植物新基因克隆策略和技术进展     

梁锦锋  于红卫  叶国平 《安徽农业科学》2007,35(23):7112-7114

对基于表达序列标签(EST)的基因克隆、基于同源序列的候选基因法、基因图位克隆、基因转座子标签技术和差异表达基因分离技术等植物新基因克隆策略和技术进行了总结,并对其优缺点进行了简要介绍。  相似文献   

基于表达序列标签（EST）的基因克隆和基因表达分析研究进展   总被引：7，自引：0，他引：7  

杨克强  王跃进  张今今 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2002,30(4):141-145

表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)是在生物体特定时空表达基因的一段 c DNA序列。随着生物信息学的发展 ,EST已成为基因定位、基因克隆、基因表达分析的有力工具。文章对应用 EST克隆基因和分析基因表达的研究进展进行了综述 ,并讨论了利用 EST进行基因克隆和表达分析时应注意的问题和发展趋势  相似文献   

植物基因分离方法及其评述   总被引：2，自引：0，他引：2  

江树业  方宣钧 《福建农业大学学报(自然科学版)》2000,29(3):261-268

总结了上前植物基因分离的方法及其成就,概括出６种植物基因分离的方法,即序列克隆法、功能克隆法、从子标签法、图谱分离法、消减杂交法和差异表达分析法（ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ、ＤＤ－ＰＣＲ、ＰＤＡ和ＳＳＨ）,并对其特点和适用范围进行了评述。  相似文献   

一种基于表达序列标签（EST）的新型目标分子标记技术——保守区域扩增多态性（CoRAP）     

熊发前  唐荣华  庄伟建  蒋菁  钟瑞春  韩柱强  贺梁琼  李忠 《广西农业科学》2010,41(2):100-103

CoRAP分子标记技术是一种基于表达序列标签的目标分子标记新技术,具有操作简单、重复性高和特异性强等优点。该分子标记的原理是：根据表达序列标签来设计1个固定引物,根据大多数内含子内部的一段保守序列设计另1个随机引物,在退火温度为52℃的常规3步法PCR程序下,扩增产生偏向表达序列标签附近区域的显性或共显性标记。该分子标记可以作为SRAP、TRAP标记有效补充的目标分子标记新技术,在生物多样性分析、遗传图谱构建、重要性状基因标记、QTL定位及分子标记辅助育种等方面均有较大的应用潜力。  相似文献   

表达序列标签(EST)及其在抗孢囊线虫大豆研究中的应用     

毕影东  郭东林  杨冬鹤  徐香玲  李集临  王晓萍  柏永军 《黑龙江农业科学》2006,(3):90-94

表达序列标签(expressed sequence tags,EST)是一种快捷、高效地揭示基因组信息的方法.本文对EST概念、技术原理及其在基因组研究中的应用和进展等方面内容进行了综述,并对EST在大豆基因组研究和抗孢囊线虫大豆研究中的应用进展作一介绍.  相似文献   

表达序列标签(EST)分析及藻类EST文库的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈卓  刘杰  钱万强  孙杰  沈继红  林学政  王能飞 《安徽农业科学》2009,37(5):1934-1936

随着生物信息学的发展,表达序列标签（EST）在基因组作图、克隆基因、新基因的识别、蛋白质组研究等方面具有重要作用。笔者简要介绍了EST技术的原理及其在构建遗传图谱、分离与鉴定新基因等方面的应用。综述了藻类EST文库的研究现状,并对EST的应用前景进行了展望。  相似文献   

EST技术及其应用综述     

于凤池 《勤云标准版测试》2005,(2)

 EST (Expressed Sequence Tag，EST)指的是一组cDNA的部分序列，一般长度为150~500bp，是由大规模随机挑取的cDNA克隆测序得到的组织或细胞基因组的表达序列标签。一个EST代表生物某一时期的某种组织或细胞的一个表达基因。主要综述了EST技术的原理方法以及EST技术在构建遗传学图谱、分离与鉴定新基因、基因表达谱的研究、比较基因组学的研究和制备DNA芯片等方面的应用。  相似文献   

基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备     

贾宾  陈慧心  韩莹倩  郭玉堃  邵科宇  郭豫杰 《江西农业学报》2019,(3)

利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。  相似文献   

表达序列标签研究进展及其在甲壳动物中的应用概况     

齐景斌  赵大显 《湖北农业科学》2012,(1):1-4

随着生物信息学的发展,表达序列标签(EST)在分子标记开发、新基因分离鉴定、基因表达谱分析、基因组功能注释、基因电子克隆等方面具有重要作用。简要介绍了EST分析的原理及其在基因识别、基因预测、物理图谱的构建、DNA芯片制备等方面的应用概况。综述了甲壳动物EST的研究现状,并对EST的应用前景进行了展望。  相似文献   

基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备     

《江西农业学报》2022,(3)

