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1.
《中国兽医杂志》2014,(11)
研究活性氧(ROS)与脂多糖(LPS)诱导后巨噬细胞活化诱导凋亡的关系。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用不同浓度LPS诱导细胞,添加100μmol/L H2O2增加细胞内ROS,或用姜黄素(7.5μmol/L)降低细胞内ROS;流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和ROS。结果显示,RAW264.7细胞凋亡和细胞内ROS水平均随LPS浓度增加而增加,高浓度的LPS导致MMP下降;与LPS(8μg/m L)单独作用组比,H2O2增加ROS,并导致凋亡细胞百分率增加;姜黄素降低LPS诱导的细胞凋亡,同时减少细胞内ROS。表明活性氧参与LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化诱导凋亡。 相似文献
2.
《畜牧与兽医》2015,(1):70-72
探讨蒲公英甾醇对脂多糖(LPS)激活小鼠RAW264.7细胞分泌一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的影响。培养小鼠RAW264.7细胞,用MTT法测定不同浓度蒲公英甾醇对RAW264.7细胞的毒性作用,确定无细胞毒性剂量范围;采用Griess试剂法和ELISA法测定蒲公英甾醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO和PGE2的影响。结果表明:蒲公英甾醇0~20μg/m L浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用,对LPS刺激的RAW264.7细胞NO和PGE2分泌具有明显的抑制作用,且呈一定的量效关系和时效关系。其中蒲公英甾醇在浓度12.5μg/m L、时间24 h时对NO和PGE2释放的抑制作用最明显。 相似文献
3.
为研究西番莲多糖提取物（Passiflora edulis polysaccharide extract，PEPE）对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）感染RAW264.7细胞氧化应激相关因子的影响，本试验探讨了PEPE对氧化应激的调节作用。在96孔细胞培养板中每孔加入100 μL浓度为1×106个/mL的RAW264.7细胞，分别设细胞对照组、PEPE组（25、50、100、200、400、800和1 600 μg/mL），分别于培养箱培养24和48 h，用MTT法检测细胞活性，筛选PEPE的药物安全浓度范围。试验分为以下6个组：细胞对照组、病毒组、PEPE高（400 μg/mL）、中（200 μg/mL）、低（100 μg/mL）剂量组及维生素C组，其中细胞对照组加入含10% FBS的DMEM培养液，其余组加入PCV2病毒液，孵育2 h后在PEPE组加入对应浓度的PEPE溶液，VC组加入配制好的VC溶液，细胞对照组和病毒组加入含10% FBS的DMEM培养液，培养48 h，同样用MTT法检测细胞活性，以研究PEPE对PCV2感染RAW264.7细胞活性的影响。按照上述6个试验组分组，处理同上，将细胞培养12 h，收集样品用于检测氧化应激相关因子水平。用Griess法和DCFH-DA荧光探针分别检测RAW264.7细胞上清中NO含量和细胞内活性氧（ROS）水平、OPT荧光法检测细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量，化学发光法检测细胞内黄嘌呤氧化酶（XOD）、髓过氧化物酶（MPO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活力。结果显示，PEPE对RAW264.7细胞的安全浓度范围为25~400 μg/mL。PCV2感染RAW264.7细胞后，细胞活性显著降低（P<0.05），而不同浓度PEPE处理组均能提高细胞活性。RAW264.7细胞被PCV2感染后，细胞分泌NO、ROS水平，GSSG含量及XOD、MPO和iNOS活性显著升高（P<0.05），感染细胞GSH含量显著降低（P<0.05）；PEPE作用于PCV2感染的RAW264.7细胞，显著降低感染细胞NO、ROS水平、GSSG含量及XOD、MPO和iNOS活性（P<0.05），100 μg/mL PEPE处理组细胞GSH水平显著升高（P<0.05）。本试验结果表明，PEPE能提高PCV2感染RAW264.7细胞的抗氧化能力，有利于缓解病毒感染所致氧化应激。 相似文献
4.
