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1.
《黑龙江畜牧兽医》2014,(21)
为了建立猪细小病毒野毒抗体的NS1-i ELISA和猪群PPV免疫抗体水平的VP2-i ELISA方法,试验采用猪细小病毒NS1和VP2基因主要抗原区纯化后的原核表达重组蛋白作为包被抗原。结果表明:检测灵敏度为1∶12 800;批内、批间重复性试验变异系数均小于10%,NS1-i ELISA方法与HI试验的符合率为100%;VP2-i ELISA方法与HI试验的符合率为94.7%,且比HI试验具有更高的敏感性。用这两种方法同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪O型口蹄疫病毒(FMDV)6种常见猪病病毒的阳性血清结果均为阴性。说明所建立的NS1-i ELISA和VP2-i ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性。这两种方法可联合应于PPV野毒感染的快速诊断、流行病学调查、猪群免疫疫苗后PPV抗体水平的检测以及猪群PPV的净化。 相似文献
2.
《黑龙江畜牧兽医》2016,(18)
为建立一种敏感、特异、高通量的猪细小病毒抗体检测方法,参照猪细小病毒(PPV)VP2蛋白的基因序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增了VP2蛋白主要抗原区域,将目的片段克隆至p ET30a原核表达载体中,获得了以可溶形式表达的重组VP2蛋白,重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测显示具有良好的抗原性;以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。结果表明:用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与血凝抑制试验(HI)方法的符合率为94.49%;应用该方法检测869份疫苗免疫猪血清样品,免疫合格率为87.92%;检测248份未免疫疫苗猪血清样品,阳性感染率为7.25%。 相似文献
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本研究以原核表达的重组NS1蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒5种常见猪病病毒的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12800;批内、批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;与血凝抑制试验(HI)符合率为100%。本研究建立的PPV NS1-ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为PPV的野毒抗体检测及PPV流行病学调查等快速诊断提供了一种技术手段。 相似文献
5.
《上海畜牧兽医通讯》2016,(2)
为了解临沧地区猪细小病毒(PPV)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对临沧部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的190份血清样品进行了猪细小病毒抗体检测。结果表明,临沧地区规模化猪场和散养户的猪细小病毒抗体总阳性率为66.32%,其中规模化猪场为71.52%,散养户猪群为32.00%,不同年龄段的种公猪、种母猪、育肥猪、仔猪抗体阳性率分别为50.00%、82.52%、43.59%、50.00%。从检测结果说明临沧地区存在猪细小病毒的感染。 相似文献
6.
利用纯化的猪细小病毒VP2蛋白为抗原,建立检测猪细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA。最佳反应条件为:抗原包被浓度300 ng/孔,4℃过夜,待检测血清1:50稀释。与猪细小病毒病阳性血清呈阳性反应,与猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪日本脑炎和猪圆环病毒病等5种疾病的阳性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数均小于10%。用该方法与Ceditest PPV猪细小病毒抗体检测试剂盒对102份血清进行平行检测和比较,间接VP2-ELISA的敏感性为93.8%,特异性为81.1%,符合率为89.2%。结果表明,猪细小病毒血清抗体间接VP2-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪细小病毒感染的血清抗体检测。 相似文献
7.
甘肃省酒泉市猪细小病毒病感染血清学检测报告 总被引：1，自引：0，他引：1
在11个未经猪细小病毒(PPV)疫苗免疫的种猪场采血清150份,经乳胶凝集试验(LAT)检测,在7个猪场检出猪细小病毒抗体,检出阳性血清24份,平均阳性率16%。 相似文献
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《畜牧与兽医》2014,(11):60-64
为建立一种敏感、特异、高通量的猪伪狂犬病毒(PRV)野毒抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了猪伪狂犬病毒gE蛋白,以纯化的重组gE蛋白为包被抗原建立了检测猪伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRV基因组gE基因序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约606 bp的gE基因片段,将目的片段亚克隆至pET30a原核表达载体中,经IPTG诱导重组gE蛋白的表达,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、PRV疫苗毒的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与IDEXX gE-ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.2%。本研究建立的gE-ELISA检测方法为PRV野毒抗体检测以及野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便、快速、高通量的血清学检测方法。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2015,(10)
为建立检测猪细小病毒3型(PPV3)的间接ELISA方法,本研究选取PPV3 VP2多表位亲水区序列设计引物,扩增并原核表达该基因片段,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了PPV3间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该检测方法仅对PPV3血清检测为阳性,与PPV1、PPV2、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒等的标准阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。本研究为临床上PPV3的检测提供了血清学检测手段。 相似文献
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为查明平顶山地区猪细小病毒(PPV)疫苗免疫效果,研究采用间接ELISA法对平顶山地区6个乡镇的15个不同规模猪场共1 040份血清样品进行细小病毒IgG抗体检测与分析。结果显示,平顶山地区不同规模猪场细小病毒血清抗体平均阳性率为71.15%,其中大型规模化猪场、小型规模化猪场和散养场阳性率分别为82.67%、72.4%和54.17%。不同类别猪群血清阳性率存在较大差异,其中以经产母猪的阳性率最高,为81.0%,仔猪和保育猪阳性率稍高,分别为79.55%和67.5%,种公猪和后备母猪阳性率最低,分别为47.22%和47.30%。研究表明平顶山地区猪群存在感染猪细小病毒的风险,需要加强相关免疫与防控。 相似文献
11.
