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白腐菌（T.pubescens MB89）漆酶的固定化及其酶学性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】研究白腐菌T.pubescens MB89漆酶固定化处理的最佳条件及其酶学性质。【方法】采用壳聚糖、壳聚糖铜、海藻酸钠/壳聚糖和TEOS/PEG 4种载体对漆酶进行固定,测定固定化漆酶酶活性在不同温度、pH值和固定化条件处理下的变化。【结果】白腐菌漆酶的固定化方法和最佳固定条件为:①壳聚糖固定化漆酶(IE1)。戊二醛最佳浓度为0.4 mol/L,最适交联时间8 h,最佳给酶量1.5 mg/g;②壳聚糖铜固定化漆酶(IE2)。CuSO4.5 H2O最佳添加量为0.6 mg/g,最适络合时间10 h,最佳给酶量0.25 mg/g;③海藻酸钠/壳聚糖固定化漆酶(IE3)。0.2mol/L海藻酸钠,0.2 mol/L CaCl2,0.1 mol/L戊二醛,0.15 mol/L壳聚糖,最佳给酶量1.5 mg/g;④TEOS/PEG固定化漆酶(IE4)。最适PEG分子质量为600~800,最适添加量1.5 g/g,最佳给酶量1.5 mg/g。4种固定化漆酶的酶学性质:IE1和IE4的最适温度均为60℃,IE2和IE3为30℃;IE1、IE3和IE4的最适pH值为4.5,IE2为4.0;与游离漆酶(Lac)的最适pH值相比,固定化漆酶的最适pH值均向碱性方向偏移,且固定化漆酶的酸碱稳定性、热稳定性和贮存稳定性均优于游离漆酶。【结论】固定化酶的最适合温度、pH均受固定化载体和方法的影响,固定化漆酶的稳定性均优于游离漆酶。 相似文献
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筛选野生黑木耳废渣中产木质素过氧化物酶的菌株,对存在的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的活力进行测定,并对3种酶的最适温度和最适p H进行考察。结果表明,在33株野生黑木耳菌株中,得到2株产木质素过氧化物酶菌株,废渣中3种酶的平均酶活力分别为54.3、37 200、6.7 U/L;3种酶的最适温度为28~32℃,最适p H为6.2~7.0。废渣中3种酶活力差别较大,锰过氧化物酶活力最强,在降解木质素上起主要作用,木质素过氧化物酶活力最小,作用差。 相似文献
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[目的]以提取的胞壁质酶为材料,研究胞壁质酶的性质。[方法]通过测定胞壁质酶在595nm处光吸收值的增量,测定该酶活力和蛋白质浓度。通过测定米氏常数Km,研究酶促反应的速度及影响速度的因素。在不同pH值缓冲液中测定胞壁质酶活力,同时测定该酶的最适pH值。酶促反应的速度在酶的最适温度时达到最大。利用SDS-PAGE电泳法,测定胞壁质酶的分子量及纯度。[结果]胞壁质酶在219.00g/L光吸收下降最快,活力最高。Km为0.57。脲对胞壁质酶为抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制。胞壁质酶在pH值为8.0时酶活力最高,属于弱碱性,在40℃时酶活力最高,其Kd为13。[结论]该研究可为今后采用生物工程技术对胞壁质酶进行克隆、提取以及制取提供参考。 相似文献
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四种酶与春小麦抗蚜性的相关性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用田间用蚜量比值法划分了抗感性不同的15个小麦品系,用紫外分光光度计测定了各品种(系)旗叶中过氧化氢酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶的活性.结果表明,苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、几丁质酶活性与春小麦蚜量比值显著相关,其相关系数分别为r=-0.842 0、r=-0.798 0、r=-0.795 5.抗蚜的春小麦品系在蚜虫取食后苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、几丁质酶活性急剧上升,感蚜春小麦虽然酶活性有上升,但较为缓慢;而过氧化氢酶活性与春小麦蚜量比值相关性不显著,其相关系数为r=-0.219 6,在抗感性春小麦中无明显的差异. 相似文献
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对AspergillusnigerH8、A.nigerM89和突变株A.nigerUγ-2三株菊粉酶高产菌株产生的主要酶系进行了分析与研究。结果表明,在产菊粉酶的优化培养基(菊芋汁培养基)中进行摇瓶发酵,三菌株除产菊粉酶活力较高外,还产生蛋白酶,果胶酶,淀粉酶,纤维素酶;三株菌都表现为酶活力高峰随发酵时间依次是蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和菊粉酶,纤维素因不同菌株有一定差异;突变株A.nigerUγ-2与其出发菌株A.nigerM89产酶比较表明,突变株在菊粉酶产酶活力获得大幅度提高的同时,淀粉酶和果胶酶的产酶活力也显著提高。 相似文献