替唑尼特对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激及炎症因子的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国动物传染病学报》2019,(2)
本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)建立氧化应激模型,探讨替唑尼特(TIZ)的抗氧化和抗炎效果。培养RAW264.7细胞,给予LPS(1μg/m L)刺激并用TIZ(25、50、75、100μmol/L)作用。MTT法检测细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测TIZ对ROS生成的影响;同时,检测MDA的生成量以评估TIZ对脂质氧化的影响;检测GSH的含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性以评估TIZ对细胞抗氧化系统的影响;检测IL-6的分泌和COX-2的表达量以评估TIZ对炎症细胞因子的作用。结果显示LPS刺激后细胞表现出显著性的氧化应激效应,而给予TIZ处理后,ROS和MDA生成量呈剂量相关性的显著下降;细胞IL-6的分泌和COX-2的表达量也随TIZ处理而显著下降,而GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px活性在TIZ处理后却呈剂量相关性的显著性上升。因此,TIZ可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症反应,这为TIZ的作用机制研究以及应用奠定了基础。 相似文献
5.
为研究太子参参须多糖(RPFRP)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用及作用机制，本研究利用MTT法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的增殖情况，筛选出RPFRP的适宜浓度为25μg/mL～400μg/m L。将25μg/mL～400μg/m L RPFRP作用于RAW264.7细胞并于不同时间后收获细胞培养物或上清液进行后续试验。采用中性红法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的吞噬活性，结果显示：RPFRP可极显著提高RAW264.7细胞吞噬活性(P<0.01)，且该吞噬活性在PRFRP浓度为25μg/mL～200μg/mL时呈剂量依赖式升高；Griess法检测RAW264.7细胞的NO产生量，结果显示：RAW264.7细胞上清液中NO含量显著升高(P<0.05)，且呈RPFRP剂量依赖式升高；ELISA法检测RAW264.7细胞的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，结果显示：与空白对照组相比，RPFRP处理的RAW264.7细... 相似文献
6.
《畜牧与兽医》2017,(3):47-51
采用乙醇提取法提取得到鸡血藤总黄酮(FSSD),MTT法分析其细胞毒性,并探讨其预处理和后处理对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞所致氧化应激的影响。试验一先用不同浓度的FSSD(25、50和100μg/m L)处理细胞12 h,再用LPS进行刺激,诱导氧化应激的产生;试验二先用LPS刺激细胞2 h,然后用不同浓度FSSD处理细胞8 h。分别采用Griess法和荧光探针法检测NO和活性氧(ROS)水平。研究发现,FSSD预处理和后处理均能抑制LPS刺激引起的NO和ROS水平的升高(P0.05),且后处理效果更明显。因此,FSSD具有良好的抗氧化应激活性,且用做治疗药物效果更明显。 相似文献
7.
《动物营养学报》2021,33(9)
本试验旨在评价嗜酸乳杆菌抗氧化活性及其对小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7细胞)氧化应激的影响。制备嗜酸乳杆菌培养物上清液、完整细胞和胞内提取物,比较其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基和亚油酸的清除能力。筛选抗氧化能力较强的嗜酸乳杆菌培养物上清液,设置4个剂量(5、25、50和125μL)分别作用于RAW 264.7细胞,对照组加入1 mL完全培养液,检测RAW 264.7细胞中一氧化氮(NO)含量、活性氧(ROS)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并进一步探究其对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞氧化应激的保护作用。结果表明:1)嗜酸乳杆菌培养物上清液的DPPH、羟自由基和亚油酸清除率均显著高于嗜酸乳杆菌培养物完整细胞和胞内提取物(P0.05)。2)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于正常RAW 264.7细胞,与对照组相比,25、50和125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞的细胞活力(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25和50μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中SOD活性(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了RAW 264.7细胞中GSH-Px活性(P0.05)。3)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于LPS诱导的RAW 264.7细胞,与LPS组相比,25、125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了LPS诱导的RAW 264.7细胞中SOD和GSH-Px活性(P0.05)。综上所述,嗜酸乳杆菌培养物各组分均具有DPPH、羟自由基和亚油酸清除能力,作为其中抗氧化活性较好的嗜酸乳杆菌培养物上清液可调节LPS诱导引起的RAW 264.7细胞氧化应激。 相似文献
8.
