番茄环斑病毒和烟草环斑病毒复合型胶体金免疫层析试纸条的研制   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏梅生  杨翠云  李桂芬 《植物检疫》2008,22(2):75-78

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的兔多克隆抗体,用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好2条病毒检测线（T线）和1条羊抗兔抗体质控线（C线）,制成复合型免疫层析检测试纸条。一张试纸条在10min内,可同时检测出这两种病毒。试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg/mL,试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的混合病汁液可稀释1000倍（重量/体积）。用健康叶片和缓冲液对照测试,试纸条结果都为阴性。  相似文献   

基于纳米磁珠-LAMP结合技术检测齿兰环斑病毒的初步研究     

《植物检疫》2015,(4)

根据齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列,设计了LAMP检测引物,并结合纳米磁珠技术对齿兰环斑病毒进行LAMP检测。结果表明,只有齿兰环斑病毒毒株有扩增,而建兰花叶病毒、烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒毒株都没有扩增,说明本实验设计的LAMP检测引物具有检测齿兰环斑病毒的特异性。灵敏度实验结果表明,纳米磁珠-LAMP结合技术比RT-PCR方法高100倍。研究表明,纳米磁珠-LAMP结合技术检测方法是一种特异、灵敏、快速的齿兰环斑病毒检测方法。  相似文献   

从荷兰进境的萝卜种子中截获烟草环斑病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

文朝慧  刘箐  王军平  刘雅莉  张丽萍  宋蕤 《植物检疫》2009,23(6)

2009年2月甘肃局接受了一批来自荷兰的萝卜种子的报检.经实验室采用DAS-ELISA血清学方法检测,发现该批样品与烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)多抗血清呈阳性反应,随后采用IC-RT-PCR方法对样品进一步实验验证,结果扩增出TRSV特异性目的片段,证明该批种子中携带烟草环斑病毒.  相似文献   

烟草环斑病毒DB-RT-Realtime PCR检测方法研究   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

郑耘  杨伟东  陈枝楠  李明福  章桂明  余道坚  张永江 《植物保护》2007,33(1):117-120

  相似文献   

利用实时荧光RT-PCR方法检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨翠云  于翠  张舒亚  高焕利 《植物检疫》2006,(Z1)

根据番茄环斑病毒和烟草环斑病毒各分离物CP基因的保守序列分别设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,分别建立了ToRSV和TRSV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,在口岸病害检疫中具有广泛的应用前景。  相似文献   

从德国鼠尾草中检测出3种危险性病毒     

孔宝华  陈海如  蔡红  蒋小龙  沐咏民  魏正  唐惠  曹云华  李凡  刘进元 《植物检疫》2000,14(2):76-77

对世博会来自德国的鼠尾草进行了目检、酶联实验、电镜观察及生物接种实验.初步确证鼠尾草携带番茄环斑病毒(ToRSV),南芥菜花叶病毒(ArMV)和烟草环斑病毒(TRSV).  相似文献   

番茄环斑病毒研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

夏更生  张成良 《植物检疫》1990,(3)

50多年的研究表明:番茄环斑病毒(Tomato Ringspet Virus-ToRSV),是线传病毒组成员,寄主范围广,包括105属157种草本和木本植物,分布也很广,到目前已有27个国家报道过这种病毒,主要是在果树和浆果作物上引起严重的病害,北美尤为严重。1936年,Price 最早从烟草幼苗上分离到这种病毒,并对它的生物学特征作了描述,和烟草环斑病毒在寄主范围和症状表现上都很相似,最初定名为烟草环斑病  相似文献   

斑点免疫金和免疫金/银染色法检测烟草环斑病毒   总被引：11，自引：4，他引：7  

魏梅生 《植物检疫》2000,14(1):1-2

在硝酸纤维素膜上进行的斑点免疫胶体金检测烟草环斑病毒技术已经建立.免疫金染色检测提纯病毒的灵敏度为25ng,检测病汁液可稀释10倍.使用免疫金/银染色则灵敏度更进一步提高.  相似文献   

