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将ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８ＯＲＦ７切下后，插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ、ＰＬ启动子下游，得到重组表达质粒ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７。转化了ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达，表达产物占菌体总蛋白的１５３％。表达蛋白可望成为有价值的ＰＲＲＳ诊断抗原。 相似文献
2.
猪生殖—呼吸道综合征病毒CH—1a株N基因的原核表达 总被引：3，自引：0，他引：3
将ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８－ＯＲＦ７切下后,插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ,ＰＬ启动子下游,得到重组表达质粒,ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７,转化了ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物,结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的１５． 相似文献
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猪繁殖和呼吸综合征病毒基质膜蛋白和核衣壳蛋白基因的克隆与鉴定 总被引：3，自引：1，他引：2
猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列,设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物,并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点,经ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了一约９５０ｂｐ的目的基因片段,并将此基因克隆于ＰＢＶ２２０载体,构建了ＭＮ蛋白基因重组质粒ＰＢＶＭＮ,进一步由重组质粒回收ＭＮ基因片段亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋）测序载体,构建了重组质粒ＰＢＳＭＮ,经部分序列分析鉴定,重组质粒含ＭＮ蛋白基因。此基因的克隆为进一步研究该病毒ＭＮ蛋白免疫学特性及其分子基础和基因诊断技术奠定了基础。 相似文献
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甜菜碱代替部分蛋氨酸对肉仔鸡生产性能和胴体品质影响的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
甜菜碱代替部分蛋氨酸对肉仔鸡生产性能和胴体品质影响的研究ＥＦＦＥＣＴＯＦＳＵＢＳＴＩＴＵＴＩＯＮＯＦＢＥＴＡＩＮＧＦＯＲＳＯＭＥＰＡＲＴＯＦＭＥＴＨＩＯＮＩＮＧＯＮＰＥＲＦＯＲＭＡＮＣＥＡＮＤＣＡＲＣＡＳＳＱＵＡＬＩＴＹＯＦＢＲＯＩＬＥＲＳＤｅｎｇＹ... 相似文献
5.
对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。 相似文献
6.
以Ｘｂａ Ｉ和Ｅｃｏ ＲＶ双酶消化ｐＢＴ１获得肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ基因片段，以Ｘｂａ Ｉ和Ｓｍａ Ｉ酶切点定向克隆入质粒载体ｐＣＭＶ４，构建了人ＴＮＦα重组质粒ｐＣＭＶ－ＴＮＦα。采用ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法转染ＣＯＳ７和ＮＩＨ３Ｔ３细胞，收集转染后不同时间的细胞培养上清，检测ＴＮＦα的表达水平和生物学活性。ＥＬＩＳＡ检测表明，两种细胞转染后，其培养上清中均有ＴＮＦα抗原存在，而载体等 相似文献
7.
牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株的构建 总被引：8，自引：1，他引：7
将含有牛传染性鼻气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ 基因的片段克隆于ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ Ｋ 中, 再用 Ｂｇ１ Ⅱ和 Ｓａｃ Ｉ切去 Ｔ Ｋ 基因中３４７ｂｐ 的片段, 获得了含缺失 Ｔ Ｋ 基因的重组质粒, 然后插入 Ｌａｃ Ｚ 报告基因, 构建成转移载体。以脂质体转染法将此转移载体与 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ Ｂａｒｔｈａ 株在牛肾细胞（ Ｍ Ｄ Ｂ Ｋ） 上共转染, 经过蓝色蚀斑筛选和蚀斑克隆纯化, 获得了能稳定遗传的重组 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ。经 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交鉴定, 证实该重组病毒为 Ｔ Ｋ 基因缺失突变株。 相似文献
8.
崔玉东 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)
用血清调理的酵母聚糖（ｓｅｒｕｍ－ｏｐｓｏｎｉｚｅｄ ｚｙｍｏｓａｎ ,ｓＯＺ）刺激多性核白细胞（ＰＭＮ）引起的Ｏ２－产生受到ｐ３８ＭＡＰＫ抑制物（ＳＢ２０３５８０）,ＰＩ３－Ｋ抑制物（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）和ＰＫＣ抑制物（ＧＦ１０９２０３Ｘ）的明显抑制,这些抑制物也明显引起ｓＯＺ诱导的一种ＮＡＤＰＨ氧化酶的胞浆成分 ｐ４７ｐｈｏｘ的磷酸化。可是流式细胞分析表明,ＳＢ２０３５８０和 ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ使吞噬作用减弱,而 ＧＦＩＯ９２０３Ｘ使吞噬作用增强。这些结果表明,虽然ＰＩ３－Ｋ和ｐ３８ ＭＡＰＫ都参与ＮＡＤＰＨ氧化酶激活和吞噬作用的信号传导,但ＮＡＤＰＨ氧化酶激活的信号传导途径与吞噬作用的信号传导途径不同。 相似文献
9.
PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引：6，自引：2，他引：4
利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。 相似文献
10.