《中国畜牧杂志》2018,(11)
本试验旨在构建奶牛小肠上皮细胞氧化损伤模型,为研究氧化应激状态下的肠道养分吸收机制提供平台和基础。采用不同浓度的H_2O_2(0、50、100、200、400、800μmol/L)处理奶牛小肠上皮细胞不同时间(2、4、6 h),用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)法测定细胞内活性氧(ROS)含量,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明:与对照组相比,200μmol/L H_2O_2作用奶牛小肠上皮细胞2 h的细胞存活率(64.03%)显著降低(P0.05),细胞内ROS含量和培养液中LDH活性显著上升(P0.05),细胞内SOD和GSH-Px活性均显著降低(P0.05)。综上所述,200μmol/L H_2O_2作用奶牛小肠上皮细胞2 h,可构建奶牛小肠上皮细胞氧化损伤模型。 相似文献
9.
《广东畜牧兽医科技》2021,46(5)
本文旨在研究大豆异黄酮(SIF)对缓解猪肠道细胞氧化应激损伤的影响。试验采用体外细胞培养方法,使用过氧化氢(H_2O_2)将猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)诱导为氧化应激状态后,分别用10、50、100μmol/L大豆异黄酮和100μmol/L乙氧基喹啉(EMQ)处理16 h。结果表明,经H_2O_2诱导的氧化模型组细胞存活率显著低于溶剂对照组、SIF 10组、SIF 50组和SIF 100组(P﹤0.05),细胞内ROS和MDA水平,SIF 10组、SIF 50组和SIF 100组均极显著低于氧化模型组(P﹤0.01),而细胞内SOD水平均高于氧化模型组,且SIF 100组达到极显著水平(P﹤0.01);乙氧基喹啉(EMQ)组与氧化模型组相比,细胞存活率和ROS显著降低(P﹤0.05),但细胞内MDA和SOD水平没有显著差异(P0.05)。结果提示大豆异黄酮具有缓解细胞氧化应激作用。 相似文献
10.
从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL～200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。 相似文献
11.
《动物医学进展》2021,42(6)
为探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症反应的调节机制,采用不同剂量的FEA作用于LPS刺激诱导的RAW264.7炎症反应体外模型,测定细胞内iNOS、COX-2的表达水平和AMPK、ERK、P38、JNK、c-Jun及其相应蛋白磷酸化的水平。结果表明,80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW264.74 h可显著抑制细胞内iNOS和COX-2水平,并显著提高p-AMPKα/AMPKα水平;40、80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW 264.7细胞2 h可显著抑制p-ERK/ERK水平,4 h可显著抑制p-P38/P38水平;80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW 264.7细胞2 h、4 h可显著抑制p-JNK/JNK水平,4 h可显著抑制c-Jun水平。说明辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对LPS诱导的RAW264.7发挥的抗炎作用可能与抑制细胞内iNOS和COX-2的水平、抑制MAPKs信号通路的磷酸化和增加磷酸化AMPK的表达水平有关。 相似文献
12.
《动物营养学报》2020,(5)
本研究采用组织块法分离培养获得肉牛肌肉细胞并进行鉴定,利用过氧化氢(H_2O_2)构建氧化应激模型,为深入研究氧化应激对肉牛肌肉生长发育和肉品质的影响机制提供技术支撑。选用体重为252 kg的利鲁(利木赞×鲁西黄牛)杂交公牛背最长肌,利用组织块培养法分离培养肌肉细胞。通过形态学观察、免疫荧光法及流式细胞仪等手段对细胞进行鉴定。采用不同浓度(0、50、100、150、200、250、300、350、400、450μmol/L)的H_2O_2处理细胞24 h,通过观察细胞形态、检测细胞存活率及氧化还原状态,筛选适宜作用浓度。然后利用该浓度H_2O_2处理细胞不同时间(0、0.75、1.5、3、6、12、24 h),通过分析确定适宜作用时间。结果表明:1)分离获得的细胞长势良好,形状细长,呈纺锤体形和梭形。免疫荧光法和流式细胞仪鉴定肌肉细胞的特异性蛋白(生肌决定因子1和配对盒基因7)均得到较高表达。2)视野内细胞数量随H_2O_2浓度升高逐渐减少,至450μmol/L时,细胞发生明显死亡现象。细胞存活率随H_2O_2浓度的升高显著降低,与0浓度H202处理相比,300μmol/L时降至65.4%(P0.05),450μmol/L时仅为6.7%(P0.05)。细胞活性氧(ROS)水平先略微降低后逐渐升高(P0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性先升高后逐渐降低(P0.05),丙二醛(MDA)和蛋白质羰基(PC)含量逐渐升高(P0.05),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量先升高后降低(P0.05)。3)细胞存活率随300μmol/L H_2O_2处理时间的延长逐渐降低,与0 h相比,6 h降至61.2%(P0.05),12 h降至47.4%(P0.05),但在24 h时略有升高(P0.05)。随着处理时间的延长,细胞ROS水平先升高后逐渐降低(P0.05),SOD和CAT活性先升高后降低(P0.05),MDA、PC和8-OHdG含量均逐渐升高(P0.05)。综上所述,本研究通过组织块培养法分离培养获得较高纯度的肉牛肌肉细胞,并成功构建氧化应激模型,H_2O_2的适宜作用浓度和时间分别为300μmol/L和6 h。 相似文献
13.
