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1.
编码在ＩＢＤＶ变异株ＧＬＳ大基因组片段Ａ的ＶＰ２结构基因经过修饰后，编译出只在ＩＢＤＶ标准株才能见到的中和表位，编码有ＶＰ３，ＶＰ４的大片段Ａ的一个嵌合ｃＤＮＡ克隆和修饰过的变异ＩＢＤＶＶＰ２结构蛋白在一重组杆状病毒中得到表达。用一组中和单抗（ＭＡｂ）对表达的嵌合蛋白评价后指出，此嵌合蛋白不仅含有以前用ＭＡｂ鉴定过的所有ＧＬＳ变异株表位，而且还含有只有标准株才见到的Ｂ５９中和表位，这种亚单位疫苗对 相似文献
2.
用单克隆抗体（ＭＡｂ）对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）不同毒株中和表位的相关性进行了分析。ＭＡｂ Ｂ６９能中和同源病毒Ｄ７８株，但不中和ＭＤ及ＩＢＤＶ Ｄｅｌ－Ａ变异株。而ＭＡｂ ３３Ｅ８和Ｒ６３能中和Ｄ７８株和ＭＤ及Ｄｅｌ－Ａ变异株。在体外将Ｄｃｌ－Ａ株ＶＰ２基因和一个１０＾３ｂｐ片段的ｃＤＮＡ克隆进行翻译，得到６种多肽，它们代表了一个全长产物（３５．５ｋｄ）和５份切割片段。用ＭＡｂ Ｂ６９、３ 相似文献
3.
将从鸡、鸭和麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ用ＳＰＦ鸡胚增殖,采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒,鉴定结果表明,这种方法可有效地将病毒与杂蛋白分开。用异硫氰酸胍－酚－氯仿－抽提一步法提取病毒ＲＮＡ,电泳分析表明,三种ＩＢＤＶ均由双节段ＲＮＡ组成,大、小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,各ＩＢＤＶ的结构蛋白带谱相同,但各蛋白带的相对百分含量有差异,表明这些不同ＩＢＤＶ分离株的同源性和变异。本文还对ＩＢＤＶ的纯化和变异进行了讨论。 相似文献
4.
鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达 总被引：11，自引：2，他引：11
将含有传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ（从ＡＴＧ到Ｓ前体蛋白裂解位点）的片段克隆到具有多角体启动子（ＰＸＩＶ）和人工合成启动子（Ｐｓｙｎ）的杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＋Ｘ３中，构建了重组转基因载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｓ１．Ｄ４１。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ｏｃｃ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，筛选并纯化出既能表达Ｓ１基因又能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＩＢＶＳ１－ｏｃｃ＋（ｏｃｃ＋，ｇａｌ－）。通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等方法在感染了重组病毒的Ｓｆ９细胞中成功地检测到分子量约６２０００的Ｓ１基因表达产物。虽然该重组Ｓ１糖蛋白可能由于Ｎ－糖基化不完全而分子量小于天然蛋白，但它可以像正常病毒粒子一样，被鸡抗ＩＢＶＤ４１株血清特异识别。 相似文献
5.
不同传染性法氏囊病病毒分离株VP2基因部分核酸序列及其编码蛋白的比较 总被引：3，自引：1，他引：2
根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列,在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域,设计 １ 对引物,并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４,用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中,以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较, Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列, Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ , Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异,而且在病毒核酸序列上有变异,这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。 相似文献
6.
鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达 总被引：8，自引：1，他引：7
将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。 相似文献
7.
传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
根据传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因ＣＤＮＡ序列,在ＶＰ２基因高变区设计一对引物,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＩＢＤＶ分离株ＪＳ３和ＪＳ４。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸旬。ＪＳ３和ＪＳ４的同源性最高达９８％。与已发表的ｖｖＩＢＤＶ,ＩＢＤＶ变异要ＢＤＶ经典株为ＩＢＤＶ弱毒株核苷酸序列的同尖拨天９２￣９８％之间,根据ＩＢＤＶ的大ＯＲＦ推导出该片段蛋白的氨基酸序更,ＪＳ３和ＪＳ４的 相似文献
8.
鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用 总被引：11，自引：0，他引：11
将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。 相似文献
9.
从狂犬病病毒３ａＧ株感染的ＢＨＫ细胞裂解上清液中快速提取病毒ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ得到编码核蛋白完整结构基因的ｃＤＮＡ,进一步将此基因克隆入ｐＵＣ １８中,进行核苷酸序列分析,并与国外狂犬病病毒ＰＶ,ＣＶＳ,ＳＡＤＢ１０株以及国内另一狂犬病病毒５ａＧ株的Ｎ基因序列进行了同源性比较。然后将Ｎ基因正向插入真核表达质粒中,转染ＣＯＳ７细胞,用免疫组化方法证明所克隆基因可在细胞中正确表达出了Ｎ蛋白。 相似文献
10.
从狂犬病病毒 ３ａ Ｇ 株感染的 Ｂ Ｈ Ｋ 细胞裂解上清液中快速提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 得到编码核蛋白完整结构基因的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ。进一步将此基因克隆入 ｐ Ｕ Ｃ １８中,进行核苷酸序列分析,并与国外狂犬病病毒 Ｐ Ｖ、 Ｃ Ｖ Ｓ、 Ｓ Ａ Ｄ Ｂ１ ９ 株以及国内另一狂犬病病毒 ５ａ Ｇ 株的 Ｎ 基因序列进行了同源性比较。然后将 Ｎ 基因正向插入真核表达质粒中,转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞,用免疫组化方法证明所克隆基因可在细胞中正确表达出 Ｎ 蛋白。 相似文献
11.
