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1.
甘薯多酚氧化酶cDNA的克隆及序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
植物多酚氧化酶（olyphenol oxidase,PPO)是一类核编码的铜金属酶，含有2个保守的铜结合区域（CuA和CuB)，N端和C端部分缺乏明显的同源性。根据植物PPO的结构特点，从2个保守的铜结合区域的氨基酸序列设计一对简并引物，扩增了甘薯（Ipomoea batatas L.) PPO保守区之间的cDNA片段，测序表明该片段含595bp，编码195个氨基酸，推导的氨基酸序列包含了植物PPO的2个保守的铜结合区域，与葡萄（Vitis vinifera)，番茄（Lycopersicon esculentum)马铃薯（Solanum tuberosum)和蚕豆（Vicia faba)PPO保守区的同源性分别为71．3％，80．8％，79．8％，70．6％。在此基础上设计引物通过3'RACE和5'RACE的方法获得了甘薯PPO cDNA的3'和5'端的片段。最后根据保守区的cDNA片段，3'RACD片段和5'RACE片段的序列信息进行拼接，推导出甘薯PPO cDNA的全部序列信息。结果表明：甘薯PPO cDNA全长含1984bp，有完整的阅读框，编码588个氨基酸。另外5'非翻译区16bp,3'非翻译区202bp，其中包括1个多聚腺苷酸化信号AATAAA，以及1个含17个腺苷酸的ploy(A)尾。由甘薯PPO cDNA推导的氨基酸邓列由葡萄，番茄，马铃薯和蚕豆PPO cDNA推导的氨基酸序列进行比较，它们之间存在较明显的同源性，同源性分别为49％，48％，47％和49％。 相似文献
2.
月季切花衰老相关基因的差异显示及其序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
摘要：通过对不同瓶插寿命切花月季（Rosa hybrida）品种的DDRT-PCR方法，从长寿命的Pavarotti花瓣中扩增出22条cDNA特异片段，共得到9个cDNA片段的克隆，分别命名为b21、b32（b33）、b43、b51（b52、b814）、b618（b101、b108、b813）、b624、b131、b134和b186。序列测定和同源性检索的结果表明，来自b6的2个克隆b618和b624的序列不同，其中一个片段b618为439 bp，其氨基酸序列与拟南芥（Arabisopsis thaliana）、柑橘（Citrus sinensis）、萝卜（Raphanus sativus）、苹果（Malus sp.）、葡萄（Vitis vinifera）和胡颓子（Elaeagnus umbellata）等查尔硐异构酶(CHI)相应区域的同源性为71%~79%；另一个片段b624为440 bp,其氨基酸序列与拟南芥、豌豆（Pisum sativum）、欧洲油菜（Brassica napus）等的磷酸乙酰胆碱胞苷转移酶(CPCT)相应区域的同源性高达86%~90%。RT-PCR验证表明这2条cDNA片段为阳性结果。CHI涉及类黄酮色素的生物合成途径，CPCT参与胞苷二磷酸胆碱的合成途径，二者均与衰老进程相关。 相似文献
3.
利用Real-time PCR技术对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)两个化学通讯相关蛋白：气味结合蛋白Ac-ASP2和化学感受蛋白Ac-ASP3基因的时空转录谱进行了研究。结果表明，Ac-ASP2是一个特异表达于中蜂触角的基因，在幼虫及蛹中均不表达；利用2-ΔΔCt的相对定量方法，发现Ac-ASP2在成虫触角中具有几个丰度较高的日龄，即1、9、15、27和30日龄，这几个高表达日龄均较其它时期高出近10倍以上；利用标准曲线的绝对定量方法，Ac-ASP3在其不同器官中的原始拷贝数关系为：翅>腹>胸>足>触角>头，其中翅、腹和胸部模板拷贝数较高（均达到106数量级），而在足、触角以及头中的表达丰度相对较低（均为105数量级），表明Ac-ASP3与中蜂翅与腹部的化学感受行为有密切的关系。 相似文献
4.
