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《分子植物育种》2017,(12)
本研究以香蕉的叶、假茎、根、果皮、果肉为材料,比较了CTAB常规法及其3种改良法、SDS法、SDS结合蛋白酶裂解法、改良尿素法、氯化苄法等方法提取基因组DNA的效果,以期筛选出通用性高、操作简便的基因组DNA制备方法。结果表明:氯化苄法不仅能够有效地从叶片、假茎、根系和果肉中提取到高质量的基因组DNA,也适合从果皮中提取少量DNA,其中提取液中添加600μL氯化苄的浓度处理效果最好;尽管CTAB常规法及其改良法能有效地从叶片中提取DNA,但对其他组织部位的提取效果较氯化苄法差;SDS法、SDS结合蛋白酶裂解法和改良尿素法的提取叶片DNA的效果较CTAB法差,也不能从根系和果皮、果肉中提取到高质量DNA。此外,PCR扩增试验结果表明,氯化苄法能满足后续的基于ITS的分子标记鉴定研究。 相似文献
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油茶叶片含有较多的多糖和多酚等次生代谢产物是提取DNA的重要障碍。本研究以油茶叶片为材料研究高质量的DNA提取方法。建立了一种改良的CTAB法,运用2×CTAB缓冲液来裂解细胞,在裂解细胞后的溶液中加入终浓度为2 mol/L Li Cl,用氯仿异戊醇抽提溶液,用等体积的异丙醇沉淀DNA,用预热的70%乙醇洗涤DNA沉淀。运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析测定了DNA的产率和质量,并与经典SDS法、经典CTAB法、高盐低p H法进行了对比。结果表明,改良的CTAB法提取的DNA产率比经典SDS的少,与经典CTAB法和高盐低pH法的相似,达到39.0μg/g,且纯度高,无RNA的污染。改良的CTAB法提取的叶片DNA可用于油茶后续的PCR分析研究。 相似文献
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以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究 总被引：16，自引：0，他引：16
模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响。本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验。实验结果表明：用1％(W/V)、2％(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1．25％(WV)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1．25％(W／V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4％浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA。 相似文献
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提取棉花基因组DNA的一点探讨 总被引：18，自引：5，他引：18
介绍了两种提取棉花基因组DNA的方法:CTAB法和SDS法,同时比较了对棉花叶片进行不同处理后提取DNA的效果。结果表明:两种方法均获得了较高质量的DNA;新鲜的棉花叶片、在4℃黑暗中饥饿1d的叶片和在室温条件下自然干燥1d的叶片都可以提取到质量满意的DNA,用42℃干燥1至数天的叶片提取到的DNA明显降解,但能够满足PCR等实验的要求。 相似文献
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适于SSR分析的大豆干种子中DNA快速提取 总被引：6，自引：0，他引：6
为了探寻大豆干种子中的DNA快速提取方法,以2个大豆品种的干种子为材料,在SDS提取液中加入蛋白酶K、NP-40、Tween-20情况下,并减少氯仿/异戊醇的抽提次数,研究对提取DNA质量的影响。结果表明,SDS提取液中加入3种试剂后,即使使用氯仿/异戊醇抽提1次,其DNA的OD260/OD280值也在1.8~2.0之间,能够满足SSR扩增模板的需求。说明此方法既可获得较高纯度的DNA,又可大大缩短大豆干种子中的DNA提取时间。 相似文献
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黑核桃叶片基因组DNA提取方法比较研究 总被引：2，自引：1，他引：1
探索从富含多酚和多糖等次生代谢物质的黑核桃叶片中获得高质量DNA的提取方法。以黑核桃与核桃叶片为材料,采用SDS、CTAB和改良CTAB 3种DNA提取方法对黑核桃与核桃基因组DNA提取效果进行比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度计检测所提取样品的质量;SDS与CTAB法重复性较差,提取的黑核桃DNA易降解;改良CTAB法可有效抑制酚类物质及细胞内多糖对DNA纯度的影响,对样品提取的DNA也无降解现象,纯度较高,得到的DNA A260/A280值均处于1.80~1.95之间;改良CTAB法是适用于高质量黑核桃DNA的提取方法。 相似文献
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三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究 总被引：2，自引：1，他引：1
为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果.结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染.用TRJzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染.若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质.可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选. 相似文献
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为探求适宜的转基因苹果种子和果肉DNA提取方法,以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）嘎拉（Gala）苹果果实为试材,采用改良CTAB法、SDS法与高盐低pH值SDS法对苹果种子和果肉进行基因组总DNA提取。结果表明,在提取种子基因组DNA时,供试3种提取方法均可获得纯度较高的DNA,但不同方法所获得的DNA产量差异较大,以改良CTAB法获得的DNA产量最高,为0.221 mg?g-1鲜重,SDS法和高盐低pH值SDS法所获得DNA产量偏低,分别为0.053 mg?g-1鲜重和0.034 mg?g-1鲜重;在提取果肉基因组DNA时,SDS法在纯度和产量上效果最好,DNA的A260/ A280 值为1.808,产量为0.012 mg?g-1鲜重,而其它两种方法提取质量较差。考虑到质量和得率的综合因素,认为改良CTAB法适宜提取转基因苹果种子DNA,SDS法适宜提取转基因苹果果肉DNA。 相似文献
