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1.
试验旨在研究小分子药物索非布韦是否具有抑制牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）复制的作用。通过MTT法测定了不同时间和不同浓度索非布韦对牛肾细胞（MDBK）增殖的影响;采用免疫荧光染色试验筛选出能有效抑制BVDV复制的索非布韦最适浓度,用实时荧光定量PCR、致细胞病变作用（CPE）和病毒半数组织细胞感染量（TCID50）测定的方法检测索非布韦对BVDV复制的影响。结果显示,索非布韦处理MDBK细胞24和48 h能极显著抑制细胞增殖（P<0.01）;与对照组相比,当索非布韦浓度为800 μmol/L时免疫荧光染色检测BVDV感染MDBK细胞的双链RNA（dsRNA）含量极显著降低（P<0.01）;实时荧光定量PCR检测发现,与DMSO处理组相比,BVDV感染索非布韦处理组MDBK细胞,BVDV 5'UTR mRNA含量在病毒感染24和48 h时极显著降低（P<0.01）;BVDV感染索非布韦处理组MDBK细胞病变现象明显减弱;索非布韦处理24 h后能极显著减弱BVDV感染MDBK细胞后子代病毒颗粒的形成组与释放（P<0.01）,降低病毒滴度。综合上述结果表明,小分子药物索非布韦能有效抑制BVDV体外复制。 相似文献
2.
为了在细胞水平测试金刚烷胺对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抑制作用,试验采用细胞培养技术和CCK8法测定不同浓度金刚烷胺对牛肾原代(MDBK)细胞的毒性作用,确定药物的安全浓度。将感染BVDV的MDBK细胞用金刚烷胺处理,通过荧光定量PCR方法检测金刚烷胺对BVDV的抑制作用。结果表明:金刚烷胺的浓度为500μmol/L时,对MDBK细胞有很强的毒性;当浓度低于125μmol/L时,基本对细胞无明显毒性作用。BVDV的半数致细胞病变量(TCID_(50))为1×10~(-2.5)/mL。在浓度为250,166,125,100μmol/L的金刚烷胺的作用下,病毒的相对表达量分别为4.17%、4.19%、7.51%、21.69%。说明金刚烷胺在合理浓度下对动物体细胞无显著毒性,且具有抑制BVDV复制的作用。 相似文献
3.
《动物医学进展》2021,42(10)
为研究血红素结合蛋白1(HEBP1)对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)复制的影响,应用CRISPR/Cas9技术建立HEBP1基因敲除的MDBK细胞系;用BVDV TC株感染HEBP1基因敲除的MDBK细胞,用免疫荧光染色检测BVDV双链RNA(dsRNA)水平,观察BVDV致细胞病变效应(CPE)情况,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测BVDV 5′UTR mRNA水平,Reed-Muench测定病毒滴度变化。结果表明,成功构建HEBP1基因敲除的MDBK稳定细胞系,敲除效率为72.41%;敲除HEBP1基因显著性抑制BVDV 5′UTR mRNA和dsRNA积累,减弱BVDV感染靶细胞的CPE,降低BVDV滴度。说明敲除HEBP1基因显著性抑制BVDV的复制,为抗BVDV研究提供新的思路和药物靶点。 相似文献
4.
为探究虫草素抗弓形虫的效果及作用机制，本研究将不同浓度的虫草素与弓形虫RH株共同作用48 h后，采用CCK8法筛选对细胞安全的虫草素浓度。结果显示，以1μg/mL～200μg/mL (以对细胞的抑制率均为0判定)的虫草素为细胞的安全浓度。将巨噬细胞接种弓形虫RH-GFP株，同时分别加入1μg/mL～100μg/m L虫草素，根据弓形虫的荧光强度，计算虫草素对弓形虫的半数抑制浓度(IC50)。结果显示，虫草素对弓形虫的IC50为31.24μg/mL，且其对弓形虫的抑制作用与虫草素的浓度呈正相关。将巨噬细胞接种弓形虫RH株，同时加入100μg/mL虫草素，2 h后采用间接免疫荧光试验(IFA)检测并统计黏附与侵入细胞的弓形虫数量，分析虫草素对弓形虫黏附与侵入细胞的影响；24 h后采用吉姆萨染色后统计细胞感染率；收集上述各组细胞样品，一部分细胞采用q PCR检测细胞中弓形虫B1基因的转录水平，分析虫草素对弓形虫增殖的影响；一部分细胞采用IFA检测并统计每孔细胞100个空泡(PV)中的弓形虫速殖子的数量，分析虫草素对弓形虫复制水平的影响。结果显示，与... 相似文献
5.
