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旨在分离感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体,探讨其在PCV2感染淋巴细胞中的作用。提取PCV2感染PK-15细胞上清液中的外泌体,利用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blot检测外泌体标记蛋白分子（CD81、TSG101）;PKH67标记外泌体后检测细胞对外泌体的摄取;提取PCV2-外泌体基因组,检测PCV2 Rep和Cap基因;利用间接免疫荧光试验检测PCV2-外泌体感染PK-15细胞后PCV2病毒定位;通过绝对定量PCR检测PCV2-外泌体对淋巴细胞的感染率;利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖;利用Annexin V-FITC/PI检测淋巴细胞凋亡率。透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,PK-15细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径30~200 nm;Western blot结果显示PK-15细胞分泌的外泌体存在特异性标记蛋白CD81和TSG101;外泌体摄取试验结果显示PCV2-外泌体能够被细胞摄取;PCR结果表明PCV2-外泌体基因组中含有PCV2 Rep和Cap基因;间接免疫荧光结果显示,与PCV2直接感染相比,PCV2-外泌体感染的淋巴细胞中,PCV2病毒拷贝显著升高,差异明显（P<0.01）,外泌体裂解后感染淋巴细胞能力与PCV2病毒无显著差异;PCV2-外泌体可显著抑制淋巴细胞增殖（P<0.01或P<0.05）;PCV2-外泌体显著提高淋巴细胞凋亡率。PCV2感染PK-15细胞的外泌体中携带病毒基因,感染淋巴细胞后使细胞增殖降低和细胞凋亡增加。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2020,(7)
旨在分离感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体,探讨其在PCV2感染淋巴细胞中的作用。提取PCV2感染PK-15细胞上清液中的外泌体,利用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blot检测外泌体标记蛋白分子(CD81、TSG101);PKH67标记外泌体后检测细胞对外泌体的摄取;提取PCV2-外泌体基因组,检测PCV2 Rep和Cap基因;利用间接免疫荧光试验检测PCV2-外泌体感染PK-15细胞后PCV2病毒定位;通过绝对定量PCR检测PCV2-外泌体对淋巴细胞的感染率;利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖;利用Annexin V-FITC/PI检测淋巴细胞凋亡率。透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,PK-15细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径30～200 nm;Western blot结果显示PK-15细胞分泌的外泌体存在特异性标记蛋白CD81和TSG101;外泌体摄取试验结果显示PCV2-外泌体能够被细胞摄取;PCR结果表明PCV2-外泌体基因组中含有PCV2 Rep和Cap基因;间接免疫荧光结果显示,与PCV2直接感染相比,PCV2-外泌体感染的淋巴细胞中,PCV2病毒拷贝显著升高,差异明显(P0.01),外泌体裂解后感染淋巴细胞能力与PCV2病毒无显著差异;PCV2-外泌体可显著抑制淋巴细胞增殖(P0.01或P0.05);PCV2-外泌体显著提高淋巴细胞凋亡率。PCV2感染PK-15细胞的外泌体中携带病毒基因,感染淋巴细胞后使细胞增殖降低和细胞凋亡增加。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2019,(7):775-775
外泌体(Exosome)是一类由细胞主动分泌释放到胞外的小囊泡,直径大小约为30 nm^150 nm。它凭借自身能在细胞间传递蛋白、核糖核酸、脂类等小分子物质而在细胞间通讯中发挥着关键作用。近年来,关于外泌体与病毒感染的研究报道主要集中在人类病毒,尤其是外泌体在人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)和丙型肝炎病毒(The Hepatitis C virus,HCV)感染中生物功能的研究。然而,禽类病毒外泌体的相关报道较为鲜见。 相似文献