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杏鲍菇栽培周期木质素酶变化规律的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过跟踪观察杏鲍菇栽培周期的还原性糖、可溶性蛋白、木质素酶等各项生理指标,初步了解其木质素酶的变化规律。结果表明:杏鲍菇具有分泌漆酶以及锰过氧化物酶的能力,但是不能分泌木质素过氧化物酶;初始培养料中还原性糖含量较高,在整个生长过程中呈现先下降后上升的趋势,峰值与子实体发育相对应;可溶性蛋白整体呈上升趋势;木质素酶在菌丝营养生长阶段活力较高,生殖生长阶段活力较低,菌丝对基质的降解具有一定的次序。 相似文献
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以番茄根与根茎作为材料比较了不同发育期过氧化物同工酶酶谱咯发育期酶的活性以及酶带数目都有很大变化。从子叶展开期一直到开花，酶活性增强，酶带数目总的趋势是增多。酶带数目变化是以几个发育期为阶段：１片真叶期，４片真叶期、１１片真叶期、花蕾期、开花期，其中花蕾期酶带数最多，是酶谱表达完全时期。 相似文献
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枇杷果肉过氧化物酶的分离纯化及其性质研究 总被引：2，自引：0，他引：2
枇杷果肉制成丙酮粉,通过硫酸铵沉淀分级分离、透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析纯化,获得两个酶活力峰,第二活力峰的酶制剂经过PAGE和SDS-PAGE电泳获得单一纯的过氧化物酶(PODⅡ),纯酶比活力为710.5U/mg。酶亚基分子量为22.6kDa,等电点pI为3.6。酶的动力学研究表明:酶的最适pH为5.0,在pH2.6～10区域较稳定;酶最适温度是35℃,对热敏感,高于45℃以上酶的稳定性差。酶对愈创木酚和H2O2的表观Km值分别为20.58和12.04mmol/L,以愈创木酚为底物时,酶比活力最大,其次是苯酚、邻苯二酚、对苯二酚和间苯二酚,酶未能催化以焦性没食子酸为底物的氧化反应。Al3+、Mn2+、Zn2+和Hg2+对酶有抑制作用,Mg2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+、Ba2+和Pb2+对酶有激活作用;半胱氨酸等12种化合物对酶活力均有不同程度的抑制作用,在防止或减轻枇杷采后的酶促褐变中将起到重要的作用。 相似文献
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复合诱变选育腈水合酶高产菌株 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]选择有效的方法选育稳定的腈水合酶高产菌株。[方法]以Rhodococcus sp．HUST为出发菌株,采用紫外线和硫酸二乙酯对其进行复合诱变处理,选育出酶活力高的突变株进行培养并测定腈水合酶活性。[结果]菌株HUST复合诱变的条件为：出发菌株在距离为15cm时紫外诱变45s后再经1．1％的硫酸二乙酯诱变处理20min,然后进行有利突变株的筛选,通过初筛、复筛和遗传稳定性试验,获得1株遗传性状稳定的腈水合酶高产菌株HUST-1,其酶活高达698．6U,比诱变前提高了68．3％。[结论]通过紫外线和硫酸二乙酯复合诱变能选育出有较高腈水合酶活力的菌株。 相似文献
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Rhodococcus ruber TCCC28001产丙烯腈水合酶过程调节及转化条件研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对分离自土样中的产腈水合酶的菌株Rhodococcussp. TCCC28001进行16S rDNA序列测定及系统发育分析,可鉴定为Rhodococcus ruber.通过对其培养过程中pH的调控,尿素的加入时间的研究,使Rhodococcus ruber TCCC28001培养72 h后丙烯腈水合酶比活力达到4628 U/mL,比调控前提高了441%.考察了底物对腈水合酶活性及丙烯腈转化的影响,底物浓度≤20%对腈水合酶活性无抑制作用,丙烯腈转化率达100%,表明Rhodococcus ruber TCCC28001对底物有较强的耐受性. 相似文献
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腈水合酶产生菌株的固定化载体选择 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]筛选适合腈水合酶产生菌株Rhodococcussp.HUST-3的最佳固定化载体。[方法]采用海藻酸钠、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、壳聚糖、琼脂进行腈水合酶产生菌株Rhodococcussp.HUST-3固定化载体研究,并进行海藻酸钠-聚乙烯醇、海藻酸钠-聚丙烯酰胺和海藻酸钠-壳聚糖复合固定化研究。[结果]结果表明,海藻酸钠-聚乙烯醇复合载体固定化腈水合酶产生菌株的相对酶活为93.1%,具有较好的机械强度,但固定化载体的反应批次较少,仅为7次;海藻酸钠-聚丙烯酰胺复合固定化载体具有较好的机械强度和耐磷酸盐程度,但是酶活相对较低,只有92.7%;海藻酸钠-壳聚糖复合固定化菌株的机械强度和耐磷酸盐性能都较高,相对酶活可达97.6%,能够进行12批次连续水合反应。[结论]海藻酸钠-壳聚糖为腈水合酶产生菌株的最适固定化载体。 相似文献
