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1.
应用焦磷酸测序鉴定马铃薯感染的马铃薯Y病毒株系 总被引：2，自引：2，他引：0
为了检验是否可以通过焦磷酸测序法进行短序列测序,来鉴别马铃薯Y病毒(PVY)株系,从NCBI库中选取了代表9个PVY株系的全基因组序列30个,通过比对P1和CP蛋白的氨基酸序列,分别找出一个差异区段,针对这2个区域设计了反转录引物、PCR引物和测序引物。分别从黑龙江省克山县和讷河市各采集了一份马铃薯病叶样品,通过提取总RNA,反转录,再进行PCR扩增获得扩增产物,并对扩增产物进行了焦磷酸测序。测序结果显示,尽管两份马铃薯病叶症状不同,但均感染了PVY(N-Wi株系)(PVYN-Wi)。上述研究表明,利用本试验设计的引物,通过焦磷酸测序法进行短序列测序,可以鉴定马铃薯感染的PVY株系。 相似文献
2.
马铃薯Y病毒株系分类及中国大田马铃薯感染的马铃薯Y病毒株系谱研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
为了更科学、合理地检测、检疫马铃薯Y病毒(PVY)株系,和全面掌握侵染中国大田马铃薯的PVY株系情况,总结了PVY株系的分类方法,分析了中国大田马铃薯感染的PVY株系谱。认为目前广泛使用的血清型划分法、基因组重组与否划分法、PTNRD效应划分法、过敏反应互作基因划分法,以及Singh等提出的株系群划分法都无法对PVY株系予以完全合理的划分。提出有必要鉴定PVY基因组中决定马铃薯病理效应的基序并通过对基序测序来鉴定PVY株系,通过对株系间基因组差异区段的短序列测序来鉴定PVY株系是目前最接近基序测序分类法的思路。指出感染中国大田马铃薯的PVY目前有PVYO、PVYN、PVYNTN、PVYN:O、PVYN-Wi和PVYNW这6种株系,隶属于2个株系群PVYO和PVYN,其中PVYN株系和PVYN株系群病样占绝大多数,以非重组株系为主,但重组株系已占一定比例,其发展趋势值得关注。 相似文献
3.
马铃薯Y病毒siRNA介导抗病基因工程研究进展 总被引：1，自引：1，他引：0
马铃薯病毒病是危害马铃薯生产的重要因素,尤其马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)严重影响马铃薯产量和品质,为防治带来很大困难。近年来,通过基因工程技术培育抗病毒转基因植株为抵抗PVY侵染提供有效途径。简述了目前PVY病毒siRNA介导抗病基因工程的主要方法策略,包括PVY不同功能基因介导的病毒抗性差异、影响PVY抗病毒基因工程效率的主要因素以及PVY不同株系联合抗病基因工程研究概况,分析了这些方法存在问题及发展趋势,旨在为更好地控制PVY危害提供借鉴。 相似文献
4.
《分子植物育种》2017,(2)
马铃薯Y病毒(PVY)是危害烟叶生产的主要病害之一。已有研究表明,烟草对PVY的抗性由隐性抗性基因e IF4E-6控制。本研究利用CRISPR-Cas9技术定向敲除烟草e IF4E-6基因以改良优质烤烟品种K326的PVY抗性。我们构建了2个特异靶向e IF4E-6基因的CRISPR-Cas9载体g1和g2。构建的载体转化烟草品种K326,PCR检测潮霉素B抗性标签鉴定阳性T0代转基因烟草。PCR扩增阳性转基因烟株靶位点周围DNA序列,对PCR产物进行直接测序或克隆测序,筛选自靶位点处发生突变的烟株,得到2个载体各约50株阳性转化T0代烟株。序列分析结果表明,有2株g1载体转化的烟株在靶位点处出现杂合型单碱基缺失,分别有3和4株g1和g2载体转化的烟株在靶位点处出现杂合型1~2个碱基的替换。这些目的基因杂合型突变的T0代烟株为后续自交获得目的基因纯合敲除后代材料并最终获得PVY抗性改良的烟草提供了研究基础。 相似文献
5.