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《分子植物育种》2017,(8)
DNA提取是SSR-PCR检测的前提,但因棉花中富含多酚、多糖和蛋白质等干扰物质,使得提取棉花DNA较其他植物困难,这也导致棉花分子辅助育种明显滞后。本研究探索出适用于SSR技术的一步快速提取棉花DNA的方法。该方法 DNA提取液成份包括0.1 mol/L Na OH、0.7 mmol/L NaCl、20 mmol/Lβ-巯基乙醇、2%SDS和2%PVP。该方法的具体步骤是:将液氮下研磨成粉状的棉花幼嫩叶片,放入含0.5 m L DNA提取液的离心管中。热裂解后加入盐酸离心,取上清,直接用于SSR-PCR扩增。将该方法提取的DNA片段较大,质量较好,能很好地用于TksGlfex DNA聚合酶的SSR-PCR扩增,扩增电泳条带清晰。此棉花DNA提取操作简单、高效,相比传统的棉花DNA提取而言,显著地节约DNA提取时间。 相似文献
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改良SDS法快速提取小样品量棉花总DNA及其纯化 总被引：13，自引：1，他引：13
聚合酶链式反应(Polymerase chain reac-tion,以下简称PCR)对DNA的纯度要求并不十分严格,而且需要的DNA模板量并不是很多。因此水稻、玉米、大豆等作物上都先后发展了满足PCR反应的DNA快速提取方法。由于棉花富含棉酚、多糖、单宁等物质,在细胞破碎时,棉酚等多酚类物质自动氧化,然后跟蛋白质、核酸等发生不可逆反应,结果形成棕色胶状复合物,影响高质量DNA的获取。在提取液中加入PVP40,能与酚类物质结合,使获得的DNA进一步纯化。棉花DNA提取方法还在不断改进,但目前大多采用以CTAB为基础的提取方法,提取液成分比较复杂,DNA提取… 相似文献
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小麦条锈菌DNA提取方法的比较研究 总被引：7，自引：1，他引：6
以小麦条锈菌夏孢子为实验材料,分析比较了CTAB法、SDS法、尿素法和CTAB/SDS法4种方法对小麦条锈菌基因组DNA的提取效果。结果表明,利用4种方法提取的小麦条锈菌夏孢子DNA的纯度和得率存在一定差异,单位重量夏孢子分离的DNA量依次为：CTAB法＞尿素法＞CTAB/SDS法＞SDS法,而所获得的DNA纯度依次为：CTAB/SDS法＞CTAB法＞SDS法＞尿素法。以不同分离方法获得的小麦条锈菌DNA为模版,利用特异性微卫星引物RJ17进行PCR扩增和电泳分析,4种方法均能满足SSR反应,但CTAB法更适于SSR反应。 相似文献
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本研究通过对DNA提取裂解液的成分和用量以及裂解时间等因素进行系统优化,建立了一种高通量的磁珠法提取甘蔗总DNA,再进行PCR检测甘蔗杆状病毒(SCBV)的方法。采用核酸自动提取仪,应用纳米磁珠提取甘蔗总DNA,经PCR检测甘蔗杆状病毒,并与以试剂盒提取DNA为模板的PCR检测结果进行比较。结果显示,经优化的裂解液成分为EDTA·Na20.08 mol/L、NaCl 0.8 mol/L、SDS 2%和Tris-HCl0.10 mol/L,裂解时间为20 min,可用于纳米磁珠提取甘蔗总DNA进行SCBV检测。所建立的方法通量高、成本低、耗时短,可用于SCBV的批量检测。 相似文献
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太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测 总被引：1，自引：1，他引：0
比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试。结果表明：常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280比值在1.8左右。以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果。因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求。 相似文献
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瘤胃微生物总DNA提取方法的比较 总被引：6，自引：0，他引：6
目前如何获得完整的瘤胃微生物总DNA是对瘤胃微生物在分子水平研究中关键的一步。瘤胃微生物总DNA分子片段很大,大概在15kb~20kb,因此需要选择一种合适的提取方法来获得完整的总DNA片段。笔者研究采用物理方法如玻璃珠研磨震荡法、反复冻融法、超声波破碎法、液氮研磨法等,化学方法如表面活性剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）、溴化十六烷三甲基铵（Cetyltrimethyl Ammonium Bromide,CTAB等）,酶解法（溶菌酶、蛋白酶K等）相结合,并对其进行比较,选择最佳的提取方法,使其符合以后PCR扩增要求以及其它后续研究工作。试验结果表明用玻璃珠研磨震荡加CTAB提取液的方法、反复冻融加SDS提取液的方法提取的瘤胃微生物总DNA的效果高于其它方法,并且通过电泳以及PCR检测,所提取的DNA的量适于进一步的分子生物学研究。 相似文献
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五种蔷薇属植物基因组DNA的提取及鉴定 总被引：16，自引：0，他引：16
高质量基因组DNA的有效提取是蔷薇属植物分子生物学研究的基础。本文以单宁、多糖含量高、极易褐化的5种蔷薇属植物的嫩叶，以及刺梨、月季组培苗和愈伤组织为材料，探索了改良CTAB法、SDS法及CTAB微量法分离基因组DNA的方法。结果表明，采用材料裂解前加入不含CTAB的缓冲液，及提取过程中用4％β-巯基乙醇的改良CTAB法，可有效地控制田间材料的褐变及DNA污染，分离出适合限制性酶切反应的高质量DNA；该法获得的未经纯化的粗提DNA及CTAB法分离的组培材料DNA，可有效地用于蔷薇属植物基于PCR扩增的分子生物学研究。 相似文献