《畜牧与兽医》2021,(11)
试验旨在研究天然小分子化合物小檗胺(berbamine, BBM)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染BALB/c小鼠的影响。共分为预防保护和治疗两部分试验。预防保护试验将24只BALB/c小鼠随机分成3组,每组8只,使用0、50、100 mg/kg BBM提前灌胃,每24 h灌胃1次,连续灌胃3 d,滴鼻感染BVDV 48 h后再次感染,于感染后继续每24 h灌胃,感染后5和10 d时分别处死4只,取肝、脾、肾、小肠等组织使用荧光定量PCR(qPCR)检测BVDV 5′UTR水平;制备病理切片并使用HE染色检测各组织病变情况。治疗试验中将24只BALB/c小鼠随机分成2组,BVDV滴鼻感染,48 h后再次感染后使用0和100 mg/kg BBM灌胃BALB/c小鼠,每24 h灌胃1次,于感染后3、6和10 d时分别处死4只小鼠,使用qPCR检测BVDV载量,通过病理切片检测各组织病变情况。结果显示,预防保护试验发现,与对照组相比,50和100 mg/kg BBM使BVDV感染后各组织5′UTR水平最大降低约72倍,处理剂量与抑制作用呈正相关;病理切片观察发现,与对照组相比,50和100 mg/kg BBM可减少BVDV感染引起的肝、脾、肾、肠等组织病变,且其作用与剂量呈正相关。治疗试验发现,100 mg/kg BBM处理不同时间均能显著性抑制BVDV 5′UTR水平,最大降低约26倍;病理切片观察发现,与对照组相比100 mg/kg BBM在不同时间均能缓解BVDV感染引起的肝、脾、肾、肠等组织充血水肿,且其作用与剂量呈正相关。研究表明,BBM进行预防保护试验和治疗试验均能显著性抑制BVDV体内复制,减轻BVDV感染造成的组织器官病理变化,表明BBM具有较好的抗BVDV感染BALB/c小鼠的作用。 相似文献
6.
试验旨在探讨NO自由基(NO·)对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的抑制作用。硝普钠(SNP)和抗坏血酸(VC)联合加入培养基中可产生NO·,而单独使用SNP产生NO的形式为NO^+。本研究采用MTT法测定药物的细胞毒性,通过Griess反应测定供体药物产生NO的水平。分别用SNP、VC、SNP+VC和对照药物乙酰青酶胺(NAP)处理PK-15细胞,6 h后接种1 MOI的PCV2病毒液,72 h后收获培养上清和细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting分析、病毒效价和实时荧光定量PCR试验检测病毒增殖水平。结果显示:SNP、VC和SNP+VC对PK-15细胞的最大安全浓度分别为500、62.5和31.25μmol/L;60μmol/L SNP和30μmol/L SNP+30μmol/L VC两种供体产生的NO量极显著高于非药物处理组和对照药物NAP处理组(P<0.01);与阳性对照组相比,60μmol/L SNP+30μmol/L VC处理组中的PCV2毒价和DNA拷贝数极显著下降(P<0.01),且PCV2 Cap蛋白的表达也受到明显抑制,而SNP和VC单独处理组上述指标无显著变化(P>0.05)。以上结果表明,SNP+VC产生的NO·对PCV2增殖有显著抑制作用,SNP产生的NO^+不影响PCV2增殖,NO体外抑制PCV2增殖主要是通过NO·实现。 相似文献
7.
《中国畜牧兽医》2019,(3)
试验旨在探讨NO自由基(NO·)对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的抑制作用。硝普钠(SNP)和抗坏血酸(VC)联合加入培养基中可产生NO·,而单独使用SNP产生NO的形式为NO~+。本研究采用MTT法测定药物的细胞毒性,通过Griess反应测定供体药物产生NO的水平。分别用SNP、VC、SNP+VC和对照药物乙酰青酶胺(NAP)处理PK-15细胞,6 h后接种1 MOI的PCV2病毒液,72 h后收获培养上清和细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting分析、病毒效价和实时荧光定量PCR试验检测病毒增殖水平。结果显示:SNP、VC和SNP+VC对PK-15细胞的最大安全浓度分别为500、62.5和31.25μmol/L;60μmol/L SNP和30μmol/L SNP+30μmol/L VC两种供体产生的NO量极显著高于非药物处理组和对照药物NAP处理组(P0.01);与阳性对照组相比,60μmol/L SNP+30μmol/L VC处理组中的PCV2毒价和DNA拷贝数极显著下降(P0.01),且PCV2 Cap蛋白的表达也受到明显抑制,而SNP和VC单独处理组上述指标无显著变化(P0.05)。以上结果表明,SNP+VC产生的NO·对PCV2增殖有显著抑制作用,SNP产生的NO~+不影响PCV2增殖,NO体外抑制PCV2增殖主要是通过NO·实现。 相似文献
8.
