荧光PCR法定量检测动物源性饲料中的牛、羊成分   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄士新  沈富林  李洁  周文骏  曹莹  孙亚云 《上海畜牧兽医通讯》2004,(4):12-13

疯牛稿是由于健康牛食入含有致病性朊粗的人工蛋白质饲料(肉骨粉)所致，而目前尚未见能有效、快速地检测饲料中牛、羊成分的技术报道。本文在前期研究的基础上．运用荧光定量PCR法．针对牛、羊、鸡、猪几种不同动物的特异性基因序列设计了牛、羊两种动物的特异性探针，通过对整个PCR过程的实对荧光监测，来鉴定饲料中的牛、羊成分，并对其定量范围做了简单的计论。本方法能有效解决普通PCR的样品污染问题，具有特异性强、是敏度高、重复性好等特点。  相似文献   

实时荧光PCR法检测饲料中牛、羊源性成分     

刘彦泓  闵健  毛希琴 《黑龙江畜牧兽医》2019,(14)

为了快速准确地检测饲料中牛、羊源性成分,试验采用实时荧光PCR方法,分别以牛、羊各自物种特异性基因为研究对象,设计实时荧光PCR扩增的特异性引物及探针,建立饲料中牛、羊源性成分的实时荧光PCR检测方法。结果表明:该检测方法特异性强、灵敏度高(达到0. 01%),可以作为饲料中牛、羊源性成分检测的常规方法。通过对15种市售饲料样品进行检验,结果 2种饲料骨粉未标明含有羊源性成分,但检出;1种饲料骨粉标签中未标明成分,但检出牛源性成分,证实该方法操作简便快捷,可以快速、准确、大批量地开展饲料的日常检测工作。  相似文献   

饲料中牛羊源性成分的定性检测——定性聚合酶链式反应法(PCR)法     

《科技视界》2013,(10)

目的:为防止疯牛病和痒病的传播。方法:研究提供了一种利用从动物饲料中提取牛羊动物基因组DNA的方法,并依据牛、羊基因组DNA的特异性序列片段,利用种属特异性的引物,通过PCR扩增这一特定的DNA序列,通过电泳分离PCR产物,以长度的PCR产物作对照。结论:实现了对动物饲料中牛、羊源成分的检测。  相似文献   

牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

《中国兽医学报》2017,(6):1059-1064

本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检测牛支原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.994,扩增效率E=1.280。荧光定量PCR法检测的敏感性是常规PCR的10倍;特异性良好,检测9种相关细菌和病毒均为阴性;重复性好,组内及组间样本检测Ct值均小于2%。牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法较之于常规PCR方法有快速、特异性强、敏感性高、稳定性好的优点。  相似文献   

应用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR溶解曲线检测鹌鹁源性成分     

张慧霞  宗卉  吴建平  张利平 《中国畜牧杂志》2010,46(17)

根据GenBank中的鹌鹑线粒体DNA(mtDNA)12S RNA基因保守序列,用Primer5.0软件设计了1对针对鹌鹑的特异性扩增引物,建立了一种检测鹌鹑动物源性成分的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法.通过SYBRGreen Ⅰ实时荧光PCR反应,同时进行溶解曲线和Tm值分析.结果表明:只有鹌鹑样品在Tm值为82℃下有特异的溶解曲线峰,而参考物种鸽子、鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鹧鸪、牛、羊、猪、马、驴、鱼和空白对照,则无特异的溶解曲线峰,说明该引物只对鹌鹑有特异性.测序结果表明,鹌鹑组织SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列相吻合;该方法的检测灵敏度为0.001%.  相似文献   

鉴别牛结节性皮肤病病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用          下载免费PDF全文

赵钟毅  闭璟珊  尹德玮  吕荞  吴健皓  韦正吉  邹联斌  苏姣秀  汪伟  辛佳亮  彭久青  李文静  郑敏  胡传活 《中国动物检疫》2023,40(2):117-124

