的凝集效价均为最高, 分别为25和21; 血清和肌肉凝集素都不能凝集大肠杆菌, 均能凝集嗜水气单胞菌、枯草杆菌、变形杆菌和保加利亚乳杆菌。血清和肌肉凝集素都有一定的热稳定性, 血清凝集素60e 处理10 m in丧失凝集活性, 而肌肉凝集素50度处理10min凝集活性丧失。血清凝集素具有较广泛的pH 适应性, 在pH 6~ 10内对鸡红细胞均有凝集力, 而肌肉提取液凝集素在pH < 7或pH > 9 时凝集活性消失。血清凝集素能被乳糖和麦芽糖所抑制, 肌肉凝集素不能被受试的7 种糖所抑制。血清凝集素凝集活性明显地依赖于Ca2+ 等2 价离子,
而肌肉凝集素对C a2+ 等2 价离子没有依赖性。因此, 认为褶纹冠蚌血清和肌肉提取液所含凝集素类型不同。用嗜水气单胞菌对褶纹冠蚌进行免疫刺激后, 血清和肌肉凝集素对鸡红细胞的凝集效价并没有发生明显变化。 相似文献
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通过血凝试验及糖抑制试验,测定褶纹冠蚌的血清及肌肉提取液的凝血活性及糖抑制专一性,同时进行热稳定性、pH及Ca2+影响试验.结果表明,血清和肌肉凝集素都可以凝集多种脊椎动物的红细胞,其中对鸡红细胞的凝集效价均为最高,分别为25和21;血清和肌肉凝集素都不能凝集大肠杆菌,均能凝集嗜水气单胞菌、枯草杆菌、变形杆菌和保加利亚乳杆菌.血清和肌肉凝集素都有一定的热稳定性,血清凝集素60℃处理10 min丧失凝集活性,而肌肉凝集素50℃处理10 min凝集活性丧失.血清凝集素具有较广泛的pH适应性,在pH 6～10内对鸡红细胞均有凝集活力,而肌肉提取液凝集素在pH＜7或pH＞9时凝集活性消失.血清凝集素能被乳糖和麦芽糖所抑制,肌肉凝集素不能被受试的7种糖所抑制.血清凝集素凝集活性明显地依赖于Ca2+等2价离子,而肌肉凝集素对Ca2+等2价离子没有依赖性.因此,认为褶纹冠蚌血清和肌肉提取液所含凝集素类型不同.用嗜水气单胞菌对褶纹冠蚌进行免疫刺激后,血清和肌肉凝集素对鸡红细胞的凝集效价并没有发生明显变化. 相似文献
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日本沼虾血清凝集素特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
取日本沼虾血淋巴液,利用血凝实验和糖抑制实验测定其血清凝集素的凝血活性和糖专一性,对血清凝集素热稳定性、pH值、盐度、重金属离子、EDTA-Na2、有机磷农药、黄酮和多糖类物质对其活性的影响进行了探讨。结果显示:日本沼虾血清凝集素可以对兔、鸡、小鼠、蟾蜍和鲢鱼5种动物血红细胞产生凝集反应,以对小鼠和鸡血红细胞的凝集效价较高。能够专一性结合D-葡萄糖,D-果糖而产生抑制效果。在50~60℃范围内凝集活性最强,80℃及以上凝集素发生变性,无凝集活性。该凝集素pH值作用范围广泛,在pH值2～12都可以使鸡红细胞发生凝集,pH值3～7范围内凝集效果较好。盐度为13～15时,凝集活性最强。凝集素活性能被浓度高于16mmol/L(含16mmol/L)的EDTA-Na2完全抑制,对重金属离子Cu2+和Zn2+敏感性强,其活性被完全抑制。乙酰甲胺磷和敌百虫对日本沼虾血清凝集素活性有一定的影响,黄酮和多糖类物质可显著增强虾血清凝集素的凝集作用。 相似文献
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刺参凝集素的分离纯化及其性质 总被引：9，自引：0，他引：9
为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能。将刺参(Apotichopusjaponicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652Da。AJL的含糖量为20.9%。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强,在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状腺球蛋白所抑制,其最小抑制浓度为1.55mg.mL-1。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被二价金属离子Ca2 、Mg2 及EDTA所抑制。该凝集素在pH4.0~10.14系列缓冲液中均有活性,其中在pH4.4~7.5范围内血凝活性最高。该凝集活性在90℃加热30min后仍然对红细胞有凝集活性,显示出较高的热稳定性。 相似文献