马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)对马铃薯生产影响较大,不同区域内PVX存在多样性和株系差异。本研究通过指示植物法和分子生物学鉴定法,从宁夏隆德县区域内的感病马铃薯上分离到一株马铃薯X病毒(PVX-NX1)。利用RT-PCR技术,克隆该病毒的外壳蛋白(CP)基因,序列分析结果表明,CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基,与已报道CP基因的核苷酸序列同源性为72.42%~97.34%,氨基酸序列同源性为91.53%~100%。其中,与荷兰分离物X3(属PVX的X3株系)、中国新疆的核苷酸序列同源性分别为96.36%、97.34%,氨基酸同源性均为100%。初步确定PVX-NX1属PVX的X3株系。 相似文献
6.
《华北农学报》2021,36(3)
为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和PSTVd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物双元表达载体pCAMBIA1300-221,构建植物表达载体p1300-221-pre-amiR-P25-HCPro-Virp1,经PCR及酶切验证,表达载体构建正确。农杆菌介导法将含目的基因质粒菌液侵染马铃薯品种费乌瑞它脱毒微型薯片,经再生、压力筛选,抗性植株分化及植株壮苗共获得转化株系15株,PCR检测结果表明,其中10株检测到与目的基因大小一致的片段(729 bp)。qRT-PCR结果显示,外源amiR-P25-HCPro-Virp1基因在10个转化植株中均有表达,相对表达量在7.68～21.37。对T_0阳性转化植株的攻毒试验,将PVX、PVY和PSTVd病毒等量混合液摩擦接种至6～8叶期的植株叶片,20 d后观察发现,对照植株感病严重,出现植株矮小、叶片斑驳等症状,而转化植株未表现出感病症状,生长正常。RT-PCR进行病毒特异性检测,结果显示,转化植株中也未检测到病毒序列,这表明转amiR-P25-HCPro-Virp在转化植株中能稳定表达,转化植株能够兼抗PVX、PVY和PVSTd 3种病毒(类病毒)。得到了同时兼抗PVX、PVY和PVSTd转化植株,且抗性显著,为马铃薯抗病毒育种提供了新的遗传资源。 相似文献
7.
利用分子标记辅助选择将抗稻瘟病基因Pi-9(t)渗入水稻恢复系泸恢17 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究采用杂交和分子标记辅助选择技术,将亲本材料P2的水稻广谱高抗稻瘟病基因Pi-9(t)导入杂交水稻恢复系泸恢17,再利用抗稻瘟病基因Pi-9(t)的特异分子标记pB8检测该目的基因,获得68份携有Pi-9(t)基因型的回交株系。基因型鉴定表明株系WR1023、WR1043、WR1056和WR1062为均含有Pi-9(t)基因纯合的回交后代株系。表型分析表明WR1023和WR1056株系农业性状已稳定,且其株叶型、抗稻瘟病及配合力较好,我们认为可以用作育种抗性亲本材料。 相似文献
8.
转BADH基因苜蓿T-DNA侧翼序列分析及转化事件特异性分析 总被引：2，自引：1，他引：1
为了从分子水平上鉴别不同的转基因株系,以转BADH基因苜蓿的T0代基因组DNA为模版,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了B127株系的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株系的左翼序列。侧翼序列特征分析表明,有的T-DNA边界序列被删除,有的边界序列被保留,并填充了一段未知来源的核苷酸序列。根据侧翼序列中插入载体序列和紧邻插入序列的基因组序列特征,分别设计PCR扩增的上、下游引物,并对获得的42个转BADH株系分别进行左、右翼序列的扩增,结果表明,转基因植株B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305和B127具有相同的扩增条带,B203、B220、B223和B196具有相同的扩增条带,说明这些株系可能仅来源于2个转化事件。本研究建立的事件特异性检测方法可以准确地将不同的转化株系区别开来。 相似文献
9.
OsHOX4基因是属于水稻植物同源结构域(HD-Zip)转录因子家族的一个成员。本研究利用农杆菌介导法将OsHOX4基因转入籼稻(Oryza sativa ssp.indica)IR64中,获得54株过量表达植株。我们利用southern杂交分析确定了各个株系的拷贝数后,利用TAIL-PCR方法对4个不同的单拷贝株系进行了研究,并在其中找出T-DNA在3个单拷贝株系染色体上的插入位点(分别为染色体5,8,10)。根据T-DNA在各个株系的插入位点分别设计特异性引物,从T1代转基因株系里鉴定出纯合的植株。我们观察到OsHOX4过量表达植株的分蘖数明显高于野生型,株高比野生型明显的变矮,在同一个株系的纯合和杂合的转基因植株表型也有很大的差异。在TAIL-PCR分析基础上,为从T1代转基因作物中鉴定出纯合的植株提供了方法和理论依据。 相似文献
10.