《动物医学进展》2021,42(8)
为探究二烯丙基二硫化物(DADS)对马立克氏病肿瘤细胞系(MDCC-MSB-1细胞)的增殖抑制作用及其信号通路的调控机制,以MDCC-MSB-1细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度DADS分别作用MDCC-MSB-1细胞24、48、72 h后对细胞增殖抑制的影响。用0、80、160、240μmol/L DADS预处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33342核酸染色法检测细胞形态变化;caspase-8活性试剂盒检测细胞中caspase-8蛋白酶活性;并用荧光定量PCR法检测Fas/FasL信号通路关键因子mRNA的转录水平。结果显示,40μmol/L～240μmol/L的DADS抑制MDCC-MSB-1细胞的增殖呈时间剂量依赖性;随着浓度的升高,细胞形态逐渐出现细胞核核膜消失,染色体降解为多个片段并且边缘化,形成凋亡小体;240μmol/L的DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞caspase-8蛋白酶活性及Fas、FADD、caspase-8、Bid和caspase-3 mRNA的转录水平极显著升高(P0.01)。结果表明,DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡,并活化其Fas/FasL死亡受体凋亡信号通路,可为鸡马立克氏病的治疗提供参考。 相似文献
9.
【目的】研究他莫昔芬(Tamoxifen)在PK15细胞模型上对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)感染的抗病毒作用。【方法】以PK15细胞为模型,采用CCK-8细胞计数法检测他莫昔芬对细胞活力的影响;利用ANNEXIN V-FITC/PI凋亡试剂盒检测他莫昔芬对细胞周期和凋亡的影响;利用CytoFLEX流式细胞仪和荧光显微镜检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-GFP后病毒增殖的差异;利用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-QXX后PRV gB基因mRNA和蛋白表达水平的变化;利用病毒滴度测定法检测他莫昔芬处理细胞感染PRV-QXX后对病毒的抑制情况。【结果】他莫昔芬用药浓度在6μmol/L时对细胞活力无影响;在6μmol/L以下时,与空白组相比,他莫昔芬处理组对细胞周期与凋亡没有显著影响(P>0.05)。在同一时间点,他莫昔芬处理组PRV-GFP在PK15细胞中的增殖速度极显著低于对照组(P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明,他莫昔芬处理后极显著抑制了PRV gB基因mRNA在PK15细... 相似文献
10.
为了体外评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) ORF7的siRNA对HP-PRRSV复制的抑制效果。将3μg siRNA重组质粒载体pSilencer-N2转染于Marc-145细胞中,24 h后再分别接种0. 01 MOI PRRSV,感染病毒48 h后,观察其抑制HP-PRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72 h后,应用间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA重组质粒对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。体外结果显示,在最佳接毒量0. 01 MOI和最佳接毒时间24 h时,siRNA重组表达质粒在HP-PRRSV感染后48 h能明显抑制病毒的复制,与对照组相比,病毒滴度降低了2个多数量级,抑制达到100～1 000倍。有效干扰持续时间,检测结果表明,与对照组相比,siRNA重组质粒显著抑制HP-PRRSV的增殖,推迟CPE的发生时间,其抑制作用可以持续到感染后的4天。为高致病性猪繁殖与呼吸综合征防控提供有力的物质支持。 相似文献
11.
