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本文应用钡盐吸附洗脱、硫酸铵分段盐析、DEAE—Sephadex A50柱层析及Afi—Gel Blue柱层析等步骤 相似文献
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鸭梨果肉多酚氧化酶的活性研究与纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
对鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果肉多酚氧化酶的活性进行研究并对其进行纯化。以鸭梨果肉为试材,采用邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,就pH值、温度、热稳定性、抑制剂、不同成熟期及果肉不同部位等因素对PPO活性的影响进行了研究;酶粗提液经30%硫酸铵沉淀去杂和80%饱和度硫酸铵析出、Sephadex G200柱层析及HiPrepTM16/10 QXL离子柱层析等步骤进行了纯化,经SDS-PAGE进行了验证。结果表明:鸭梨果肉中的PPO最适pH值为6.4;最适温度为25℃;20～25℃时热稳定性较高;不同成熟期的活性不同;34 mmol/L的NaCl为较好的抑制剂;果肉近果心处活性最高,中部活性最低。经纯化,获得均一的PPO,分子量约43 kD。为鸭梨果肉PPO的性质研究以及控制梨果PPO酶促褐变提供了依据。 相似文献
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为控制马铃薯在贮藏和加工过程发生的酶促褐变,对马铃薯多酚氧化酶进行分离纯化,并研究其酶学特性。采用缓冲液提取、低温离心得到马铃薯多酚氧化酶(PPO)粗酶液,粗酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25分子凝胶柱层析脱盐处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化得到马铃薯PPO,进一步对其部分酶学特性进行研究。结果显示：纯化后的马铃薯PPO其比活力为283.0 U·mg-1,回收率为16.8%,纯化倍数为18.6倍;该酶最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.5;以邻苯二酚为底物时,最适底物浓度为50 mmol·L-1。该酶对焦性没食子酸、间苯二酚的底物亲和性较强,对4-甲基儿茶酚、咖啡酸、没食子酸、对苯二酚、邻苯二酚、绿原酸的底物亲和性较低,对N-BOC-酪胺、愈创木酚亲和性很低。 相似文献
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[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。 相似文献
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香蕉果肉过氧化物酶初步纯化及特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]为控制香蕉POD引起的酶促褐变提供理论依据。[方法]采用饱和度70%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M离子交换柱层析分离纯化果肉POD,测定香蕉酶液中POD活性和蛋白质含量。[结果]香蕉提取酶液中POD被纯化了约7.3倍,回收率为33.8%。香蕉果肉POD对愈创木酚的Km值为5.98 mmol/L,其最适pH值为6.5,pH值稳定性为pH 6.0~10.0,最适反应温度为35℃。盐酸-L-半胱氨酸、抗坏血酸能显著地抑制香蕉果肉POD的活性,亚硫酸氢钠、植酸、柠檬酸也能有效地抑制该酶活性;而Cu2+对香蕉果肉POD则有明显的激活作用。[结论]香蕉果肉POD的热稳定性低于香蕉PPO热稳定性,其有效的化学抑制剂与香蕉PPO基本一致。 相似文献
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JS018菌有机磷农药降解酶的纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS-PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa,N末端16个氨基酸残基测序的结果为:GAPFQNDVPPACYRFR。 相似文献
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Roseomonas JS018有机磷农药降解酶的纯化 总被引：3，自引：1，他引：3
本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电泳测定该酶相对分子质量约为37 ku,N末端16个氨基酸残基测序结果为:GAPFQNDVPPACYRFR. 相似文献
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以羔羊皱胃为原料,研究了硫酸铵和食盐盐析法纯化羔羊皱胃酶的工艺条件,系统分析了食盐饱和度、pH、盐析温度以及盐析时间对羔羊皱胃酶纯化效果的影响。结果表明,硫酸铵不适宜用于盐析羔羊皱胃酶,而食盐是羔羊皱胃酶适宜的盐析剂。食盐盐析羔羊皱胃酶的适宜盐析条件为:食盐饱和度55%~65%,pH 4.00~4.60,盐析温度4℃,盐析时间16 h。 相似文献
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高山花椰菜多酚氧化酶特性及酶褐变预防对策 总被引：1，自引：0，他引：1
用硫酸铵分级盐析及透析法分离提纯高山花椰菜多酚氧化酶(PPO)。用分光光度法测定PPO活力,分别测定了花椰菜PPO的最适pH、最适温度及vmax和Km值。结果表明,以邻苯二酚为底物,花椰菜的最适pH值为6.7,最适温度为55℃,vmax值为340.1unit.min-1,Km值为4.7mmol.L-1。温度适应范围广泛,与底物亲和力特别高。并据此结合山区气候和栽培特点提出了相应的预防花椰菜酶褐变对策建议。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化 总被引：3，自引：0，他引：3