鸡痘病毒282E4株2.2kbTK基因序列分析 总被引：7，自引：2，他引：5
将鸡痘病毒２８２Ｅ４弱毒株基因组中的３．７ｋｂＨｉｎｄⅢ片段克隆到ＫＳ（－）质粒中，亚克隆后，获得含ＴＫ基因正反方向插入的２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ片段的质粒ｐＫＦＡ和ｐＫＦＢ，进而构建出正反方向的系列嵌套缺失质粒。用Ｔ７、Ｔ３引物所做的核苷酸序列分析表明，２．２ｋｂＨｉｎｄⅢ－ＣｌａＩ ＴＫ基因序列长为２１５９ｂｐ，含有两个完整的读码框架（ＯＲＥ）Ｘ和ＴＫ，并确证了ＴＫ基因内存在单一酶切点Ｎ 相似文献
11.
日粮蛋白质及妊娠对青山羊血清总蛋白水平的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
前列腺素处理28只5.5月龄的青山羊母羊使之同期发情,自然交配后分为自由采食和限制采食两组;两组采食相同日粮,妊娠期前三个月和后两个月日粮粗蛋白含量分别为13.8％和20.0％。妊娠期第90天和137天分别采取静脉血以测定血清总蛋白。测得的数值是:妊娠期第90天自由采食组和限制采食组分别为5.64±0.54g/100ml和4.98±0.38g/100mml,第137天则分别为6.43±0.23g/100ml和5.62±0.53g/100ml。统计分析表明,妊娠期前三个月,两组妊娠母羊间血清总蛋白水平差异显著(P<0.05),自由采食组高于限制采食组;自由采食组或限制采食组内的空怀母羊与妊娠母羊之间差异均极显著(P<0.05);空怀母羊的水平高于妊娠母羊;妊娠期后两个月各组血清总蛋白水平间相互关系与妊娠期前三个月相似。 相似文献
12.
产蛋鸭(莆田黑鸭)的能量和蛋白质需要的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本文旨在探讨制定产蛋鸭从传统放牧改为饲喂配合料圈养所需的能量和蛋白质的标准。从1984～1987年用3种能量(2450、2600和2750千卡/公斤)和3种粗蛋白质(15、16.5和18％)水平组成9 种日粮,角750只试鸭进行3次饲养试验和1次代谢试验,结果以2450千卡/公斤,16.5％粗蛋白质和2600千卡/公斤18％粗蛋白质的日粮最佳、其300日龄平均产蛋数分别为138个和137个,3次重复试验结果一致。并根据饲养和代谢试验,估测产蛋鸭对代谢能和粗蛋白质需要量推算公式,供有关同事参考。 相似文献
13.
家蚕核型多角体病毒镇江株（BmNPVZJ8）蛋白激酶（BmvPK－1）基因编码区含828个核苷酸，可编码推测分子量为32kD的多肽。应用GCG程序分析表明BmvPK－1与AcMNPV的PK－1相似性最高，两者氨基酸序列相似性达95.2％。比较同时表明，BmvPK-1氨基酸序列与其它生物Ser／ThrPK的催化结构域有很高的同源性，与人的HSPKCE，果蝇的dPKC98F和酵母的TPK1的催化结构域分别有31．1％、32．3％和31.2％的相似性。在PK的进化树中，杆状病毒PK是一独立进化的分枝，BmvPK-1与PK－1进化距离最近，而HavPK则与HzSNPV的PK距离最近。 相似文献
14.
早期断奶仔猪的能量、蛋白和赖氨酸需要量研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用72头3周龄断奶仔猪探讨5.5-12公斤仔猪日粮的蛋白质和赖氨酸的适宜水平;用30头猪做消化代谢试验,探讨仔猪对各种营养成分公的消化率。结果表明:赖氨酸和蛋白水平对仔猪日增重有显著的影响,而对氮沉积、赖氨酸消化率及干物质消化率无显著影响。采食含19％粗蛋白、1.08％赖氨酸日粮仔猪的全期日增重较高(272克)。在此增重水平下,每日需1860千卡消化能,100.7克粗蛋白和5.88克赖氨酸。 相似文献
15.
德系安哥拉兔蛋白质维持需要量及可消化粗蛋白质利用效率的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
作者用德系安哥拉毛兔282只进行了47组(其中幼兔7、妊娠兔16、哺乳兔11、成年产毛兔13组)消化代谢试验,日粮粗蛋白质含量7.49～22.71％,根据氮平衡结果建立了不同生理阶段兔的粗蛋白质食入量与沉积蛋白质、可消化粗蛋白质食入量与沉积蛋白质的回归方程,由此估算出生长、妊娠、哺乳、成年产毛兔每千克代谢体重的粗蛋白质维持需要量分别为4.87、6.71、4.80、6.14克,可消化粗蛋白质维持需要量分别为2.52、4.59、3.15、4.11克,可消化粗蛋白质的利用效率分别为0.784、0.723、0.754、0.613。 相似文献
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本试验以乌珠穆沁育成公羊为研究对象 ,在中国北方典型草原地区冬春季节测定不同持续时间的能量和蛋白质限制对于蛋白质消化率、代谢率的影响规律。研究结果表明 :(1)试验分期和试验期温度是独立于营养限制而显著影响蛋白质消化代谢的因素。(2)蛋白质消化率、代谢率随着营养限制的持续而呈现显著或极显著的下降趋势 ,当营养限制结束后恢复到对照组的水平。(3)蛋白质消化率受环境温度影响不明显 ,蛋白质代谢率随环境温度升高出现先降后升的明显趋势。(4)蛋白质消化率、代谢率的变化规律可以用干物质食入量、能量蛋白比、蛋白质食入量和试验分期、环境温度建立数学模型来描述。 相似文献
18.