将收集的猪COCs置于添加不同浓度(0.0,0.3,0.6,1.2μmol/L)甘草酸单铵盐(monoammonium glycyrrhizinate, MAG)的卵母细胞体外成熟培养液中培养46 h,统计成熟率，通过免疫荧光染色检测成熟卵母细胞ROS表达水平；对成熟卵母细胞体外受精，于胚胎培养液内体外培养48,120 h,分别统计体外受精胚胎卵裂率、囊胚率，并用Hochest荧光染色检测囊胚总细胞数；结合成熟率及IVF胚胎发育囊胚率选定最佳添加浓度，在体外成熟培养液中添加最适浓度MAG,以0μmol/L MAG为对照组，体外培养46 h后，利用免疫荧光染色检测猪成熟卵母细胞的线粒体膜电位水平和细胞凋亡水平。结果显示，与对照组相比，不同浓度MAG处理组猪卵母细胞体外成熟率均有所提高，但差异均不显著(P>0.05);不同浓度MAG添加均可降低猪卵母细胞ROS水平，与对照组相比，0.3,0.6μmol/L组差异显著(P<0.05),1.2μmol/L组差异极显著(P<0.01)。0.3μmol/L添加组显著提高了猪体外受精囊胚率(P<0.05),但不同MAG添加组对... 相似文献
12.
为研究miRNA-125b在致细胞病变牛病毒性腹泻病毒(cpBVDV)感染牛肾细胞(MDBK细胞)过程中诱导细胞凋亡的机制,本研究将cpBVDV感染MDBK细胞,并将构建的pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞作为阳性对照.采用荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测细胞中miRNA-125b和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2) mRNA转录水平,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率.检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞中miRNA-125b的转录水平分别为正常细胞对照组的2.01倍和3.85倍,Bcl-2 mRNA的转录水平分别为对照组的0.71倍和0.31倍;pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞48 h后,Bcl-2 mRNA的转录水平为正常细胞对照组的0.42倍.细胞凋亡检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞的凋亡率分别为15.06％和36.43％;pcDNA3.1-miR-125b转染48 h,细胞的凋亡率为25.56％.结果表明miRNA-125b在cpBVDV感染MDBK细胞过程中能够通过抑制抗凋亡基因Bcl-2 mRNA转录水平从而诱导细胞产生凋亡. 相似文献
13.
抗病毒类药物齐多夫啶(zidovudine,AZT)可通过Wnt5a信号通路诱导小鼠中枢神经系统(central nervous system,CNS)小胶质细胞活化,促进炎症因子的表达。研究桑叶有效成分槲皮素(quercetin)是否能抑制AZT诱导的小胶质细胞活化,为桑叶的药用开发利用提供新思路。以小胶质细胞BV2为材料,用不同浓度AZT(15μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)处理24h后,Western blotting检测结果表明细胞中小胶质细胞标志物CD11b的表达量明显上调,且在50μmol/L AZT处理组细胞中的上调幅度最明显。在此基础上,用不同浓度槲皮素(10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)对BV2细胞预处理4 h后再用50μmol/L AZT处理24 h,Western blotting检测结果表明:槲皮素可以有效抑制细胞中CD11b和炎症因子IL-1β、IL-6的表达,还可以有效抑制细胞内Wnt非经典信号通路的重要配体Wnt5a的上调表达。上述结果初步提示桑叶有效成分槲皮素对AZT诱导的小胶质细胞活化具有抑制作用,并且Wnt5a信号通路可能与槲皮素抑制AZT诱导小胶质细胞活化的机制有关。 相似文献
14.
为研究枯草芽孢杆菌(B.subtilis)是否通过激活猪肠上皮细胞(IPEC-J2)中Toll样受体(TLRs)的表达抑制轮状病毒(RV)的复制,本研究采用RV感染灭活B.subtilis预处理的IPEC-J2细胞,鉴定B.subtilis对RV在细胞中增殖的抑制作用,并检测不同时间点RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞中相关TLRs的表达。结果显示,RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞24 h后,与未处理细胞相比,其病毒的增殖能力显著被抑制。通过荧光定量PCR检测不同处理组细胞TLRs m RNA的表达水平,结果表明RV感染B.subtilis预处理IPEC-J2细胞在感染早期(1 h和3 h)与其他组相比,TLR2、TLR3、TLR9 m RNA表达均显著增加。本研究表明,灭活的B.subtilis能够抑制RV在IPEC-J2细胞中的增殖,并在病毒感染初期显著提高细胞TLRs m RNA表达,推测可能与调节宿主细胞的先天免疫反应有关。 相似文献
15.
本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h。在整个培养过程中采用i CELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量。结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8 h后,极显著降低细胞存活率(P0.01),因此确定150μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度。2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P0.05);用2.5、5.0和10.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P0.05)。因此,选用5.0μmol/L为RES的安全浓度。3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P0.01或P0.05)。由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM 3细胞的氧化损伤。 相似文献
16.
乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理 总被引：2，自引：0，他引：2
通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。 相似文献
17.
《黑龙江畜牧兽医》2020,(14)
为了研究中药金银花是否具有抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)活性的作用,试验首先测定了金银花对牛肾细胞(MDBK细胞)的最佳用药浓度,用该浓度的金银花对在细胞内和细胞外两种状态的BVDV进行试验。细胞外试验中,把BVDV与金银花在体外混合,作用0,6,12 h后接种MDBK细胞,以研究金银花在细胞外抗BVDV活性作用。细胞内试验中,将BVDV先接种至MDBK细胞,然后用含金银花的细胞维持液培养1 h,最后用细胞维持液继续培养24,36,48 h,以观察金银花对BVDV复制的影响。采用免疫荧光试验、病毒半数组织细胞感染量(TCID_(50))测定及荧光定量PCR方法,检测金银花对BVDV活性和复制的影响。结果表明:当金银花浓度为2.5×10~(-2) g/mL时,对细胞的毒性最小。因此,用该浓度的金银花对BVDV在细胞内和细胞外两种状态进行试验。细胞外试验组免疫荧光试验结果显示,金银花与BVDV作用0 h,培养72 h后,仍有特异性荧光;而金银花与BVDV作用6 h和12 h,培养72 h后则无特异性荧光出现,表明在细胞外金银花对BVDV活性起到了良好的抑制作用。随着金银花与BVDV在体外作用时间的增加,病毒对照组TCID_(50)极显著高于试验组(P0.01)。BVDV与金银花作用0,6,12 h后感染细胞,试验组与病毒对照组样品中BVDV mRNA相对含量均差异极显著(P0.01)。细胞内试验组免疫荧光试验结果显示,金银花作用24 h样品仍有少量特异性荧光,而作用36 h和48 h样品则无特异性荧光。随着金银花与BVDV作用时间的增加,病毒对照组TCID_(50)逐渐增大;而试验组TCID_(50)基本不变,与病毒对照组差异极显著(P0.01)。细胞内的BVDV与金银花作用36,48 h后,试验组与病毒对照组样品中BVDV mRNA相对含量差异极显著(P0.01)。说明金银花可对细胞内外的BVDV活性起到良好的抑制作用,可以抑制BVDV的活性。 相似文献
18.
通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示：20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC50)分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC50均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。 相似文献
19.
【目的】研究TET(ten-eleven translocation)去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响。【方法】将收集的猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置于不同浓度(0(对照组)、100、200和400μmol/L)Bobcat339抑制剂的体外成熟培养液中培养42 h,测量卵丘扩展直径,统计成熟率,确定最小有效浓度。在体外成熟培养液中培养27 h后,利用免疫荧光(IF)检测5-甲基胞嘧啶(5mC)与5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)信号强度以及纺锤体组装情况;利用DCFH-DA染料检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用JC-1染色法检测线粒体膜电位水平(MMP);利用ATP检测试剂检测卵母细胞ATP水平;利用实时荧光定量PCR检测42 h时COCs卵丘扩展相关基因表达水平和27 h时卵母细胞抗氧化相关基因表达水平。【结果】与对照组相比,100、200和400μmol/L组卵丘细胞扩展水平均极显著降低(P<0.01),100、200和400μmol/L组成熟率显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),确定最小有效浓度为100μmol/L,后续试验均用该浓度。IF检测... 相似文献
20.
《中国兽医学报》2018,(11)
为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒(rPRV)对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV:rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,24h后再分别接种10 MOI PRRSV,感染病毒48h后,观察其抑制HPPRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组rPRV介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNA Neg及接毒对照组相比,HP-PRRSV在细胞中的复制均可被3个siRNA rPRV有效抑制,其中重组病毒rPRV gG-/siRNA N2抑制效果最佳;进一步检测siRNA重组rPRV在Marc-145细胞中抑制HP-PRRSV HN1株的复制效果,结果显示,与对照组相比,重组病毒rPRV gG-/siRNA N1和rPRV gG-/siRNA N3抑制作用不明显,而rPRV gG-/siRNA N2不但能够有效抑制HP-PRRSV引起的细胞病变,而且能够消减HP-PRRSV N蛋白的表达,明显降低ORF7mRNA的表达水平(P0.05),且其抑制作用具有剂量依赖性,其抑制效果至少可持续5d,但随着时间的延长逐渐减弱。结果提示siRNA rPRV在体外能抑制HP-PRRSV的复制。 相似文献