《分子植物育种》2017,(7)
本研究采集健康马铃薯块茎和被PVY侵染的马铃薯块茎为材料,选取马铃薯RCCR基因和LSD1基因为目标基因。首先提取总RNA后通过反转录PCR(RT-PCR)、琼脂糖凝胶电泳,证明RCCR基因和LSD1基因成功获得,然后进行荧光定量PCR(qPCR)测定在PVY侵染的马铃薯块茎中RCCR基因和LSD1基因的相对表达量,最后又进行了目标基因编码蛋白的结构分析。结果表明,这2个基因的相对表达量均有所下降,推测这2个基因与马铃薯块茎细胞坏死相关,为之后研究PVY引起马铃薯块茎细胞坏死的相关分子机制做了前期探索,为今后的分子育种和抗病药物筛选提供了可选的靶点。 相似文献
11.
12.
Summary
C. annuum L. ‘Serrano Criollo de Morelos-334’ (SCM-334) is a well-known source of resistance against pepper diseases, including Potato Virus Y (PVY). In this work, inheritance studies involving ‘SCM-334’ and related to PVY resistance were described. For this purpose, ‘SCM-334’ derived lines were used, and plant material from the cross between ‘SCM-334’ and ‘Yolo Wonder’ (YW) was employed as well. Five PVY isolates were used for the inoculations. The first resistance described is a monogenic and recessive gene, controlling a specific-isolate resistance, and provisionally named as pvr1
4. The second one is related to the inheritance of systemic necrotic symptoms after PVY inoculation. In this case a codominant gene is proposed and expressed only when the Pvr4 gene is not present. 相似文献
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The Rysto gene from Solanum stoloniferum introduced into potato cultivars (Solanum tuberosum L. ssp. tuberosum) confers resistance to potato virus A, potato virus V and potato virus Y (PVY). In addition to PVY, tobacco etch virus (TEV) and a TEV construct that encodes β‐glucuronidase (TEV‐GUS) were inoculated to determine the inheritance of resistance to these viruses in progenies obtained from potato cultivars containing the Rysto gene. While cultivars ‘Karlena’ and ‘Delikat’ were susceptible, ‘Bettina’ and clone 927eY were resistant to PVY, TEV and TEV‐GUS, as determined by enzyme linked immunosorbent assay, biotest and GUS assay, respectively. The segregation ratios obtained from the progenies of ‘Bettina’בDelikat’ and 816eY בKarlena’ indicate that resistances to PVY and TEV are governed by one dominant gene or two genes tightly linked in coupling phase. Evidently, Rysto confers broad spectrum resistance to potyviruses. TEV resistance could be reliably detected 4 days after inoculation with the TEV‐GUS construct by GUS assay. Therefore, the GUS‐tagged TEV construct can be used for early selection for resistances based on the gene Rysto or closely linked genes. 相似文献
14.
Tobacco transgenic lines belonging to four cultivars modified with three genetic constructions providing the resistance to
Potato virus Y (PVY) had been described as regards their agronomic and biological traits. The constructions included viral genes: the coat
protein gene of Lettuce mosaic virus (LMV) and the replicase gene of PVY used in sense and antisense orientation. Evaluation of the chosen farm traits of the
transgenic tobacco lines was performed by comparing them with their nontransgenic equivalents. The traits such as growth and
development rate, height of stalks, leaf area, morphology of plants, course of meiosis and pollen viability were described.