烟夜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与表达 总被引：9，自引：0，他引：9
应用RT-PCR技术，从烟夜蛾(Helicoverpa assulta)幼虫脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素延伸蛋白基因的cDNA片段，扩增得到的片段全长390bp，编码一个长为129个氨基酸残基的蛋白质，预测分子量14.8kDa。同源性分析表明，此cDNA序列为ubiquitin-53aa extension protein(ubi-53，UBE)基因，在泛素蛋白后融合了一个核糖体L40蛋白(ribosomal L40 protein)。使用Clustal W软件，对cDNA编码的氨基酸序列进行了同源性分析，分析表明：烟夜蛾的泛素延伸蛋白氨基酸序列与其他真核生物泛素延伸蛋白氨基酸序列高度同源（90%－98%），与棉铃虫核多角体病毒(HaSNPV)泛素的同源性为69%。将烟夜蛾的UBE基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG进行诱导表达，电泳检测到一条约40kDa大小的外源蛋白，用鼠抗GST抗体进行Western blot检测表明原核表达蛋白是目的蛋白。 相似文献
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水稻受稻瘟病菌诱导的转座类似蛋白新基因RIM2的分离与鉴定 总被引：5，自引：0，他引：5
以近等基因系H7R和H7S为材料，运用差别显示（DD－PCR）技术获得RMal9片段。用此片段为探针筛选cDNA文库，获得3944bp全长基因RIM2。Northern杂交华结果显示该基因在水稻抗感品系中均受稻瘟病菌的强列诱导。RIM2 ORF编码653个氨基酸，其序列与多种植物转座类似蛋白有32％－55％的同源性，其5′端约800bp与Xa21基因家庭Al，C的非编码区有82％的序列同源性。Southern杂交表明RIM2多拷贝存在与水稻基因组中。RIM2为一新的受病菌诱导的早期反应基因。 相似文献
6.
水稻黑条矮缩病毒玉米分离物基因组S8和S9的序列分析及其原核表达 总被引：15，自引：0，他引：15
通过RT-PCR获得了玉米粗缩病病毒湖北分离物(Hbm)基因片段S8和S9的全长cDNA克隆，并测定了它们的全序列。S8全长1936bp，其编码链只含1个ORF，编码1个由591个氨基酸组成、分子量约为68kD蛋白；S9全长l900bp，含有两个非重叠的ORF，分别编码由347个和209个氨基酸组成、分子量分别约为40kD和24kD蛋白。序列分析表明，Hbm-S8和S9与水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)中国不同分离物之间的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94．4％～98．9％和96．0％~99．0％，且与日本RBSDV的序列同源性高于与玉米粗缩病毒相应片段的序列同源性，进一步证明了引起我国玉米粗缩病的病原为RBSDV。SDS-PAGE分析表明，经IPTG诱导，RBSDV8和9编码的蛋白可在大肠杆菌(Escherichia coil)中高效表达。以这些蛋白为抗原，制备了抗血清。用Western blot方法在感病的玉米(Zea mays)植株中可检测到RBSDV-Hbm S8和S9 ORF1编码的蛋白。 相似文献
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小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（MxSAMS）的克隆和表达分析 总被引：1，自引：1，他引：0
从本实验室建立的小金海棠缺铁差减文库中分离出一个cDNA片段,在GenBank中发现该片段与其它植物的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因具有90%的同源性。利用RACE技术成功地获得小金海棠（Malus xiaojinensis）SAMS基因(MxSAMS)的cDNA全长序列（GenBank登录号：EU639408）,该基因cDNA全长1 479 bp,最大开放阅读框1 176 bp,编码392个氨基酸,酶蛋白理论分子量为42.99 kD;与其它植物的蛋白质氨基酸序列同源性在88.1%~92.6%之间。推测的MxSAMS蛋白质三级结构包含3个保守结构域和一个保守的ATP结合位点GAGDQG。Southern 杂交显示,MxSAMS基因在小金海棠基因组中是单拷贝的。半定量RT-PCR结果表明,该基因在小金海棠的根和叶中均受缺铁胁迫诱导增强表达。 相似文献
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中国野生葡萄抗白粉病基因RAPD标记的克隆及序列分析 总被引：4，自引：1，他引：3
对获得的中国野生葡萄抗白粉病基因RAPD标记OPW02-1756、OPO11-964、OPY13- 661、OPB11- 520、OPW05-766、OPV03-1365和OPJ16-759进行了回收、克隆、测序及序列分析。结果表明,7个RAPD标记的实际长度分别是1756bp、964bp、661bp、520bp、766bp、1365bp和759bp。OPW02-1756序列与3条欧洲葡萄cDNA克隆获得的EST序列有94 ~ 98%的同源性。OPO11- 964序列与欧洲葡萄“赤霞珠”的1条EST序列有93%同源性,与“霞多丽”的2条果实不同发育时期获得的EST序列有90%和87%的同源性,与甜橙在多种病原菌侵染后通过cDNA文库获得的1条EST序列有83%的同源性。OPO11-964最大的一个阅读框架包含444个碱基,编码147个氨基酸,该氨基酸序列和21个其它生物的未知功能蛋白序列有部分相似性。OPY13-661序列与欧洲葡萄16条EST序列有同源性,其中与“赤霞珠”cDNA克隆的EST有较高的同源性, 与“霞多丽”的2条叶片非生物胁迫有关的EST序列同源性均为89%。OPB11-520序列与拟南芥基因组4条未知功能DNA序列有94%同源性。OPW05-766序列与来自于酿酒葡萄的GAG-POL 前提有50%的同源性。OPV03-1365序列与水稻基因组6条序列有81 ~ 88%的同源性,与拟南芥基因组3条序列有84 ~ 91%的同源性。OPJ16-759与欧洲葡萄“霞多丽”叶片14条非生物胁迫EST序列有83 ~ 100%的同源性,与欧洲葡萄“Cabsau”浆果3条水分胁迫的EST序列有94 ~ 100%的同源性。 相似文献