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外泌体作为一种胞外小囊泡，由不同细胞主动分泌。有证据表明外泌体能够参与并介导靶细胞的许多生理过程。外泌体中包含多种类型的microRNA(miRNA)、DNA和蛋白质，有助于细胞间信息的传递，能调节受体细胞相关基因的表达，还能影响靶细胞的功能。细胞损伤作为疾病发生的病理基础，其调节过程中有外泌体的参与，外泌体不仅能作用于细胞间信号通路，还能通过外泌体miRNA作用于靶向蛋白等对细胞损伤修复起到调节作用。对外泌体在细胞损伤中作用的研究进展进行总结，并对其在动物疾病中的应用进行了展望。 相似文献
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外泌体(exosomes)是由多种细胞分泌的囊状小体,内含大量的蛋白质、RNA和脂类等重要物质,在细胞间物质与信息的传递中起着重要作用。目前,对于外泌体的研究主要集中在肿瘤诊断和治疗等方面,而对于寄生虫领域外泌体的研究则刚刚起步。已有研究证明,寄生虫可利用外泌体作为细胞间通讯和与宿主联系的工具,通过多种机制产生外泌体,广泛传递其自身分子,调节宿主的免疫系统;还会利用外泌体相互转移传递毒力因子、药物抗性基因和分化因子,对疾病的发生发展具有重要作用。论文主要对外泌体在感染人类的多种寄生性原虫中的研究进展做一综述,为外泌体在寄生虫领域的研究提供新的思路。 相似文献
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寄生虫来源的外泌体研究进展 总被引：1，自引：1，他引：0
外泌体是体内多种细胞分泌的一种囊泡,包含蛋白质、脂质和核酸等物质,发挥信号传导、免疫调控、代谢物清除及凝血等功能。外泌体可能是细胞间信息传递的重要纽带,寄生虫与宿主间存在复杂的信息交流,寄生虫可以通过分泌外泌体将生物活性物质转移到宿主细胞中,调控宿主免疫,介导寄生虫的免疫逃逸。以外泌体作为药物载体,可以阻断寄生虫在宿主细胞内的转移或增强宿主的免疫能力,为寄生虫病的预防和治疗提供新的契机,进而打破目前化学合成药物在畜禽生产中滥用的现状,减少药物残留,提高畜产品质量安全。笔者综述了外泌体的形成、组分以及不同寄生虫来源外泌体的生物学作用,以期为畜禽养殖业中以外泌体作为研究切入点的寄生虫病的诊断和治疗奠定基础。 相似文献
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在无抗养殖的大背景下, 动物的肠道健康问题愈加引起关注。肠道是机体消化吸收营养物质的主要器官, 也是防止肠道微生物侵袭的先天屏障, 肠道屏障功能的完整性对机体的正常生长发育起着至关重要的作用。外泌体是一种内源性调节物质, 可作为解决肠道健康问题的切入点。外泌体是由多种类型细胞分泌的纳米级细胞外囊泡, 其广泛分布于各种体液中, 可携带蛋白质、核酸、脂质等生物活性物质, 它们参与细胞之间的传递、细胞的迁移和增殖等进程, 在机体的生理和病理过程中发挥作用。近期研究表明, 外泌体可通过调节肠道菌群的组成、诱导小肠干细胞的增殖, 修复动物的肠道屏障功能。作者梳理了近年来外泌体对畜禽肠道健康影响及外泌体的研究方法, 为后续相关研究提供参考。 相似文献
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骨骼肌与动物体健康及产肉动物的生产性能有着密切的联系。骨骼肌的生长发育是一个非常复杂的生物学过程,受到多种因素的调控。外泌体(exosomes)又称外泌小体,是一种由活细胞分泌的直径在30nm~100nm的膜性小囊泡,含有细胞特异性的蛋白质、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变受体细胞的功能,在细胞间物质和信息传递中起重要作用。论文就外泌体的发现与应用、分离与鉴定及其参与骨骼肌生长发育、再生和肌肉萎缩等过程中的调控作用的研究进展进行综述,以期为骨骼肌生长发育机制及相关疾病的研究提供参考。 相似文献
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外泌体(EVs)也称作胞外囊泡,是细胞内多泡体与细胞膜融合后释放到细胞外基质中的磷脂双分子层小囊泡。1983年,研究人员在绵羊网织红细胞中首次发现外泌体,最初认为外泌体只是细胞代谢废物,但随着对其生物来源、物质构成、运输、细胞间信号传导及在体液中分布等方面深入研究,发现外泌体具有多种功能。近年来研究发现,外泌体在肿瘤早期诊断、肿瘤转移和扩散等方面都扮演重要角色,并且有可能成为新型药物载体应用在肿瘤治疗方面。随着外泌体功能和生物学特点的深入研究,这种新型药物载体技术也有可能应用到抗寄生虫病,为寄生虫病的治疗提供新思路。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(7)