本次试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)检测了曲靖市8个规模化猪场采集的1077份血清6种猪主要繁殖障碍性病毒病抗体。检测结果显示:猪瘟病毒(HCV)、猪伪狂犬病病毒-gE基因(ADV-gE)、猪细小病毒(PPV)、猪日本乙型脑炎(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒II型(PCV-2)血清抗体阳性检出率分别为"0"、22.28%、32.93%、52.99%、29.96%和21.88%。结果表明:检测的8个规模化猪场未感染猪瘟野毒,猪伪狂犬病、猪细小病毒、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征等疫病不同程度地存在野毒感染。 相似文献
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为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接ELISA抗体检测方法。该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1∶128,高于IDEXX PRV/ADV g B抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10%,重复性良好。利用该方法与Bio Chek PRV-g B抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100%,阴性符合率为97.67%,总体符合率为97.78%;同时,采用该方法与IDEXX-g I(gE)和IDEXX-g B试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致。本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法。 相似文献
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为了解新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒野毒感染情况,采用阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)方法,对2014年6月至2015年3月采集自北疆巴州、石河子、克拉玛依、伊犁地区18个生猪养殖场共1 788份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gE蛋白抗体的检测。结果显示,猪伪狂犬病病毒野毒平均感染率为68.23%(1 220/1 788),各养殖场感染程度不一,感染率最高达100.00%,最低为28.89%。表明北疆地区普遍存在猪伪狂犬病病毒野毒感染,且感染率处于较高水平。 相似文献
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为了解广西某猪场猪瘟（CSF）、口蹄疫（FMD）、猪伪狂犬病（PR）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）、猪细小病毒病（PPI）及猪乙型脑炎（JE）7种主要病毒性疫病的抗体水平及感染情况,本研究采集155份商品猪和种猪的血清,利用阻断ELISA和间接ELISA方法进行抗体水平检测。结果显示：猪群猪瘟病毒（CSFV）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、猪伪狂犬病病毒gB蛋白（PRV-gB）、猪伪狂犬病病毒gE蛋白（PRV-gE）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）、日本乙型脑炎病毒（JEV）的平均抗体阳性率分别为90.3%、81.3%、96.8%、0%、52.3%、76.1%、84.5%、69.7%,表明该猪场CSFV、FMDV-O、PRV、PCV2、PPV免疫效果较好,达到了农业农村部规定的标准（70%）;PRV-gE抗体阳性个体总数为0,表明无伪狂犬野毒感染。从各阶段猪群的抗体阳性率分析,商品猪存在PRRSV、PPV、JEV野毒感染,其中PPV野毒感染较为严重,提示该猪场应加强商品猪PRRSV、PPV和J... 相似文献
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利用猪细小病毒IgG抗体检测ELISA试剂盒对某猪场妊娠母猪的38份血清进行检测。结果表明,该样本中34份血清为阳性,3份假阳性,1份阴性,阳性率达到89.5%。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(21)
为了获得具有良好免疫学活性的猪细小病毒(PPV)基因工程抗原,试验采用原核表达方法对猪细小病毒NS1蛋白进行了表达研究。结果表明:成功克隆了大小为1 389 bp的NS1基因主要抗原区域,经IPTG诱导获得了大小为60 ku、以包涵体形式表达的重组蛋白。利用6×His-Tagged Protein Purification Kit获得了高纯度的纯化蛋白,纯化蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应,以纯化蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法与血凝抑制试验(HI)的符合率为97.92%。说明试验成功获得了体外表达的NS1重组蛋白,且重组蛋白具有良好的免疫学活性。 相似文献
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本研究通过采用猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒,对河北、山西两地共441份猪血清样品进行检测发现：河北保定地区349份血清样品中阳性样品为306份,感染率为87.68%;山西地区92份血清样品中阳性样品为77份,感染率为83.7%。与标准的间接免疫荧光检测法进行比较,发现相对于标准IFA,该ELISA检测试剂盒的诊断敏感性为95.48%(383/398),诊断特异性为93.02%(40/43),总符合率为95.24%。由此表明该试剂盒是一种简便、快速、灵敏、适于大规模临床应用的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒。 相似文献