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1.
《农产品加工．学刊》2017,(13)
从Bacillus subtilis ZH168发酵液中提取多酚氧化酶,通过分光光度计法对其p H值、温度、底物、抑制剂及激活剂等特性进行研究。结果表明,邻苯二酚做底物时,p H值为7时活性最大,多巴做底物时最适p H值为8;该酶最适温度40℃,具有较好热稳定性;多酚氧化酶可催化不同酚类物质,催化活性不同;SDS,Triton X-100和尿素对酶均具有激活作用;Cys,Na HSO3,EDTA,VC,苯甲酸和Gly对酶有抑制作用;金属离子Cu2+可以显著提高酶活,Al3+和Mn2+显著抑制酶活。 相似文献
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以广西平乐大果山楂为原料,邻苯二酚为底物,采用分光光度法测定大果山楂多酚氧化酶(PPO)活性,考察p H、温度、热处理、底物浓度及抑制剂对PPO活性的影响,为控制其生产过程中酶促褐变提供参考。结果表明,以邻苯二酚为底物时,PPO酶促反应产物的最大吸收波长为420 nm,反应时间为3 min,最适p H为6.8,最适温度为45℃;90℃处理4 min,PPO基本失活,80℃处理6 min后,相对酶活性为19.75%;最适底物浓度为0.08 mol/L,PPO酶促动力学符合米氏方程,相应的参数Km=51.24 mmol/L,Vmax=54.53 U/min;在试验浓度条件下,5种抑制剂对大果山楂PPO活性均有抑制作用,氯化钠的抑制作用最弱,高浓度下,柠檬酸的抑制效果较EDTA、抗坏血酸、草酸要好。 相似文献
3.
以富士苹果为原料,从中提取多酚氧化酶粗提液,通过底物筛选,从不同的pH值、温度和抗氧化剂对PPO酶的影响等方面进行研究。结果表明,PPO酶对4种底物催化活性不同,由高到低的顺序依次为:邻苯二酚,DL-半胱氨酸,苯甲酸,山梨酸;PPO酶的最适pH值为5.0,最适温度30℃,最佳酶浓度0.25mol/L,最佳底物浓度0.6mol/L;当VC浓度达到150mmol/L,90%的PPO酶活性被抑制。 相似文献
4.
为有效控制马铃薯加工过程中的酶促褐变,以黑美人马铃薯块茎为原料,分别提取游离态多酚氧化酶(sPPO)和膜结合态多酚氧化酶(mPPO)粗酶,并进行酶学性质研究.结果表明,黑美人马铃薯sPPO和mPPO的最大吸收波长分别为403 nm和406 nm.sPPO最适反应pH值为7,最适反应温度为25℃;mPPO最适反应pH值为7,最适反应温度为30℃.以绿原酸和间苯二酚为底物时,sPPO和mPPO均未检测到酶活力;以邻苯二酚为底物时,sPPO、mPPO的米氏常数(Km)分别为39.423、35.291 mmol/L,最大反应速度(Vmax)分别为0.019、0.290 mmol·L-1·min-1;以焦性没食子酸为底物时,sPPO、mPPO的Km分别为205.896、205.067 mmol/L,Vmax分别为0.008、22.321 mmol·L-1·min-1.亚硫酸钠、抗坏血酸对sPPO和mPPO酶活力抑制作用明显;植酸、草酸、柠檬酸和EDTA对sPPO和mPPO酶活力也有不同程度的抑制.以上结果说明:sPPO和mPPO酶学性质存在较大差异,mPPO酶活力要显著高于sPPO,建议在利用黑美人马铃薯进行加工时,重点考虑mPPO对酶促褐变的影响. 相似文献
5.