旨在寻找有效方法,能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中分离细胞产生的外泌体,并为探索外泌体在PRRSV感染细胞时的作用奠定基础。使用试剂盒提取MARC-145细胞产生的外泌体,利用电镜负染色法和Western blot技术对MARC-145细胞产生的外泌体进行鉴定;采用碘克沙醇速率区带离心分离MARC-145细胞产生的外泌体,并用Western blot技术检测外分泌体的分布区间。用PRRSV感染MARC-145细胞后,使用试剂盒对MARC-145细胞产生的外泌体进行初步分离后,采用免疫磁珠捕获技术进行进一步纯化,并使用Western blot进行验证。Western blot结果显示MARC-145细胞产生的外泌体存在特异性标记蛋白CD63、Tsg101和Alix,不存在外泌体非标记蛋白EEA1、GRP94和Cytochrome C;电镜负染色结果显示MARC-145细胞产生的外泌体尺寸大小处于30~100nm,符合外泌体特征。利用Western blot对碘克沙醇速率区带离心中收集到的样品进行分析,结果显示MARC-145细胞产生的外泌体分布于7.2%~18%碘克沙醇密度区间。Western blot结果显示免疫磁珠捕获法获得的对照组不存在外泌体标记蛋白Tsg-101。以上结果表明MARC-145细胞能够产生外泌体,并且通过免疫磁珠捕获法能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中将其分离。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2020,(4)
外泌体(exosomes)是一类由细胞分泌并且可远距离传递生物信息的纳米级胞外囊泡。它通过细胞分泌释放,在体液中传播,最后被其他细胞吞噬以达到传递生物信息的作用。脂类代谢一直是生命科学研究领域的热点,虽然影响脂质代谢的长链非编码RNA(lncRNA)很多,但外泌体中影响脂质代谢的lncRNA研究却相对较少。基于这个原因,对于外泌体源lncRNA的研究就十分必要。作为外泌体所携带的重要遗传物质之一,lncRNA是一类长度200 nt的RNA分子,行使着诸如转录激活、染色质修饰等许多重要的生物功能。文章介绍了外泌体源lncRNA的生物学特点,列举了外泌体源lncRNA通过不同的分子机制来直接或间接的对脂质代谢产生影响的实例,分析了外泌体源lncRNA由于表达异常所导致的脂类代谢疾病,并且举例说明了外泌体源lncRNA作为生物标记的原理,最后对外泌体源lncRNA可作为家畜脂肪沉积生物标记功能的前景做了展望。如果在未来的研究中有更多的外泌体源lncRNA被检出,并足够对脂类代谢异常情况进行标记的话,那么对于预测和调控家畜脂肪沉积无疑会产生积极的意义。 相似文献
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外泌体作为细胞间信息交流的新模式,通过其携带的miRNA、mRNA和蛋白质等活性因子调控生理和病理下的多种生物学过程。miRNA是外泌体发挥作用的主要因子之一,长19～25 nt,是非蛋白质编码的单链RNA。成熟miRNA通过与靶基因结合,导致mRNA翻译抑制或转录物降解,对脂质代谢具有调控作用。外泌体具有脂质双层膜结构,可作为miRNA运输的良好载体将其运输至受体细胞,在生理和病理过程中发挥作用,外泌体miRNA的调控作用可能是一种新的组织间通信。脂肪组织是畜禽主要的内分泌器官,其分泌的脂肪因子对调控机体代谢稳态有重要作用。脂源性外泌体miRNA作为一种新型脂肪因子,通过体液运输至其他细胞或组织,并通过调控靶基因表达影响其功能,在维持体内代谢平衡中发挥重要作用。作者综述了脂源性外泌体miRNA在脂代谢中的分子调控作用和相关机制,旨在为研究脂源性外泌体miRNA的作用机制、预防和治疗代谢相关疾病等提供理论支撑。 相似文献
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外泌体（exosomes）是一类由细胞分泌并且可远距离传递生物信息的纳米级胞外囊泡。它通过细胞分泌释放，在体液中传播，最后被其他细胞吞噬以达到传递生物信息的作用。脂类代谢一直是生命科学研究领域的热点，虽然影响脂质代谢的长链非编码RNA（lncRNA）很多，但外泌体中影响脂质代谢的lncRNA研究却相对较少。基于这个原因，对于外泌体源lncRNA的研究就十分必要。作为外泌体所携带的重要遗传物质之一，lncRNA是一类长度 > 200 nt的RNA分子，行使着诸如转录激活、染色质修饰等许多重要的生物功能。文章介绍了外泌体源lncRNA的生物学特点，列举了外泌体源lncRNA通过不同的分子机制来直接或间接的对脂质代谢产生影响的实例，分析了外泌体源lncRNA由于表达异常所导致的脂类代谢疾病，并且举例说明了外泌体源lncRNA作为生物标记的原理，最后对外泌体源lncRNA可作为家畜脂肪沉积生物标记功能的前景做了展望。如果在未来的研究中有更多的外泌体源lncRNA被检出，并足够对脂类代谢异常情况进行标记的话，那么对于预测和调控家畜脂肪沉积无疑会产生积极的意义。 相似文献
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外泌体是由细胞产生并胞吐到胞外的纳米级颗粒，能够传递蛋白质、脂质和核酸等生物活性大分子，在细胞间信息传递中起着重要作用。近年来越来越多研究表明，外泌体在各感染性疾病中有传播感染物质的作用，也有诱导免疫反应和治疗作用。本文就外泌体在病原感染疾病中的作用进行综述，为后续进一步研究提供依据。 相似文献