原位PCR及其在植物研究中的应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

吴文嫱  黄东益  庄南生 《热带农业科学》2006,26(2):65-69

原位PCR是继PCR技术发明以来,分子生物学技术上又一个革命性的突破。由于该技术可检测出组织或细胞中低拷贝,甚至是单拷贝的特异序列,而被越来越多的研究人员青睐,但它在植物上的应用报道较少。该文简要介绍了原位PCR的技术原理;综述了国内外研究人员以植物材料为研究对象进行原位PCR的技术操作;综述了原位PCR在植物细胞水平、组织水平和染色体水平的应用进展;探讨了原位PCR在植物上应用难的原因;从4个方面阐述了原位PCR在植物上的应用前景:(1)单拷贝、低拷贝和多拷贝的基因或特异序列的检测;(2)杂种中亲本染色体的鉴定;(3)物种进化的研究;(4)遗传转化材料的分析。  相似文献   

普通荞麦染色体的原位PCR技术研究     

李分龙  陈庆富 《农业科学与技术》2011,(4):493-496,545

[目的]探索一种适合荞麦的简单易行的染色体原位PCR技术。[方法]采用16S套式引物、4.5S套式引物与psbA引物,以栽培甜荞为材料,进行了染色体原位PCR、原位套式PCR与多次原位PCR试验。[结果]高温干燥可以起到与包埋类似的作用;染色体的原位套式PCR效果比原位PCR明显;多次原位PCR次数为5～6效果较佳。16S引物和4.5S引物均显示了4对信号,但位置不同;而psbA引物是单拷贝的,仅显示出1对信号。根据这些信号得位置差异可以区分普通荞麦的5对染色体。[结论]所使用的荞麦染色体原位PCR技术简单易行。  相似文献   

普通荞麦染色体的原位PCR技术研究     

李分龙  陈庆富 《安徽农业科学》2011,(17):10135-10138

[目的]探索一种适合荞麦的简单易行的染色体原位PCR技术。[方法]采用16S套式引物、4．5S套式引物与psbA引物,以栽培甜荞为材料,进行染色体原位PCR、原位套式PCR与多次原位PCR试验。[结果]高温干燥可以起到与包埋类似的作用;染色体的原位套式PCR效果比原位PCR明显,多次原位PCR次数为5-6效果较佳。16S引物和4．5S引物均显示了4对信号,但位置不同;而psbA引物是单拷贝的,仅显示出1对信号。根据这些信号的位置差异可以区分普通荞麦的5对染色体。[结论]所使用的荞麦染色体原位PCR技术简单易行。  相似文献   

适合植物组织原位杂交和原位PCR的切片制作   总被引：3，自引：1，他引：3  

王春燕  黄秀燕 《安徽农学通报》2007,13(7):37-38,159

随着生物技术的不断发展,原位杂交技术与原位PCR技术在植物方面也有所进展.本文介绍了适合植物组织原位杂交和原位PCR的石蜡切片和冰冻切片的制备.  相似文献   

木薯MeEFⅠ基因的原位PCR物理定位     

冯耀文  王英  高和琼  庄南生 《热带生物学报》2011,(2):129-132

用原位PCR技术将木薯延长因子基因（MeEFⅠ）定位到木薯染色体上,根据MeEFⅠ基因的全长cDNA序列设计该基因的特异引物,以华南6号木薯根尖为材料制备染色体标本,结果表明：通过原位PCR检测发现,在木薯细胞不同时期的分裂相上均能发现1～2个荧光信号位点;通过核型分析,初步将木薯MeEFⅠ基因定位于华南6号木薯的第1...  相似文献   