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将中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素与动物(鳖、鲫鱼、鸡、鸽、兔、鼠、人A、B、O型)红细胞和细菌(八叠球菌、嗜水气单胞菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌和拟态弧菌)进行凝集反应。结果表明,中华绒螯蟹血清凝集素有明显的选择性,与小白鼠红细胞和八叠球菌的凝集活性最高(P<0.01)。血清凝集价在蟹个体之间变化范围较大,性别之间无显著差异(P>0.05)。10 mmol/L的CaCl2和300 mmol/L的NaCl不影响凝集素与小鼠红细胞和细菌的凝集活性,600 mmol/L的NaCl可降低其活性。pH 5~9不影响蟹凝集素活性,但400 mmol/L的EDTA在pH 7.0可部分抑制其活性,100 mmol/L的EDTA在pH 5.0则可完全抑制其活性。在细菌刺激下,中华绒螯蟹血清凝集素活性在2 d达到峰值,随后逐步缓慢下降。接种细菌(八叠球菌)的数量(3.0×109~9.0×109)显著影响血清凝集素的产生(P<0.05),而环境水温度(18~30℃)和蟹体质量(35~80 g)的影响则不显著(P>0.05)。 相似文献
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锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾混养试验 总被引：1，自引：0，他引：1
利用3口池塘共1.14 hm2进行锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾的混养试验,投放锯缘青蟹大眼幼体8500只,凡纳滨对虾苗2.03×105尾,经96~129 d的养殖,收获锯缘青蟹729.1 kg,凡纳滨对虾2804.3 kg;锯缘青蟹平均312 g/只,凡纳滨对虾57.5尾/kg;锯缘青蟹大眼幼体成活率27.5%,凡纳滨对虾成活率79.4%。试验结果表明,锯缘青蟹大眼幼体可以直接投入池塘中与凡纳滨对虾混养,将为今后大规模发展锯缘青蟹养殖摸索出一条有效途径。 相似文献
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试验表明九孔鲍血清中存在凝集素,可以凝集多种脊椎动物和人各型的血细胞,尤其对兔血细胞有很高的凝集效价(28)。该凝集素具有一定的热稳定性,40~50℃处理20 m in,其凝集活性稳定,70℃以上处理20 m in,凝集效价完全被破坏;pH 6~12凝集活性均保持最高值;Ca2 、Mg2 和ED-TA不影响其凝集活力;盐度对凝集活性影响不大,盐度为6~48,凝集活性一致;乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、蔗糖、木糖、麦芽糖、L-鼠李糖和山梨糖等10种糖对其不产生凝集抑制作用。 相似文献
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温度变化对锯缘青蟹免疫因子的胁迫影响 总被引：3，自引：0，他引：3
试验结果表明,温度变化对养殖锯缘青蟹免疫能力的影响显著。20℃时血细胞密度最高,远离20℃后,其血细胞密度随温度的上升或下降而逐渐降低,在10℃和30℃时降至最低;血细胞吞噬百分比在不同试验温度下无显著差异,但血细胞吞噬指数在25~27℃时极显著高于其他温度。血清溶菌酶和碱性磷酸酶活性皆在25℃时最高,并随温度的升高或降低而下降;酸性磷酸酶活力在20℃时最高,并随温度的升高或降低而下降;超氧化物歧化酶在不同试验温度下无显著差异;过氧化物酶在30℃时活性最低,其他各试验组间没有显著差异;酚氧化酶活性在30℃和27℃最高,其他各试验组间没有显著差异。试验结果表明,水温为20~25℃,锯缘青蟹相关免疫因子的各项指标较好,反映此时锯缘青蟹的抗病能力较强,而偏离该温度区间明显影响锯缘青蟹的免疫水平。 相似文献
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栉孔扇贝血清中的免疫因子的研究↑（*） 总被引：2，自引：0，他引：2
本文对栉孔扇贝血清的细菌凝集活性、抑菌活性和溶菌活性进行研究。选用２４种细菌和真菌进行凝集试验,发现栉孔扇贝血清能够对金黄色葡萄球菌和代远洋弧菌产生凝集作用,血清的细菌凝集作用经数种细菌刺激没有发生改变,说明这种凝集作用是不可诱导的。栉孔扇贝的血清对某些细菌的生长有一定的抑制作用,但在体外彻底杀灭细菌的效果极差,经大肠杆菌和副溶血弧菌刺激后,抑菌效果基本不变。栉孔扇贝血清还具有一定的溶菌作用,而且大肠杆菌的刺激可以明显提高这种溶菌作用。 相似文献
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A. J. AINSWORTH 《Journal of fish diseases》1993,16(5):449-459