用硫酸铵分级盐析, 透析除盐及 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ—纤维素、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ２５ 和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ５０ 三种柱层析方法从蚯蚓组织提取液中分离纯化一种单一组分的纤溶酶。 相似文献
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为了提高藻蓝蛋白的纯度,研究采用两步盐析法(1步除杂,2步沉淀)对螺旋藻中的藻蓝蛋白的纯化方法进行考察。从盐析时间、硫酸铵饱和度和p H 3个因素考察,对两步盐析工艺进行优化。结果表明,除杂最优工艺为:硫酸铵饱和度20%,p H为6. 8,盐析时间20 min,沉淀最优工艺为:硫酸铵饱和度40%,p H6. 8,盐析时间15 min,最终得到纯度为2. 77的藻蓝蛋白。 相似文献
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实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质，最适盐析硫酸铵饱和度为60％～70％，粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS—PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa．N末端16个氨基酸残基测序的结果为：GAPFQNDVPPACYRFR。 相似文献
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叶锈菌侵染的小麦细胞间隙液中激发子的分离纯化 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】在已经证明小麦与叶锈菌互作的小麦细胞间隙液（IWF）中存在具有蛋白质性质的激发子活性物质的基础上,以期通过试验得到激发子的纯品制剂,为进一步研究激发子的组成和结构、激发子受体以及寄主产生过敏性反应的信号转导机制提供基础条件。【方法】提取叶锈菌小种165侵染的小麦品种洛夫林10细胞间隙液,通过盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等分离纯化技术,对IWF中具有激发子活性的蛋白质组分进行分离纯化。【结果】分离出能诱导洛夫林10健康叶片PAL、PO活性增高并诱发洛夫林10悬浮细胞程序性死亡的激发子活性组分。该组分经SDS-PAGE电泳呈现单一条带,分子量约为32 kD。【结论】经硫酸铵分段盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等方法,从感染叶锈菌小种165的洛夫林小麦叶片细胞间隙液中分离出具有激发子活性的蛋白质组分。 相似文献
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龙眼果皮过氧化物酶的分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
以福眼龙眼(D im ocarpus longanaLour.cv.Fuyan)果皮为材料,经硫酸铵盐析分级,以及Stream line Phenyl、DEAE-Cel-lu lose、Phenyl Sepharose H igh Perform ance、Superdex 200 prep grade等柱层析分离,得到由分子质量约45.6 ku的单一亚基组成的4个POD组分,其分子质量分别为290.1、232.1、188.5和170.7 ku. 相似文献
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研究了不同冷冻离心温度、冷冻离心转速和不同盐析剂浓度对盱眙野生地皮菜中蓝藻蛋白提取纯度的影响,从而得到蓝藻蛋白最佳提取条件为:冷冻离心时温度为4℃,冷冻离心转速为10 000 r/m in,硫酸铵盐析浓度为60%。 相似文献
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[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。 相似文献
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斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白纯化及其结构分析 总被引：2，自引：0，他引：2
通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白(Ig),结果表明,斑点叉尾(鱼回)血清Ig主要分布在35%～55%的硫酸铵沉淀区间;而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰.SDS-PAGE分析表明,纯化后的血清Ig纯度提高.通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Western blot)试验对血清Ig的结构进行初步分析,发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72 kD,轻链有3条,其分子量分别为21 kD、23.5 kD和26 kD;在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式,主要条带的分子量分别为760 kD、525 kD、330 kD和230 kD;而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式,分子量约为870 kD. 相似文献