从湖北省襄阳市三九酿酒厂下水道污泥分离筛选得到产淀粉酶菌株HB-3,根据菌株生长形态和生理生化特征分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌。短小芽孢杆菌HB-3在淀粉培养基上培养72 h后,淀粉酶活力达到120.0 U/mL。然后使用DEAE-52和CM-52阴阳离子交换层析柱对短小芽孢杆菌HB-3产生的淀粉酶进行了部分纯化。结果表明,短小芽孢杆菌HB-3中淀粉酶经过部分纯化后,纯化倍数为5.9,酶活力回收率为90.9%。纯化后的淀粉酶使用SDS-PAGE凝胶电泳研究,以标准蛋白为对照,计算出短小芽孢杆菌HB-3中淀粉酶分子量为56.5 kDa。同时对短小芽孢杆菌HB-3的淀粉酶进行了纯化特性研究,结果表明,该酶的酶促反应最适温度为50℃,40～60℃热稳定性良好;该酶的酶促反应最适pH为5.0,pH 4.0～6.0酸碱稳定性良好,该酶对底物淀粉的反应动力学米氏常数K_m为0.062 mmol/L,最大反应速率V_(max)为3.019 mmol/(L·min)。 相似文献
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人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L基因,构建p UM19-T-Bcl-x L质粒,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;其次设计包含PTD序列的Bcl-x L引物,以测序正确的p UM19-T-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增PTD-Bcl-x L序列,将扩增序列克隆入p ET28a载体,构建PTD-Bcl-x L蛋白的原核表达质粒p ET28a-PTD-Bcl-x L,并对p ET28a-PTD-Bcl-x L载体双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET28a-PTD-Bcl-x L重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度和诱导时间进行了优化;SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况,在变性条件下用Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白;最后用SDS-PAGE、Western Blot及质谱对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p UM19-T-Bcl-x L质粒出现约774 bp大小条带,p UM19-T-Bcl-x L质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建p UM19-T-Bcl-x L质粒;双酶切p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒出现约744 bp大小条带,p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p ET28a-PTD-Bcl-x L原核表达载体;在IPTG诱导下p ET28a-Bcl-x L重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出36 k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为6 h;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液超声后的沉淀里,以包涵体形式表达,经Ni-NTA琼脂纯化获得了高纯度的融合蛋白;Western Blot和质谱鉴定证明IPTG诱导表达蛋白和纯化的融合蛋白为PTD-Bcl-x L蛋白。纯化得到了PTD-Bc L-x L融合蛋白,推进了PTD-Bcl-x L蛋白在猪、牛等家畜精液冷冻保存的应用进程。 相似文献
8.
拟南芥TGG5基因的克隆、表达和酶学特性 总被引：2，自引：2，他引：0
芥子酶是广泛存在于十字花科植物中的一类降解硫代葡萄糖苷的酶。当植物受到病虫侵袭时,
芥子酶与其底物硫代葡萄糖苷结合,释放有毒的水解产物形成植物重要的化学防御系统。TGG5 是新
发现的一类芥子酶基因,对其研究将有利于揭示芥子酶防御系统的功能。试验克隆了拟南芥TGG5 基
因cDNA,构建酵母表达载体,转化毕氏酵母GS115。经甲醇诱导表达和Ni 亲和层析,获得纯化的
TGG5 重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量集中在58 kD左右,并有较明显拖尾,呈现典型
的糖基化蛋白的特征。进一步探讨了TGG5 重组蛋白的酶学特性,结果表明：该芥子酶的Km为1.96
mmol/L,Vmax为0.084 mmol/(min·mg);酶反应的最适pH 为5.5;该芥子酶在37~80℃范围内有较广泛的
温度适应性,并具有较好的80℃热稳定性;NaCl对该酶有明显的抑制作用;低浓度抗坏血酸具有激活芥
子酶的作用,抗坏血酸终浓度为1.5 mmol/L时,酶活力最大。RT-RCR分析,证实了TGG5 只在拟南芥根
中特异表达,这表明TGG5 可能代表了一个芥子酶基因新亚家族。 相似文献
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10.