为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定量PCR扩增、免疫荧光技术和Western-blot技术测定iNOS mRNA和蛋白的相对表达量,最后通过硝酸盐还原酶测定法测定NO含量。结果表明：AEE和ox-LDL对RAW264.7细胞没有毒性。利用80μg/mL的ox-LDL可成功诱导RAW264.7细胞泡沫化,建立泡沫细胞模型,并且AEE可明显抑制细胞内脂滴的形成。ox-LDL可极显著上调细胞中iNOS mRNA及蛋白的相对表达量(P<0.01),并且极显著增加了细胞内NO含量(P<0.01)。经AEE预处理的RAW264.7细胞中iNOS mRNA及蛋白相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞内NO含量也极显著减少(P<0.01)。说明AEE可通过抑制iNOS的表达降低NO的合成,缓解RAW264.7细胞泡沫化,进而发挥抗... 相似文献
14.
为了探究硒是否影响二十二碳六烯酸(DHA)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎性反应中发挥的抗炎作用。小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分别经10μg/m L DHA、10μg/m L DHA+0.05μmol/L亚硒酸钠、1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS+0.05μmol/L亚硒酸钠诱导24 h,同时设置无添加的正常组。采用半定量反转录PCR检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)mRNA表达量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定培养液上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量。结果显示,添加亚硒酸钠(0.05μmol/L)不仅显著或极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW 264.7细胞中促炎细胞因子TNF-αmRNA表达(P0.05)和IL-1β生成(P0.01)的抑制作用,还极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞中抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达的促进作用(P0.01)。由此提示,硒可增强DHA在LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用。 相似文献
15.
为探究金针菇多糖(FVP)和发酵金针菇多糖(FFVP)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症反应的影响与机制,以脂多糖(LPS)构建RAW264.7炎症模型,设置CON组(正常培养基)、LPS组(正常培养基+1μg/mL LPS)、FVP组(正常培养基+1μg/mL LPS+25、50或100μg/mL FVP)和FFVP组(正常培养基+1μg/mL LPS+25、50或100μg/mL FFVP),通过测定RAW264.7的细胞活力、吞噬能力、活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)含量以及炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量与mRNA相对表达量,比较FVP和FFVP抑制巨噬细胞炎症反应的作用;以核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂BAY11-7082处理RAW264.7,通过Western blot检测磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、半胱天冬蛋白酶-1(Caspase-1)和IL-1β的蛋白相对表达量,探究FVP和FFVP对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应可能的作用机制。结果表明:FVP和FFVP均能抑制LPS引起的RAW264.7 ROS和NO含量升高,浓度为100μg/mL时,两者差异显著(P<0.05);相比LPS组,FVP和FFVP分别使RAW264.7的吞噬能力提升37.65%和47.06%;FVP和FFVP降低炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的含量及mRNA相对表达量,并呈剂量依赖性。Western blot结果表明以BAY11-7082与FVP或FFVP同时处理,RAW264.7的p-IκBα、NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),说明FVP/FFVP可通过降低IκBα的磷酸化抑制NLRP3信号通路的激活。综上可知,FVP和FFVP均能增强RAW264.7的细胞活力和吞噬能力,降低ROS和NO含量,通过抑制NF-κB-NLRP3信号通路的激活抑制巨噬细胞炎症反应;相同浓度下,FFVP的抗炎效果优于FVP。 相似文献
16.