The cured leaves were analysed as regards to their physical traits and chemical composition. The individual transgenic lines
differed from control cultivars to a little extent. Only insignificant changes, mainly in the quality of raw material were
observed. Genetic modification did not cause any changes in the course of meiosis and pollen viability. 相似文献
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Genetic analysis of broad spectrum resistance to potyviruses using doubled haploid lines of pepper (Capsicum annuum L.) 总被引：4，自引：0，他引：4
Catherine Dogimont Alain Palloix Anne-Marie Daubze Georges Marchoux Kashay Gebre Selassie E. Pochard 《Euphytica》1996,88(3):231-239
Summary Genetic analysis of resistance to PVY in androgenetic doubled haploid lines, F1, F2 and backcross progenies of the Mexican pepper line, CM 334 (Capsicum annuum L.), was performed. Three reaction types were observed when seedlings were inoculated with several PVY strains of different pathotypes and with an American PeMV strain. Resistant genotypes never showed systemic symptoms although some individuals sporadically developed necrotic local lesions on inoculated cotyledons. Susceptible genotypes exhibited either a typical systemic mosaic or a systemic necrosis that caused the death of the inoculated seedlings. Segregation analyses indicated that resistance to pepper potyviruses in CM 334 is conferred by two genes. The first one, tentatively named Pr4, is dominant and confers the resistance to all now known pathotypes of PVY and to PeMV. The second one, tentatively named pr5, is recessive; it confers only the resistance to common strains of PVY. The systemic necrotic response is conferred by an independent dominant gene, tentatively named Pn1. 相似文献
16.
根据已报道的甘薯病毒G(Sweet Potato Virus G ,SPVG)外壳蛋白（CP）基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR方法克隆了SPVG河南分离物（SPVG-HN）的CP基因,序列分析表明,SPVG-HN CP基因由1065个核苷酸组成（GenBank登录号为DQ399861）,编码355个氨基酸残基。与GenBank中Egypt1(AJ515380)、LSU-1(AY178991)和LSU-3(AY178990)分离物的核苷酸序列相似性为98%左右,与中国广东分离物SPVG-CH（X76944）和SPVG-CH2（Z83314）的相似性分别为98.1%和85.5%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a（+）上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导, CP基因在大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPVG外壳蛋白的特异性抗血清。间接ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甘薯样品的检测。 相似文献
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番茄斑萎病毒病(Tomato spotted wilt virus, TSWV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是云南烟草生产上的主要病毒病,本研究旨在筛选有效的药剂防控烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病,从而减少烟草经济损失。通过小区试验,分别研究了1%香菇多糖水剂、3%超敏蛋白微粒剂、5%氨基寡糖素水剂和2%嘧肽霉素水剂对田间烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病的防治效果。结果表明：试验所选的4种病毒抑制剂对烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病均具有一定的防控作用,1%香菇多糖、3%超敏蛋白、5%氨基寡糖素和2%嘧肽霉素对烟草TSWV的防治效果分别为：31.11%~39.90%、54.34%~59.91%、8.69%~38.21%和22.75%~43.32%,4种药剂对烟草PVY的防治效果分别为55.08%~71.06%、68.10%~82.24%、37.76%~55.36%和58.07%~68.86%,其中,3%超敏蛋白的防效最好,其烟草TSWV和PVY防治效果分别高于50%和60%,其次是2%嘧肽霉素,对烟草TSWV和PVY防治效果分别高于22%和58%。防治烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病以3%超敏蛋白微粒剂的防治效果最佳,其次是2%嘧肽霉素水剂。 相似文献
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草莓轻型黄边病毒CP基因的克隆、序列分析及原核表达 总被引：2，自引：0，他引：2
克隆草莓轻型黄边病毒CP基因,并构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达CP蛋白。利用SMYEV的检测引物,通过RT-PCR技术筛选带SMYEV的草莓植株;根据NCBI中SMYEV序列设计扩增CP基因全长引物,通过RT-PCR获得SMYEV沈阳分离物CP基因全长序列;将CP基因克隆到原核表达pGEX-6P-1上,利用IPTG诱导CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达蛋白。利用RT-PCR扩增获得SMYEV分离物SY05的CP基因全长序列,由729个核苷酸组成,编码242个氨基酸残基。SY05与其他SMYEV分离物的核苷酸同源性为80.1%～97.4%,氨基酸同源性为92.1%～99.6%,其中,与SMYEV分离物SY03的氨基酸一致性为98.3%。将SY05的CP基因成功克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建了重组表达载体p6P-EV-CP,并将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导SMYEV分离物SY05的CP基因在大肠杆菌中表达出分子量为52.0 kDa的融合蛋白。克隆出SMYEV分离物SY05的CP基因,实现了其在原核细胞中的表达,为SMYEV抗血清的制备奠定了重要基础。 相似文献