传染性法氏囊病病毒VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达 总被引：3，自引：1，他引：2
以鸡痘病毒复制非必需区ＴＫ基因为侧翼,在牛痘病毒Ａ型包涵体晚期启动子（ＡＴＩ）与１６个串联的突变型早期痘苗病毒ｐ７．５启动子组成的复合启动子的下游,分别插入编码传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）结构蛋白ＶＰ２和ＶＰ２－４－３（ＶＰ０）的基因片段后,进行了同源重组和蓝斑筛选,获得２株重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７和ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０。经ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７能表达ＶＰ２,ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０能表达ＶＰ２和ＶＰ３,ＶＰ２和ＶＰ３的Ｍｒ分别为４１０００和３２０００。 相似文献
12.
贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸乃结构蛋白比较研究 总被引：6，自引：2，他引：4
采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成，近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的Ｉ型强毒Ｊ１Ｃ７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电 相似文献
13.
用表达非融合蛋白的原核表达载体ｐＢＶ２２０,通过ＰＣＲ技术的引物设计对ＰＲＲＳ病毒ＢＪ－４株核衣壳蛋白（Ｎ）基因起始密码子上游进行了改造和修饰,在其上游加入了 ＥｃｏＲＩ酶切位点。将 ＰＲＲＳ病毒 Ｎ基因插入载体 ｐＢＶ２２０ ＰＬＰＲ启动子和Ｓ－Ｄ序列下游合适距离的位置,成功地构建了含有ＰＲＲＳ病毒Ｎ基因的原核重组表达载体ｐＢＶ－Ｎ。ｐＢＶ－Ｎ转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,经温度诱导后菌体裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现,在约１５ｋＤ处出现一条特异性的目的蛋白条带,分子量大小与ＰＲＲＳ病毒Ｎ蛋白相符,而诱… 相似文献
14.
传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定 总被引：3，自引：2，他引：1
采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从１株传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）本地分离株ＧＺ９０２中扩增到编码ＩＢＤＶ主要免疫蛋白ＶＰ２的ｃＤＮＡ片断，大小约为１３５０ｂｐ。将该ｃＤＮＡ片断插入ｐＢｓＫ质粒中，用重组质粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片断与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相符。对ＧＺ９０２高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与３株ＩＢ－ＤＶ变异株Ａ、ＧＬＳ、Ｅ的同源性分别达到９８．９％，９６．２％和９５．５％。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从ＤＮＡ序列推导出的氨基酸序列，发现ＧＺ９０２高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化，而在２４９和２５４位上的氨基酸分别为Ｋ和Ｓ，与以上３个变异株相同，但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为ＩＢＤＶ变异株的标志。 相似文献
15.
采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。 相似文献
16.
传染性法氏囊病病毒抗原性研究进展江青艳，张曼夫（北京农业大学）传染性法氏囊病（ＩＢＤ）是严重危害养鸡业的一大疫病，其病原为ＩＢＤ病毒（ＩＢＤＶ）。ＩＢＤＶ在分类上属于双ＲＮＡ病毒科，病毒基因组共编码出ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３和ＶＰ４四种主要的病毒蛋白，... 相似文献
17.
将编码猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）主要抗原蛋白的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０的ＰｒＰ１串联启动子的下游,分别构建了重组质粒ｐＢＶ２２０－ＶＰ３（０．６ｋｂ）及ｐＢＶ２２０－ＶＰ３－ＶＰ１（约１．６ｋｂ）,表达的蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测,结果表明,表达的ＶＰ３蛋白只与猪水泡病病毒ＶＰ３特异性亚单位抗血清反应,而ＶＰ３－ＶＰ１蛋白未能成功表达。该实验为ＳＶＤＶ疫苗研究奠定了基础。 相似文献
18.
以光敏生物毒标记传染性支气管炎病毒Ａｒｋ株３’末端及部分Ｎ蛋白基因的ｃＤＮＡ克隆片段，进而与提取的ＩＢＶ标准毒株Ｍ４１，Ｈ５２和分离的ＹＧ以及新城疫病毒，传染性法氏囊炎病毒、病毒性关节炎病毒的标准株ＬａＳｏｔａ，Ｄ７８和Ｓ１１３３的ＲＮＡ进行斑点杂交试验。 相似文献
19.
以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导 相似文献
20.
不同禽鸟类传染性法氏囊病病毒分离物核酸及结构蛋白的比较 总被引：6，自引：0，他引：6
将从鸡、鸭和麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ用ＳＰＦ鸡胚增殖，采用氯仿抽提，聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒，鉴定结果表明，这种方法可有效地将病毒与杂蛋白分开。用异硫氰酸胍－酚－氯仿－抽提一步法提取病毒ＲＮＡ，电泳分析表明，三种ＩＢＤＶ均由双节段ＲＮＡ组成，大、小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，各ＩＢＤＶ的结构蛋白带谱相同，但各蛋白带的相对百分含量有差异，表明这些不 相似文献