Abstract. Seven isolates of Edwardsiella ictaluri were evaluated for channel catfish red blood cell and neutrophil agglutination properties and reactivity with lectins and carbohydrates. All isolates were agglutinated by lectin derived from Ricinus communis and the intensity of the agglutination reaction could be lessened or abrogated by premixing the lectin derived from Ricinus communis with β-D-galactose or α-L-fructose. Edwardsiella ictaluri isolates also sedimented much more rapidly when mixed with lectin derived from Ricinus communis than when mixed with other lectins. Premixing Ricinus communis with β-D-galactose had the greatest effect on slowing the rate of sedimentation. Two out of the seven E. ictaluri isolates were capable of agglutinating channel catfish red blood cells and anterior kidney neutrophils, and this agglutination could be prevented by the addition of β-D-mannose. Likewise, the per cent phagocytosis of E. ictaluri isolate 1389 (the most intense neutrophil agglutinator) could be dramatically reduced by the inclusion of mannose in the assay mixture. Anterior kidney leucocytes and hepatocytes primarily reacted with lectins derived from Canavalia ensiformis, Ricinus communis and Triticum vulgaris. The presence on channel catfish cells of carbohydrate-lectin receptors similar in function to those found on mammalian cells and the reaction of E. ictaluri with specific lectins suggest that bacterial clearance and lectinophagocyotosis may occur in a similar manner in catfish to that in mammals. 相似文献
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恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在拟穴青蟹体内的药代动力学 总被引：2，自引：1，他引：1
采用高效液相色谱法,研究盐度33条件下恩诺沙星口灌和肌肉注射给药(剂量10 mg/kg)后,恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在拟穴青蟹体内的药代动力学和组织分布。血淋巴和组织中药代动力学参数采用基于统计矩原理的非房室模型进行计算。恩诺沙星口灌和肌肉注射拟穴青蟹给药后,血药达峰快,分别为0.5 h和1 min,达峰浓度分别为12.90和31.86 μg/mL,曲线下面积(AUC)分别为216.1和816.8 μg/(mL·h)。恩诺沙星在拟穴青蟹组织中分布较广,口灌给药下肌肉和肝胰腺AUC分别为445.9和817.6 μg/(g·h),肌肉注射给药下的AUC分别为554.7和2 573.7 μg/(g·h)。与其它水产动物相比,恩诺沙星在拟穴青蟹体内消除速度为中等水平,口灌和肌肉注射恩诺沙星后血药消除半衰期(t1/2z)分别为26.45和57.02 h,总体清除率(CLz)分别为0.054和0.012 L/(h·kg)。恩诺沙星在拟穴青蟹体内代谢生成环丙沙星的量较少,口灌给药下血淋巴、肌肉和肝胰腺的AUCCIP/AUCENR分别为6.66%、3.66%和4.78%,肌肉注射给药下,其相应值分别为4.16%、7.24%和1.48%,在拟穴青蟹体内起药效作用仍是以恩诺沙星为主。以Cmax/MIC、AUC0-24/MIC评价恩诺沙星在青蟹体内的药效作用,建议给拟穴青蟹以10 mg/kg剂量每隔24小时投喂一次恩诺沙星,对弧菌引起的细菌性疾病具有较好的防治效果。 相似文献
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应用PCR方法检测患“黄水病”锯缘青蟹中的血卵涡鞭虫 总被引：3，自引：0，他引：3