本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组分别在M16培养液和最佳浓度Gly的培养液中进行培养。通过2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部的活性氧水平和巢式PCR法检测内源抗氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度Gly处理后,4 mmol/L Gly处理组的4-cell发育率(P0.05)和囊胚发育率(P0.05)均高于对照组;氧化应激胚胎经4 mmol/L的Gly处理后,胚胎的4-cell发育率(P0.01)和囊胚发育率(P0.05)显著高于H_2O_2处理组;H_2O_2+Gly处理组的活性氧水平显著低于H_2O_2处理组(P0.05);Gly能上调CAT(P0.05)和SOD1(P0.01)基因的表达,而对SOD2基因的表达无影响(P0.05)。综上可知,添加Gly可以有效提高胚胎的抗氧化能力,在胚胎体外培养过程中添加Gly的最适宜浓度为4 mmol/L。 相似文献
17.
本试验旨在探究大麻二酚(CBD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用及其分子机制。以小鼠乳腺上皮细胞系HC11作为培养细胞。利用MTT法筛选CBD的最佳作用浓度，最终选择2、4、6μmol/L CBD作为后续试验的作用浓度。分别用1μg/mL LPS单独处理，2、4、6μmol/L CBD与1μg/mL LPS共处理HC11细胞，并设不进行药物处理的对照组，处理24 h后分别检测氧化应激相关指标、抗氧化相关基因mRNA和蛋白表达的变化。结果显示：1)与对照组相比，1μg/mL LPS处理后HC11细胞内活性氧(ROS)大量生成，丙二醛(MDA)含量显著增加(P<0.05);与LPS组相比，2、4、6μmol/L CBD预处理后HC11细胞内ROS含量明显下降，MDA含量显著降低(P<0.05),其中以6μmol/L CBD的效果最为显著。2)与对照组相比，1μg/mL LPS处理后HC11细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均极显著降低(P<0.01)。与LPS组相比，2μmol/L ... 相似文献
18.
《中国畜牧兽医》2016,(7)
为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松(DEX)诱导的RAW264.7细胞系凋亡(P0.01)。1μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用(P0.05);10μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有显著的促进作用(P0.05)。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有极显著的促进作用(P0.01),但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。 相似文献
19.
《中国预防兽医学报》2020,(8)
为研究黄芪总黄酮(TFA)对巨噬细胞RAW264.7的抗炎免疫双向调节作用,本研究首先采用MTT法筛选TFA对RAW264.7细胞的安全剂量;后续研究均采用以下两种方式开展:采用不同安全剂量(10μg/mL、25μg/mL、100μg/mL)的TFA与正常培养的RAW264.7细胞作用;上述不同浓度的TFA与RAW264.7细胞作用后以终浓度为1μg/mL LPS刺激。分别通过ELISA和RT-PCR检测上述两种情况下RAW264.7细胞中细胞因子的含量及其mRNA的转录水平;采用western blot测定上述两种情况下RAW264.7细胞NF-κB信号通路中关键蛋白的表达水平。结果显示,TFA在0～150μg/mL对细胞无明显毒性;ELISA和RT-PCR结果显示,TFA能够显著提高正常培养的RAW264.7细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其mRNA转录水平,抑制LPS刺激的RAW264.7细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的过度表达及其mRNA水平的过度转录,并呈剂量依赖性;western blot结果表明,TFA能够显著下调正常培养的RAW264.7细胞中IKKα/β、IκBα和C-NF-κB p65蛋白表达而上调p-IKKα/β、p-IκBα和N-NF-κB p65蛋白的表达,促进LPS刺激的RAW264.7细胞中IKKα/β、IκBα和C-NF-κB p65蛋白表达而抑制p-IKKα/β、p-IκBα及N-NF-κB p65蛋白的过度表达,并呈剂量依赖性。上述结果表明,TFA可分别通过调节正常和LPS刺激的RAW264.7细胞中关键蛋白的表达,适度活化NF-κB信号通路和抑制NF-κB信号通路的过度激活,提高正常培养的RAW264.7细胞细胞因子含量及mRNA转录水平,抑制LPS刺激的RAW264.7细胞促炎因子含量及mRNA水平的过度转录,从而发挥其抗炎免疫双向调节作用。本研究为TFA的临床应用提供参考依据和抗炎免疫药物的研发奠定基础。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(9)
旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。 相似文献