相同EAA模式下不同日粮蛋白水平对草鱼肌肉、肝胰脏蛋白周转代谢的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
在日粮必需氨基酸模式相同条件下 ,研究不同日粮蛋白水平对草鱼肌肉、肝胰脏蛋白质周转代谢的影响。其中周转代谢参数包括 :蛋白质的合成速率 (FSR)、降解速率 (FDR)、生长速率 (FGR)、合成能力 (CS)、合成的翻译效率 (KRNA)和蛋白质沉积效率 (PRE)。试验结果表明 :1.日粮蛋白水平的增加促进了草鱼的生长 ,促进了肌肉、肝胰脏蛋白质的增长。饲料转化效率和肌肉蛋白质沉积效率在适宜蛋白水平时最高。2.肌肉FSR、FDR与日粮蛋白水平呈正相关关系 ;肝胰脏蛋白FSR不受日粮蛋白水平的影响 ,蛋白质FDR与日粮蛋白水平呈负相关关系。3.肌肉蛋白FGR的增加归因于蛋白质合成的增长较降解的增长更占优势 ,以及蛋白质合成的KRNA 的提高 ;肝胰脏蛋白FGR的增加归因于蛋白质降解的减少。4.肌肉、肝胰脏蛋白CS不受日粮蛋白水平的影响。5.肌肉PRE(生长占合成的比例 )在适宜蛋白质水平 (30 % )时最高 ,而且在该水平下饲料系数最低 ,即饲料转化率最高 相似文献
19.
以猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）WH株基因组DNA为模板,扩增ORF2截短基因,经BamH I/NotI双酶切处理后与经相同酶切处理的pET32a（＋）原核表达载体连接,获得重组质粒pET32a-Cap2。将重组质粒转化至BL21（DE3）,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化的重组蛋白免疫小鼠,并对获得的血清进行间接ELISA检测和中和活性测定。SDS-PAGE分析表明,ORF2截短基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白分子质量大小为40 kDa,重组PCV2 Cap蛋白主要以上清的形式存在。Western blot证实重组蛋白能够识别抗PCV2阳性血清。经间接ELISA检测,鼠抗PCV2 Cap血清抗体效价能达到1：25 600,间接免疫荧光检测分析表明,鼠抗PCV2 Cap血清能特异性识别PCV2感染细胞中的Cap蛋白。病毒血清中和实验证实,抗PCV2 Cap血清抗体具有中和病毒的活性,中和效价为1：36。猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达,为进一步研究该蛋白的功能及Cap蛋白亚单位疫苗和检测试剂盒的制备奠定了基础。 相似文献
20.
饲粮蛋白质水平对早期断奶仔猪大肠蛋白质腐败作用和腹泻的影响 总被引：13，自引：0，他引：13
选５７头２８日龄断奶仔猪（平均体重约４．５ｋｇ），研究饲粮粗蛋白质（ＣＰ）水平对早期断奶仔猪大肠蛋白质腐败作用和腹泻的影响。结果显示：（１）饲粮ＣＰ水平分别与仔猪的ＣＰ、未消化ＣＰ日摄入量，结肠内容物中大肠杆菌、挥发性盐基氮（ＶＢＮ）和氨氮（ＡＮ）含量，以及腹泻指数之间存在显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）的正相关。（２）结肠内容物中ＶＢＮ和ＡＮ含量分别与仔猪腹泻指数呈显著（Ｐ＜０．０５）的正相关。（３）饲粮ＣＰ水平分别与盲肠内容物中ＶＢＮ和ＡＮ含量之间的相关关系不显著（Ｐ＞０．０５）。（４）随着饲粮ＣＰ水平的升高，仔猪结肠组织病理变化亦增加。（５）与ＣＰ２０．４％的全植物蛋白型饲粮和ＣＰ１９．２％的复合蛋白型饲粮比较，低蛋白质氨基酸平衡饲粮（ＣＰ１６．５％）可有效地降低仔猪结肠内容物中ＶＢＮ和ＡＮ含量及腹泻指数。试验表明，饲粮ＣＰ水平对结肠蛋白质腐败作用可产生显著的影响。随着饲粮ＣＰ水平的升高，结肠内蛋白质腐败、结肠组织病理变化和仔猪腹泻指数均有增加。平衡饲粮氨基酸使ＣＰ水平降低可减少结肠内蛋白质的腐败和仔猪断奶后腹泻。 相似文献