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摘 要：分别利用基因特异引物YMT-ⅠSP、YMT-ⅢSP和M13 引物，通过RT-PCR和3′-RACE 方法从牦牛肝脏和大脑组织RNA中分别扩增并克隆出了牦牛MT-I / Ⅲ cDNA 3′ 端全长序列（分别为331bp和378bp），其中分别包含MT-I基因编码区全长（183bp）、MT-Ⅲ基因编码区全长（207bp），同时在MT-I / Ⅲ基因cDNA的3′ 末端具有加尾信号AATAAA和多聚腺苷酸尾巴Poly（A）。将牦牛MT-I / Ⅲ cDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现，牦牛MT-I/Ⅲ核酸序列特别是其编码区序列在不同哺乳动物中相当保守。牦牛MT-I基因编码的MT-I蛋白由61个氨基酸组成，其中20个半胱氨酸(Cys)，具有保守的三肽结构如：C-X-C，C-C-X-C-C，C-X-X-C等，在分子进化上十分保守；MT-Ⅲ编码的蛋白质由68个氨基酸组成，其中19个Cys，除了具有与MT-Ⅰ相同的以上保守的短肽结构外，牦牛MT-Ⅲ蛋白质的氨基酸序列还具有T、CPCP、GEGAEA等MT-Ⅲ蛋白质特异的保守短肽结构结构，在分子进化上亦很保守。 相似文献
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王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.浆蜂)是我国20世纪90年代从意大利蜜蜂培育成功的新蜂种,产浆性能明显高于未经选育的意大利蜜蜂.中华蜜蜂(A. cerana cerana F.中蜂)是我国土生土长的蜂种,其蜂王浆产量低于以意大利蜜蜂为代表的西方蜜蜂.两蜂种所产蜂王浆的蛋白质组研究还未见报道.本研究利用双向电泳技术对浆蜂和中蜂新鲜蜂王浆全蛋白质组进行分析比较,为鉴定和判断蜂王浆的来源和蜂王浆功能成分的开发利用提供科学依据. 相似文献
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Tao T Su SK Miao YG Yue WF Du HH Chen SL Liu F Zhan Y 《Journal of agricultural and food chemistry》2008,56(20):9464-9468
Royal jelly (RJ) is a thick, milky material produced by both the hypopharyngeal and the mandibular glands of nurse honeybees. The main proteins of RJ, named apalbumins or major royal jelly proteins (MRJPs), have multiple biological functions. Apalbumin1 is the most abundant glycoprotein of RJ. In this study, Bacmid- apalbumin1 was constructed for Apis cerana cerana using the newly established Bac-to-Bac/BmNPV baculovirus expression system (BES). This procedure allowed us to obtain the recombinant A. cerana cerana ( Acc) apalbumin1 (r Accapalbumin1) from the hemolymph of silkworm larvae through the BmNPV bacmid system, 96 h postinfection. The r Accapalbumin1 was then purified by Ni-NTA spin columns and subjected to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting. A 55 kDa protein with good solubility was then obtained. The peptide Ile-Phe was identified from trypsin production of r Accapalbumin1. Such a peptide has been reported to have an antihypertensive ability. Our results have therefore potential applications in biomedical research and open new perspectives for the study of apalbumins. 相似文献
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用Taq酶反转录、扩增及克隆中蜂溶血肽成熟区cDNA的研究 总被引：5，自引：2，他引：5
蜂毒的药用价值一直受到人们的关注.溶血肽(melittin)是蜂毒的一种主要成分,分子量约2.6 kD.陈仲兵等和Vlasak等已克隆到意蜂(Apismellifera)melittin的cDNA,王关林等在大肠杆菌中对意蜂melittin进行了融合表达.但对中蜂(Apis cerana)melittin基因的研究尚未见报道.近年已有研究发现TaqDNA聚合酶具逆转录活性.本研究所用的RNA抽提试剂盒能使mRNA在高温下保持稳定,故可利用TaqDNA聚合酶对中蜂melittin的mRNA在高温下进行RT-PCR,获得中蜂melittin的成熟区双链cDNA,克隆、测序后与已发表的意蜂相应序列进行比较,为研究中蜂melittin及用Taq DNA聚合酶直接进行RT-PCR提供基础资料. 相似文献
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西方蜜蜂正反交苹果酸脱氢酶II基因的遗传差异 总被引：1，自引：0，他引：1
西方蜜蜂(Apis mellifera)中,苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)II由a、b、c三个等位基因编码,具有aa、bb、cc、ab、bc、ac六种基因型.在酶谱上,纯合子为一条带,杂合子三条带. 相似文献
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Proteomic analysis of royal jelly from three strains of western honeybees (Apis mellifera) 总被引：2，自引：0，他引：2