葡萄的两种检疫性病毒的多重RT-PCR检测   总被引：3，自引：0，他引：3  

薛杨  安德荣  李明福 《植物病理学报》2005,35(Z1):14-17

 本研究利用多重RT-PCR技术,对葡萄的检疫性病毒中番茄环斑病毒(ToRSV)和烟草环斑病毒(TRSV)进行检测,并研究了反应体系中各个参数对多重RT-PCR的影响。结果表明:可以在同一反应体系中实现对ToRSV和TRSV的RT-PCR检测,但模板浓度、引物浓度、循环数等3个因素对检测结果的准确性有较大的影响,3个参数的增加都会导致非特异性扩增的增多,而dNTP以及Taq酶的浓度对实验结果并无较大影响。  相似文献   

一种新的适用于ELISA的抗血清纸片保存法     

宋淑敏 《植物检疫》1994,8(4):202-204

用特异性抗血清制备的抗血清纸片应用于酶联免疫吸咐实验（ＥＬＩＳＡ），取得了良好的结果。目前已将抗血清纸片用于南芥菜花叶病毒（ＡｒＭＶ）、番茄环斑病毒（ＴｏｍＲＳＶ）、烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）、南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）等进境植物危险性病毒的检测，取得与使用冻干保存抗血清相同的效果。应用抗血清纸片方便、经济、便于保存和邮寄。  相似文献   

几种危险性病毒抗血清的制备及检测方法的建立   总被引：1，自引：2，他引：1  

陈京  陈燕芳 《植物检疫》1997,11(4):202-204

番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和南芥菜花叶病毒用改进的方法提纯后免疫兔子，制备出高质量的抗血清。琼脂扩散效价为１／３２０，用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法检测病汁液可达１０－３～１０－４。３种血清之间无交叉反应，与健康寄主和常见的自然寄主蛋白也无反应。应用３种血清分别对２３种植物１００多个采集的样品和进口种子进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测，未发现有上述３种病毒存在  相似文献   

番茄褐色皱果病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用     

李献锋  胡淑青  魏霜  丁钿  冯黎霞  于璇  胡学难 《植物检疫》2022,(1):25-33

根据番茄褐色皱果病毒（tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV）外壳蛋白（coat protein,CP）的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒（tomato mosaic virus,ToMV）、番茄环斑病毒（tomato ringspot virus,ToRSV）、番茄黑环病毒（tomato black ring virus,TBRV）、番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt virus,TSWV）、辣椒轻斑驳病毒（pepper mild mottle virus,PMMoV）、烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）和烟草环斑病毒（tobacco ri...  相似文献   

胶体金免疫层析法快速检测烟草环斑病毒   总被引：14，自引：3，他引：14  

魏梅生  李桂芬  张周军  陈燕芳  李明福  相宁 《植物检疫》2002,16(2):81-83

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记烟草环斑病毒的抗体 ,制成免疫层析检测试纸条。检测粗提纯病毒的灵敏度为 1 0 0 0ng/ml,病汁液稀释 1 0 0 0倍后仍可快速检出。对大豆病种子、烟草冻干病叶等不同材料进行检测也有良好的效果 ,1～ 2min即可出现结果。用 9种不同的病毒进行测试 ,未出现非特异性反应。  相似文献   

单管多重RT-PCR同时检测大豆种子中三种检疫性植物病毒   总被引：1，自引：0，他引：1  

易汪雪  宋绍祎  吴东妮  代欢欢  杨翠云  于翠 《植物保护》2016,42(5):113-117

我国大豆年进口量持续增长,快速、准确地检测进境大豆种子中可能携带的病原物是防止检疫性有害生物入境传播和扩散的有效手段。菜豆荚斑驳病毒(BPMV)、烟草环斑病毒(TRSV)和番茄环斑病毒(ToRSV)均是被大豆种子携带的检疫性有害生物。本研究建立了在单一PCR管中同时检测这3种检疫性植物病毒及大豆内源基因Bd-30K的多重RT-PCR方法。研究结果表明,所建立的多重RT-PCR方法具有较好的特异性和灵敏度,检测含BPMV、TRSV和ToRSV RNA的最低浓度分别为0.45、0.0093和0.004ng/μL,从大豆种子中同时检测3种病毒的最低RNA浓度为0.58ng/μL。  相似文献   