检测石蜡切片中鸭病毒性肠炎病毒间接原位PCR方法的建立   总被引：3，自引：0，他引：3  

程安春  廖永洪  朱德康  汪铭书  罗启慧  贾仁勇  陈孝跃 《中国农业科学》2008,41(12):4365-4371

 【目的】建立能对石蜡切片中鸭病毒性肠炎病毒（DEV）核酸进行定位的原位PCR方法,为鸭病毒性肠炎（DVE）存档蜡块的回顾性诊断、致病机理研究等提供有效的实验手段。【方法】据DEV的UL30-UL31基因序列设计PCR引物和寡核苷酸探针,以DEV感染死亡鸭肝脏组织石蜡标本制作切片,经蛋白酶K消化、原位PCR扩增和生物素标记的寡核苷酸探针原位杂交,建立了检测石蜡标本中DEV的间接原位PCR方法并应用于人工感染DEV不同时间的鸭肝脏、DVE发病鸭的存档蜡块和临床病料检测。【结果】间接原位PCR对DVE死亡鸭肝脏的石蜡标本检测结果为阳性,而鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌病、鸭多杀性巴氏杆菌病、鸭沙门氏菌病和鸭大肠杆菌病死亡鸭肝脏的石蜡标本检测结果为阴性;间接原位PCR对人工感染DEV后2、4、6、12、24、48和72 h不同时间的鸭肝脏检测结果均为阳性,阳性细胞有肝细胞、窦皮细胞和枯否氏细胞,阳性信号多出现于坏死细胞的碎片中或细胞坏死后形成的空泡内及空泡边缘;对存档蜡块、临床病料的检测与病毒分离鉴定吻合率为100%。【结论】本研究建立的间接原位PCR方法具有直观、敏感、特异性强的优点,在显示核酸阳性信号的同时,还能判别含有靶序列的细胞类型以及组织细胞的形态结构特征与病理变化。可用于DVE的诊断、分子流行病学调查、存档蜡块的回顾性诊断和致病机理的研究。  相似文献   

猪圆环病毒检测方法的研究     

陈炳华 《中国畜禽种业》2010,6(8):104-105

猪圆环病是由猪圆环病毒（PCV）所引起的,它严重的威胁着各国的养猪业。因此建立快速有效的诊断方法是当务之急。本文就病毒分离、电镜观察、聚合酶链式反应（PCR）、间接免疫荧光（IIF）、免疫组织化学技术（IHC）、酶联免疫吸附实验（ELISA）、原位核酸杂交实验（ISH）等检测技术进行综述。  相似文献   

数字PCR技术在转基因成分检测中的应用     

《辽宁农业科学》2017,(1)

近年来,世界各国都非常重视转基因成分检测技术的研究和应用,因此,建立快速简单、高灵敏度、高精确度的转基因成分检测方法十分必要。数字PCR(digital PCR,d PCR)技术作为一种全新的核酸检测方法,近年来在转基因检测领域备受青睐。文中介绍了数字PCR(digital PCR,d PCR)技术的基本原理,概述了其在转基因成分检测领域的应用进展。  相似文献   

通过植株原位真空渗入遗传转化获得转基因芥菜   总被引：5，自引：1，他引：5       下载免费PDF全文

金万梅  巩振辉  宋正旭 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2003,31(5):39-42

以芥菜(BrassicajunceaCoss)雪里蕻和圆叶芥为试材,在携带潮霉素磷酸转移酶基因和CaMVBari-1基因 的根癌农杆菌菌株GV3101的介导下,采用植株原位真空渗入遗传转化技术,将外源基因潮霉素磷酸转移酶基因和CaMVBari-1基因 导入芥菜。采收T1种子,经潮霉素抗性筛选和PCR分子检测,证实获得了转基因植株。  相似文献   

多重PCR技术在食品检测中的应用与展望     

《安徽农业科学》2020,(11)

多重PCR技术建立在常规PCR基础上,作为一种高效、快速、高灵敏性及特异性的方法,其被应用在食品检测的各个领域。从食品安全检测角度,简要论述多重PCR技术在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和弓形菌等食源性致病菌检测中的应用,并根据长期工作总结多重PCR技术操作的重难点和前景展望,以期为多重PCR技术在食品检测中的工作提供帮助。  相似文献   

番茄溃疡病菌检测技术研究进展     

徐霞  牟海青  田茜  廖晓兰 《安徽农业科学》2013,(29):11691-11693,11695

概述了几种常见的番茄溃疡病菌检测技术,包括血清学检测技术、PCR技术、实时荧光PER技术、Rep—PCR技术、核酸分子杂交检测技术,并对番茄溃疡病检测技术进行了展望。  相似文献   

果树病毒核酸检测技术研究进展     

杨洪一  李丽丽  张志宏 《勤云标准版测试》2007,(2)

病毒的核酸检测技术发展非常迅速,主要有PCR技术、分子杂交技术、dsRNA技术、NASBA技术和基因芯片技术。综述了这些技术的原理、特点及其在果树病毒检测中的应用情况。基于PCR技术的检测方法是目前果树病毒检测的主要方法,许多果树病毒的PCR检测体系已经建立。NASBA技术也已开始用于果树病毒的检测。  相似文献   