To compare the protein complement of royal jelly (RJ) from high RJ producing honeybees ( Apis mellifera L.), a strain of A. mellifera artificially selected for increased RJ production from Italian honeybees in China for more than two decades was compared to those of native Italian honeybees ( A. mellifera L.) and Carnica honeybees ( A. mellifera C.); the protein in RJ from these three strains of honeybees was partially identified by using a combination of two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE), matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF/MS), and a protein engine identification tool applied to the honeybee genome. The results showed that 152, 157, and 137 proteins were detected in the three species of RJ; among which 57, 57, 51 high abundant proteins ere identified, respectively. Most identifited spots, 45, 45, 41, were assigned to major royal jelly proteins (MRJPs). Remarkable differences were found in the heterogeneity of the MRJPs, in particular, MRJP3. Also, 3-glucose oxidase, 1-peroxiredoxin (PRDX), and 1-glutathione S-transferase (GST) S1 were identified in three RJ samples. Furthermore, during the determination of the peptides mass fingerprinting (PMF) of each spot, for the first time, PRDX and GST S1 proteins have been identified in RJ. Thus, the results suggest that the protein complement of high RJ producing honeybees is not different compared to native Italian honeybees, while a difference remains between Carnica honeybees. 相似文献
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Characterization of royal jelly proteins in both Africanized and European honeybees (Apis mellifera) by two-dimensional gel electrophoresis 总被引：3，自引：0，他引：3
Sano O Kunikata T Kohno K Iwaki K Ikeda M Kurimoto M 《Journal of agricultural and food chemistry》2004,52(1):15-20
In this study, the proteins contained in royal jelly (RJ) produced by Africanized honeybees and European honeybees (Apis mellifera) haven been analyzed in detail and compared using two-dimensional gel electrophoresis, and the N-terminal amino acid sequence of each spot has been determined. Most spots were assigned to major royal jelly proteins (MRJPs). Remarkable differences were found in the heterogeneity of the MRJPs, in particular MRJP3, in terms of molecular weights and isoelectric points between the two species of RJ. Furthermore, during the determination of the N-terminal amino acid sequence of each spot, for the first time, MRJP4 protein has been identified, the existence of which had been only implied by cloning of its cDNA sequence. The presence of heterogeneous bands of glucose oxidase was also identified. Thus, the results suggest that two-dimensional gel electrophoresis provides a suitable method for the qualitative analysis of the proteins contained in RJ derived from different honeybee species. 相似文献
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转Bt-cry1Ab玉米花粉对意大利蜜蜂生长发育及体内酶活性的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
自10年前首次种植转基因植物以来,转基因作物已在全球得到大面积推广。这些转基因作物中绝大多数品种具有抗虫基因能够增强作物对靶标昆虫的抗性。同时转抗虫基因植物可能带来的生态安全和环境问题也引起了国际社会广泛的关注。鉴于此,本实验开展了转Bt-cry1Ab基因抗虫玉米花粉 相似文献
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安阳市近10年来建成的水土保持工程的主要建设管理方式可分为3种,即:乡村组织治理,完成后分配给农户分散经营;乡村组织治理,由村成立专业队代表村集体管理;把小流域或荒山承包给个体或私人经济组织,由其自行治理和经营管护。3种建管方式中以后者为最优,其经济效益是分散经营管理的5倍、专业队经营管理的3.5倍。针对水保工程建设管理中存在的问题和适应农村税费改革等要求,提出了加快安阳市水保生态建设的建议。 相似文献