番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测     

李桂芬  马洁  魏梅生  朱水芳 《植物检疫》2009,23(6)

将纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)制剂免疫BALB/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株分泌ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为1H8、1D4.用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG1亚类.间接ELISA效价测定结果1H8为1:105,1D4为1:106.TAS-ELISA实验结果表明此2株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的从德国引进的番茄环斑病毒分离物、从美国ATCC引进的番茄环斑病毒分离物PV-100、PV-174、PV-239发生特异性反应,而不与同属其它3种病毒:烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)发生反应.  相似文献   

不同缓冲液对烟草环斑病毒胶体金免疫层析试纸条测试的影响     

魏梅生  李桂芬  马洁 《中国植保导刊》2008,28(1):42-43

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)为豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传病毒属(Nepovirus)的典型成员.TRSV寄主范围广泛,可为害54科246种草本和木本植物,在许多重要农作物如大豆、烟草上为害严重.  相似文献   

电化学酶联免疫分析检测烟草花叶病毒和烟草环斑病毒     

封立平  孙伟  陈长法  焦奎 《植物检疫》2002,16(6):324-327

以邻苯二胺 (OPD)底物为例 ,用抗原直接包被法 (DAC -ELISA)同线性扫描极谱法 (LSV)相结合 ,检测烟草花叶病毒 (TMV)的提纯液 ,检出限可达 0 2 5ng/ml,TMV粗提液的最高稀释比为 1 :1 0 2 4 0 0 ;检测烟草环斑病毒 (TRSV)提纯液 ,检出限为 1 0ng/ml,粗提液的最高稀释比为 1 :1 0 0 0 0 ,该方法的灵敏度比DAC -ELISA光度法提高了 5倍以上  相似文献   

烟草上环斑,叶脉坏死症状的病原鉴定     

陈燕芳  白松 《中国进出境动植检》1997,(3):26-27

烟草上环斑、叶脉坏死症状的病原鉴定陈燕芳陈京白松丁元明（农业部植物检疫实验所１００２９）（昆明动植物检疫局６５００３４）近年国内有人认为我国有些地方烟草叶片上表现出的褪绿环斑或坏死环斑症状是由烟草环斑病毒引致的。为了澄清其病原，１９９３年３月，我们从...  相似文献   

南方菜豆花叶病毒酶联试剂盒的测评   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏梅生  范晓虹 《植物检疫》1999,13(5):281-283

南方菜豆花叶病毒酶联检测试剂盒,采用直接双抗体夹心法。主要由已包被特异性的酶联板、碱性／磷酸酯酶标记的抗体、对硝基苯磷酸盐底物以及浓缩清洗液等几部分组成。该试剂盒的检测灵敏度可达８ｎｇ／ｍｌ提纯病毒。检测大豆病叶可达１：１０００。检测大豆病种子可达１：１００,与黄瓜花叶病毒,马铃薯Ｙ病毒,烟草环斑病毒,烟草花叶病毒呈阴性反应,同时选用大柬告示５和阴性对组,ＯＤ值读数均较低,背景反应好,未出现假阳性  相似文献   

黄瓜绿斑驳花叶病毒磁免疫层析试纸条的研制     

魏梅生  李桂芬  马洁  朱水芳  王军平  文朝慧 《植物保护》2014,40(3):113-116

用磁性纳米颗粒标记黄瓜绿斑驳花叶病毒的兔多克隆抗体建立了简便快速的磁免疫层析试纸条检测方法。该方法检测提纯病毒的灵敏度为0.1 μg/mL,检测葫芦病汁液可稀释10 000倍(重量／体积)。试纸条和黄瓜绿斑驳花叶病毒具有特异性反应,和同属的烟草花叶病毒、番茄花叶病毒、辣椒轻斑驳病毒和齿兰环斑病毒,未出现交叉反应。该试纸条可用于田间病害检测和诊断。  相似文献