摘 要：探讨蔵灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶的特性及其发酵动力学原理。采用单因素多水平试验,在pH4~8、温度31~43℃、底物浓度4~8 mmol/L及不同化学试剂(SDS、EDTA、尿素、Cu2+ 、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Al3+、Mn2+)的条件下,胆盐水解酶与底物反应30min,检测酶活力。胆盐水解酶最适反应条件：pH为6.0、底物浓度为7 mmol/L、温度为37℃,Mn2+、Fe3+、Ca2+金属离子对酶活性有较大提高作用,其他化学试剂对酶活性影响不大。胆盐水解酶的酶促反应动力学常数Km为2.60 mmol/L。M3菌株在18~21 h进入稳定期,18h对数生长期时酶活性达到最高,表明其胆盐水解酶发酵动力学类型为生长偶联合成型。 相似文献
11.
本研究利用TAIL-PCR法克隆小花棘豆内生真菌A. oxyrtropis OW7.8 sac启动子序列,并进行功能元件预测;构建pBARGPEI-mCherry-sac启动子表达载体,将该表达载体转化OW7.8原生质体,经再生培养得sac启动子转录激活功能株。提取分离A. oxyrtropis OW7.8中的Sac,对其进行酶活力、最适pH值、最适温度、Km和Vmax研究。结果表明：荧光显微镜下检测到转录激活功能株有明亮红色荧光,而野生株OW7.8无红色荧光,sac启动子驱动了红色荧光蛋白基因的转录。Sac逆向反应的最适pH值为7.0,最适温度为24℃;以酵母氨酸为底物的Km=0.142 mmol/L、Vmax=0.067μmol/min,以NADP+为底物的Km=0.457 mmol/L、Vmax=0.235μmol/min。为深入研究该内生真菌SW生物合成途径与调控机制提供了重要基础数据。 相似文献
12.
小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究催化活性半胱氨酸Cys154、Cys158残基对小麦细胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Ta GAPC)蛋白酶活性的影响,利用重叠延伸PCR法分别将这2个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸,并分别连入p ET28a(+)原核表达载体。在25℃条件下,Ta GAPC及其定点基因Ta Cys154S/Ta Cys158S经0.25 mmol/L IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示,目标重组蛋白均为可溶性且大小约为40 k Da,与预测结果一致。在此基础上,经超声波破菌及镍柱纯化获得3种纯化重组蛋白。这为后续Ta GAPC及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。 相似文献
13.
以中苜1号、公农1号、肇东苜蓿、甘农3号紫花苜蓿品种的萌动种子为研究材料，采用不连续聚丙烯酰胺垂直平板凝胶和SDS-PAGE电泳方法进行过氧化物酶同工酶、苹果酸脱氢酶同工酶、超氧化物歧化酶同工酶、乙醇脱氢酶同工酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶同工酶种子贮藏蛋白进行电泳。图谱分析比较显示，采用萌动种子为样品可以获得清晰的电泳图谱，并建立标准化的检测程序。利用超氧化物歧化酶同工酶可以鉴别出来甘农3号，利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶同工酶可以鉴别出公农1号，利用种子贮藏蛋白电泳可以将中苜1号区分出来。 相似文献
14.
以“青富１３”苹果叶片为试材，研究了苹果过氧化物酶（ＰＯＤ）的理化性质。结果表明：苹果叶片ＰＯＤ同工酶可粗分为酸性酶和碱性酶两大类，酸性酶的最适ｐＨ在６．０左右，碱性酶的最适ｐＨ在９．０左右；在最适ｐＨ条件下，不同的缓冲液体系对ＰＯＤ活性有一定的影响；该酶系最适温度综合表现为２５℃左右，热稳定性试验表明苹果ＰＯＤ相当耐热，８０℃可维持活性２ｍｉｎ左右 ，５５℃可保持活性７２ｈ；底物试验证明，该酶系 相似文献