免疫PCR检测技术及其在食品安全领域中的应用     

黄明  肖笑  徐晟  周兴虎  周光宏  沈文飚 《南京农业大学学报》2010,33(6)

免疫PCR技术是一种在免疫学和PCR技术基础上建立起来的新型检测技术,这种技术同时具有ELISA的高特异性和PCR的高灵敏性。本文介绍了免疫PCR的技术原理和反应体系,比较其不同种类和应用范围,指出免疫PCR存在的问题并提出相应的对策;归纳了目前免疫PCR在食品安全等领域中的应用;并结合免疫PCR技术的优势提出其在食品安全检测中的应用前景。  相似文献   

PCR在食品微生物检测中的应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

常世敏 《邯郸农业高等专科学校学报》2004,21(4):23-25

PCR即聚合酶链式反应,现在已广泛应用于环境、化工、医药、食品等各个领域,本文主要叙述了PCR技术在食品微生物检测方面的应用,并详细阐述了PCR技术的基本原理。也提出了目前PCR技术在食品微生物检测中存在的问题。  相似文献   

草莓轻型黄边病毒检测研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

《西南农业学报》2016,(12)

本文对草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)的2种分子检测技术进行了比较研究。结果表明,多重PCR技术以草莓actin为内参基因,完全排除在实验中杂质与操作的影响。Real time PCR技术具有更高的灵敏度和可靠性,可以定量检测出样本中病毒粒子的含量。结果表明,Real time PCR的灵敏度是普通PCR的100倍以上,而多重PCR的检测成本更经济。所以Real time PCR技术将用于引进品种的检疫,而多重PCR技术将用于大规模的脱毒苗的检验。  相似文献   

PCR相关技术方法在植物病害检测中的应用(综述)   总被引：6，自引：0，他引：6  

王娜  马雅军  王喆之  代光辉 《上海农业学报》2004,20(4):112-115

PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点在植物病害检测中得到了广泛应用。本文综述PCR相关技术(RT—PCR、IC-PCR、PCR—SSCP、实时荧光PCR、RAPD和RFLP)的原理及其在植物病害检测中的应用现状，同时概述我国已检测的植物病害病原体的种类。  相似文献   

原位杂交技术及其在甘蔗研究中的应用     

李富生  何丽莲 《勤云标准版测试》2004,(4)

介绍了植物染色体原位杂交技术的产生、发展过程,以及该技术与其它生物学技术相结合而形成的一些新技术,如:细菌人工染色体荧光原位杂交、DNA纤维荧光原位杂交、基因组原位杂交、原位PCR技术等。综述了这些技术在甘蔗研究中的应用情况。  相似文献   

实时荧光定量PCR应用技术综述   总被引：1，自引：0，他引：1  

栗文凯  张智勇  胡建和  李军 《中国畜禽种业》2008,4(19)

实时荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上发展起来的一种高灵敏度的核酸定量技术。使用EB加入PCR反应体系,经改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,其优势性决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。与传统PCR技术相比,实时定量PCR能够更加快速、灵敏,并有效地对核酸进行实时定量检测。  相似文献   

烟草霜霉病检测技术研究概况     

陈学军  刘勇  张谊寒  戚龙君  李永平 《安徽农业科学》2013,41(5):1952-1953

介绍了烟草霜霉病检测的必要性,综述了烟草霜霉病的致病性检测、显微镜检查及PCR检测等检测技术的特点,并对国外引种烟草霜霉病PCR技术的应用进行了展望。  相似文献   

香石竹尖孢镰刀菌PCR检测   总被引：4，自引：0，他引：4  

王继华  陆琳  唐开学 《西南大学学报(自然科学版)》2004,26(4):417-419

采用多重引物聚合酶链式反应(Mulljplex—PCR)技术检测香石竹尖孢镰刀菌纯培养和香石竹样品,并用分离培养技术加以验证。结果表明,PCR能特异地检测出所有16个香石竹尖孢镰刀菌菌株,并证实了昆明地区的香石竹尖孢镰刀菌为2号生理小种。PCR与分离培养技术检测结果基本一致,但总体上PCR检测阳性率稍高于分离培养检测的发病率。PC能检测出接种7d后香石竹病原菌,而观察病症需20d。该项技术具有更高的灵敏度,适用于香石竹种苗的检测和病害流行学研究。  相似文献