为实现牛结节性皮肤病病毒（LSDV）和羊痘病毒属（CaPV）其他成员的鉴别诊断，针对LSDV 010基因保守区域设计特异性引物及Taq Man探针，与文献报道的CaPV 068基因的通用引物及探针组合，通过优化反应体系和条件，建立了一种可同时鉴别检测LSDV和CaPV其他成员的双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：本方法可以特异性扩增LSDV和CaPV其他成员，并且与其他牛、羊病毒无交叉反应，特异性好；对pLSDV-010和pCaPV-068质粒标准品的最低检测限均为15 copies/μL，具有较高的灵敏性；组内和组间变异系数均小于1.75%，重复性良好。应用本试验建立的方法与荧光定量PCR方法同时检测542份临床样品，发现CaPV的样品符合率为98.52%,LSDV为99.63%。本试验建立的方法为CaPV鉴别筛查、LSDV精准防控及流行病学调查提供了快捷有效的技术手段。  相似文献   

动物产品中猪源性和牛源性成分双重荧光PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵冉 《畜牧与饲料科学》2012,33(10):1-4

[目的]建立双重荧光PCR法,检测动物产品中猪、牛源性成分。[方法]分别针对猪、牛线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）种间保守基因,设计特异性引物与探针,通过对反应体系和反应条件的优化筛选,建立了双重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成2种动物源性成分的检测。并对该方法的特异性、敏感性进行评估。[结果]对16种不同的动物DNA进行检测．仅猪、牛源性成分收集到相应的典型的S型扩增曲线,对猪、牛二联模板的检测,可同时收集到相应模板的扩增曲线．其余14种动物源性成分未发现扩增曲线。双重荧光PCR对猪肉、牛肉模板的最低检出限均为10^-5,与相应的单重荧光PCR方法的检出限一致。[结论]该方法特异性强,敏感性高,适用于肉制品、奶制品、饲料等动物源性产品的检测。  相似文献   

PCR检测技术在奶牛结核病鲜乳样本监测中的应用     

《中国兽医杂志》2016,(10)

奶牛结核病是一种严重的人兽共患传染病,为建立可快速评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本试验根据牛分枝杆菌基因组合成特异性引物,建立普通PCR方法和实时荧光定量PCR方法,并评价该方法的性能。结果可见,本试验所建立的普通PCR方法和实时荧光定量PCR方法能有效检测牛分枝杆菌目的基因,且均具有较好的敏感性、特异性,可对鲜乳样本进行检测,且实时荧光定量PCR方法比普通PCR方法更敏感。试验结果表明,所建PCR方法可用于鲜乳样本牛分枝杆菌的定性和定量检测,这为鲜乳牛分枝杆菌污染状况和食品安全评估提供重要技术。  相似文献   

采用定量竞争PCR技术定量分析猪DNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

Wolf  高军肖  魏宏阳 《中国畜牧兽医》2003,30(1):53-53

当今的许多肉产品都可能由几种动物的肉按照不同比例组成。为保证消费者不受欺骗，有必要对复合食物产品的成分同时进行定性和定量监测，多聚链式聚合反应（PCR）等以DNA为基础的技术被广泛应用于种类鉴定，但利用当前的技术不能测出某种特定成分的比例，本研究报道了一种用于猪DNA检测和定量分析的定量竞争多聚链式聚合反应技术（QC－PCR的开发和评定，该技术采用一种以生长激素基因sus scrofa为基础的新型猪特异性PCR系统，构建一个与猪的目标序列在长度上仅差30bp的DNA竞争物，与目标序列一起用于PCR。用来自牛、羊、肉鸡和火鸡的DNA对这个新引物的特异性进行了评价，通过含有猪DNA和相应数量牛DNA的混合物的共同扩增使竞争物的浓度调到猪DNA含量的2％或20％。  相似文献   

羊泰勒虫PCR检测方法的建立和初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

盛明宏  于建敏  王志亮  张西臣  吴鑑三 《中国动物检疫》2007,24(7):20-22

利用羊泰勒虫18SrRNA基因的序列特点,设计合成种特异性引物,建立羊泰勒虫PCR检测方法,该方法能特异性扩增398bp的羊泰勒虫18SrRNA基因片段,而对羊巴贝斯虫、羊无浆体、牛环形泰勒虫和牛伊氏锥虫的基因组DNA没有扩增带出现。对羊泰勒虫基因组DNA的最小检测量为0.12fgDNA。通过检测124份临床样品,24份为羊泰勒虫感染阳性,其余为阴性。结果表明,建立的PCR检测方法具有极高的敏感性和特异性,可用于羊泰勒虫病和临床健康带虫羊的诊断。  相似文献