"黄水病"是目前锯缘青蟹养殖过程中的主要疾病之一,病蟹主要症状表现为肌肉白浊,体液呈土黄色或浊白色牛奶状。因该病流行范围广、发病率和死亡率高,给青蟹养殖业主造成巨大经济损失,严重地影响了青蟹养殖的健康发展。本研究从病蟹体液中发现大量疑似血卵涡鞭虫的寄生原虫,应用已建立的梭子蟹血卵涡鞭虫病的PCR检测方法对患"黄水病"青蟹进行检测。结果从患病青蟹组织的DNA中扩增出产物大小为585bp的特异性目的片段,经序列分析比较,与三疣梭子蟹上发现的血卵涡鞭虫的序列同源,同源性达99.7%。综合病原流行病学调查、组织病理学、电镜观察等分析结果,初步确定血卵涡鞭虫是引起养殖青蟹"黄水病"的重要病原。 相似文献
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Enterococcus seriolicida strains were divided into two groups, agglutinating and nonagglutinating, by a slide agglutination test using antiserum against the YT-3 strain. Intraperitoneal injection of agglutinating and nonagglutinating strains into yellowtail, Seriola quinqueradiata Temminck & Schlegel, revealed that nonagglutinating strains were more virulent than agglutinating strains. Two nonagglutinating and highly pathogenic strains SS91–014 and SS91–092 were subcultured 30 times in brain heart infusion broth, and the agglutination titres of 50 colonies from subcultures 1, 2, 3, 4, 5, 6, 11, 16, 21, 26 and 30 against anti-YT-3 serum were determined. Transformation from a nonagglutinating (1:<4) to an agglutinating (1: ≥4) pattern was first observed at the sixteenth subculture, and the ratio of agglutinating to nonagglutinating substrains rose until the thirtieth subculture. At this time, 70% of the SS91–014 population and 52% of the SS91–092 population were transformed to an agglutinating pattern. When the pathogenicity of four transformed substrains with different agglutination titres was tested in yellowtail, the nonagglutinating substrain showed higher pathogenicity than the agglutinating substrains, but no relationship between LD50 values and the agglutination titres of transformed substrains was observed. The pathogenicity of E. seriolicida appears to be related to the agglutination pattern, although it was not demonstrated that this property is solely responsible for pathogenicity. 相似文献
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白斑综合征病毒(WSSV)在拟穴青蟹体内增殖的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
拟穴青蟹(Scylla paramamosain)因肉质鲜美、生长快速而成为我国主要的海水养殖经济蟹类,但是随着养殖规模的不断扩大,病害问题也越发严重。本研究通过流行病学调查和定量PCR跟踪检测的方法,研究了拟穴青蟹对白斑综合征病毒(WSSV)的易感性和WSSV在拟穴青蟹体内的增殖情况。结果表明,拟穴青蟹是WSSV的自然宿主,自然携带率为8.47%。WSSV可通过口服途径感染拟穴青蟹,并在拟穴青蟹体内快速增殖,注射感染5 d后,病毒量达到感染1d时的1.1×109倍,当病毒累积到一定量后即可致死拟穴青蟹。研究表明,拟穴青蟹是WSSV的天然宿主,在虾蟹混养过程中可以通过摄食WSSV感染虾而带毒或发病,并因此成为WSSV传播媒介,从而对虾蟹混养条件下WSSV的防治效果产生重要影响。 相似文献