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在许多渗透调节剂中,甜菜碱是最理想的有机小分子渗透调节物质。甜菜碱在植物体内大量积累不会带来危害,同时能提高植物对环境胁迫的抗性。将海马齿中克隆到的甜菜碱醛脱氢酶基因构建到表达载体pET-28a(+)上,获得重组载体pET-SpBADH并将其成功地转化到BL21(DE3)中得到重组工程菌,经IPTG诱导能高效表达55 kD目的蛋白,表达量可以达到301 μg mL–1。酶学特征分析表明,该蛋白最适pH值为7.2,在偏碱条件下能维持较高的催化活性;SpBADH蛋白对高温敏感,且温度对催化活性影响较大,超过55℃时酶活性只有20%,最适酶催化活性温度为37℃;而有机小分子醇类对酶的催化活性有保护作用,可以通过自身特征维持酶催化活性的微环境。 相似文献
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枣尺蠖多酚氧化酶的提取及酶学特性 总被引：1，自引：1，他引：0
为了给治理枣尺蠖生物制剂的研发提供一定的理论基础。以枣尺蠖为试验材料,提取其发育过程中起重要作用的多酚氧化酶,进行了酶学特性的研究。结果表明：枣尺蠖多酚氧化酶用40%饱和度硫酸铵进行盐析效果最好,纯化倍数可达5.8倍。且在酶促反应过程中,底物为10 mmol/L的邻苯二酚时,不会发生底物限速行为。多酚氧化酶在pH 7.0,37℃时活性最高。多酚氧化酶热稳定性较差,随着保温时间的延长酶活力下降。70℃时将该酶保温9 min,酶就趋于完全失活。 相似文献
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过氧化物酶与植物体内活性氧的清除和逆境适应性反应密切相关，为了深入研究过氧化物酶在植物抗逆反应中的重要作用，本文以东乡野生稻叶片组织为材料，采用浸提、盐析、透析和柱色谱法分离纯化POD蛋白，采用聚丙烯凝胶活性电泳检测蛋白，利用愈创木酚法研究POD的活性和酶学特性。结果表明，经磷酸缓冲液浸提、40%~80%硫酸铵盐析、再经Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤，从东乡野生稻叶片组织分离制备得到POD1同工酶组分，酶蛋白的纯化倍数为16.49，比活力为568.80 U/mg。聚丙烯凝胶活性电泳检测仅呈单一POD1同工酶带，属于单一组分。经测定，POD酶Km为1.26 mmol/(L?min)，最大反应速度Vmax为17.51 mmol/(L?min)，最适宜的pH为5.0，最适宜温度35℃~45℃，Cu2+和Zn2+对POD有较强的激活作用，而Fe3+对POD活性有一定的抑制作用，POD酶活性受20%的甲醇、乙醇和丙酮等有机试剂抑制。本研究为进一步探讨东乡野生稻POD抗氧化功能和东乡野生稻抗寒生理提供了基础材料和依据。 相似文献
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以陕西临潼净皮甜石榴品种为试材,研究果皮中的过氧化物酶（POD）相关特性,确定其催化愈创木酚氧化后产物的最高吸光度值,并分别研究反应后放置时间、pH值、温度、反应时间、酶浓度以及底物浓度等条件对POD活性的影响。结果表明,以愈创木酚为底物时,其最适波长为370nm、最适pH值为6．5、最适温度为40℃、反应时间不宜超过15min、底物浓度宜大于0．03mol／L,反应完成后在40min后测定POD的活性最为稳定。 相似文献
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甘薯块茎中β-淀粉酶同工酶特性及其在萌芽过程中的组织分布 总被引：1，自引：0，他引：1
采用聚丙烯酰胺凝胶活性电泳方法,以常用的甘薯品种“北京553”为研究材料,对甘薯块根中β-淀粉酶的部分生化特性进行了相关研究。发现甘薯块根中β-淀粉酶的最适温度为40℃,其温度稳定性范围为0～60℃,最适pH值为5.2～6.5,而pH值为3.0～8.0时酶具有较强的稳定性;考查金属离子对甘薯块根中β-淀粉酶的影响时发现,Ca2+与Zn2+对β-淀粉酶的活性及其同工酶谱带的变化不产生任何影响,Cu2+对β-淀粉酶同工酶的活性表现出了轻微的抑制效应,Pb2+对β-淀粉酶同工酶活性的抑制作用相对较大,Hg2+几乎抑制了β-淀粉酶各同工酶的全部活性。对萌芽过程中甘薯不同部位的β-淀粉酶进行了进一步分析,发现甘薯块根中β-淀粉酶的活性最高,幼芽中活性较低,而须根中几乎检测不到β-淀粉酶的活性。 相似文献