利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。  相似文献   

高等植物基因克隆的策略     

洪林  程昌凤  魏文辉  陈霞  谭平 《浙江农业学报》2013,25(4):0

基因克隆是进行植物基因功能研究的先决条件。随着拟南芥、水稻、杨树等植物全基因组序列的公布,标志着基因组进入后基因组研究时代是分子生物学发展的必然趋势,同时为进一步克隆植物中控制重要性状的主效基因提供强大的基因组数据支撑。目前有较多的基因克隆传统及衍生技术,文章综述了图位克隆、同源克隆、转座子标记法、表达序列标签法、差异表达基因克隆等5种应用比较广泛的基因克隆技术,并就其发展方向和策略作了展望。  相似文献   

mRNA差异显示技术及其在植物生理研究中的应用     

王西平  刘振中  秦宝福 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2000,28(6):197-202

简述了 m RNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应用 ,并对其在植物生理研究中存在的问题与改进的方法做了介绍  相似文献   

拟南芥抗病基因克隆的策略及利用   总被引：2，自引：0，他引：2  

瓮巧云  邢继红  董金皋 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2005,33(Z1):220-224

生物技术的快速发展为植物抗病基因的克隆奠定了坚实的基础。克隆抗病基因不但有利于深入研究植物与病原物的分子互作机理,而且为植物重要病害的防治提供了有效措施。迄今为止,在拟南芥中已经克隆了十几个抗病基因。对拟南芥抗病基因的种类和特性、克隆策略以及克隆抗病基因的应用前景进行了综述。详细介绍了定位克隆技术和转座子标签技术的原理及其在拟南芥抗病基因克隆中的应用。  相似文献   

应用T-DNA标签进行基因功能分析的步骤和方法     

侯雷平  李梅兰 《黑龙江农业科学》2008,(4):14-16

概述了应用T-DNA标签进行基因功能分析的步骤及获得突变体后标签基因的分离方法,对应用T-DNA标签进行基因功能分析研究具有一定的参考价值。  相似文献   

植物基因分离方法及其评述     

江树业  陈启锋  方宣钧  李维明  吴为人 《福建农林大学学报(自然科学版)》2000,29(3):261-268

总结了目前植物基因分离的方法及其成就 ,概括出 6种植物基因分离的方法 ,即序列克隆法、功能克隆法、转座子标签法、图谱分离法、消减杂交法和差异表达分析法 (c DNA- RAPD、DD- PCR、RDA和 SSH) ,并对其特点和适用范围进行了评述 .  相似文献   

水稻线粒体基因组水平上的蛋白质编码基因克隆方法研究     

杨晓坡  刘冰  唐云轩  金雨熙  石珍  杜晓丽  宋丽  申玉华 《黑龙江农业科学》2014,(12):9-14

为探索适用于水稻线粒体基因的克隆方法,以水稻线粒体基因ccmB、nad9为例,分别选用3种不同的方法进行克隆。在对水稻线粒体基因组蛋白质编码基因进行比对分析的基础上,探讨了各种克隆方法的优劣及适用范围。结果表明:常规方法适用于Ⅰ类水稻线粒体基因的克隆,RT-PCR法适用于Ⅱ类水稻线粒体基因的克隆,简易方法只适用于Ⅲ类水稻线粒体基因的克隆。  相似文献   

延边黄牛白细胞介素2的基因克隆和序列分析     

汪岩  安尚泽  王智航  姜贺  李洪龙 《延边大学农学学报》2011,33(4):248-251

为建立延边黄牛白细胞介素2（IL-2）的基因克隆和序列分析的合理方法体系进行该研究．采集1月龄犊牛静脉血,用密度梯度离心法获取白细胞层,对白细胞进行总RNA的提取,并构建cDNA文库,根据Genbank牛IL-2基因序列（登录号：M12791．1）设计1对特异性引物,用反转录PCR（RT-PCR）技术扩增出目的基因片段,与克隆载体PMD18-T连接,并进行PCR和酶切鉴定,酶切结果为阳性的进行序列分析．结果表明：PCR扩增出大小为261bp的部分IL-2基因片断,与预期的片段大小一致;此序列与Genbank上牛IL-2从141～401bp片段的同源性为100％．  相似文献   

香猪ATGL基因的克隆、验证及其在不同猪品种的编码区序列比较     

杨勇  马长伟  赵春江  吴常信 《四川农业大学学报》2011,29(2):253-259

ATGL基因是近年来发现的一个新基因,其表达产物脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)被证明是催化三酰基甘油水解第一步反应的限速酶.本研究采用电子克隆和RT-PCR的方法克隆并验证了贵州小香猪ATGL基因的cDNA序列.克隆的香猪ATGL基因其cDNA序列全长2 102 bp,其中编码区1 461 bp,编码486个氨基酸.通...  相似文献