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响应面法优化紫红红球菌的发酵培养基 总被引：1，自引：0，他引：1
采用响应面法优化腈水合酶产生紫红红球菌的发酵培养基。以天冬酰胺、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、酵母抽提物、脲素、氯化钴为影响因子,以菌体干质量和酶活为响应值,进行多元二次响应回归分析,结果显示,最优培养基为:天冬酰胺含量0.04%、磷酸氢二钾0.05%、磷酸二氢钾0.03%、酵母抽提物(FM818)5.48%、脲素0.55%、氯化钴0.01%;在摇瓶中进行验证试验,优化条件下菌体干质量为33.98mg·mL-1、酶活为167.57U·mL-1;对照条件下菌体干质量26.6mg·mL-1、酶活为125.63U·mL-1,此优化培养基使干质量、酶活分别提高了27.74%和33.38%。 相似文献
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[目的]获取高产的腈水合酶产生菌。[方法]以腈水合酶产生菌诺卡氏菌（Nocardia sp.）为出发菌株,采用加热、紫外线（UV）照射、硫酸二乙酯（DES）处理三重复合诱变,研究不同诱变剂量对致死率和正突变率的影响,选育腈水合酶高产菌株,并研究底物类似物乙腈对该菌株腈水合酶活性的影响。[结果]从中筛选出1株稳定、高活力的腈水合酶生产菌,所产腈水合酶最高活性提高到1 238万U。在一定浓度下,随着底物类似物乙腈浓度的增大,菌株正突变率和所产腈水合酶最高酶活增大,但超过一定浓度后正突变率和最高酶活反而下降。[结论]获得了1株稳定的腈水合酶高产菌株,所产腈水合酶活性高达1 238万U。底物类似物乙腈对该菌株的正突变率和所产腈水合酶最高酶活性有一定的影响。 相似文献
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为探明玛咖的鉴别方法与质量评价体系,对丽江产玛咖干粉产品与秘鲁玛咖干粉产品采用水蒸馏溶剂萃取得挥发油,用气-质(GC-MS)联用技术法进行分析测定,鉴定其组成成分。结果表明:丽江玛咖的挥发油含量(≥0.407%)约是秘鲁玛咖(≥0.107%)的4倍;2种样品的挥发油成分以异硫氰酸苄酯(benzyl isothiocyanates)、苯乙腈(benzyl nitrile)及4-甲氧基苄基硫氰酸酯(4-Methoxybenzyl isothiocyanate)为主。丽江玛咖中异硫氰酸苄酯含量为75.35%,苯乙腈含量为14.56%,4-甲氧基苄基硫氰酸酯含量为7.38%;秘鲁玛咖中苯乙腈含量为85.20%、异硫氰酸苄酯含量为7.24%、4-甲氧基苄基硫氰酸酯含量为0.36%。丽江玛咖品质优良,气质联用技术可用于引种玛咖的鉴别及品质分析。 相似文献
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The electric fields produced in folded proteins influence nearly every aspect of protein function. We present a vibrational spectroscopy technique that measures changes in electric field at a specific site of a protein as shifts in frequency (Stark shifts) of a calibrated nitrile vibration. A nitrile-containing inhibitor is used to deliver a unique probe vibration to the active site of human aldose reductase, and the response of the nitrile stretch frequency is measured for a series of mutations in the enzyme active site. These shifts yield quantitative information on electric fields that can be directly compared with electrostatics calculations. We show that extensive molecular dynamics simulations and ensemble averaging are required to reproduce the observed changes in field. 相似文献