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1.
猪流行性腹泻病毒S1蛋白在干酪乳杆菌中的分泌表达及免疫原性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
将猪流行性腹泻病毒(PEDV)纤突蛋白S1基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体pPG-2中,构建了重组表达载体pPG-s1,将其电转化干酪乳杆菌L.casei 393,获得了表达PEDV S1蛋白的重组乳酸茵杆菌.重组杆菌诱导后,经western blot、间接ELISA实验表明,目的蛋白获得了分泌表达.将该重组干酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后于不同时间分别测定了粪便中特异性的sIgA和血清中IgG;用MTT法检测免疫小鼠细胞脾淋巴细胞增殖情况.结果表明该重组干酪乳杆茵表达系统能刺激动物黏膜免疫应答和系统免疫应答,在肠道可产生分泌型Iga抗体,并可检测到高水平血清IgG;不仅能诱导体液免疫反应,还可诱导细胞免疫应答.表明所构建的重组干酪乳杆茵表达系统作为口服疫苗具有潜在的应用价值,为探索新型猪流行性腹泻口服疫苗的研制奠定了基础. 相似文献
2.
对比分析在不同细胞部位表达猪细小病毒（PPV）主要免疫保护性抗原VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统作为口服疫苗的免疫效果。将构建的细胞表面表达和分泌表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌分别经口免疫BALB／c小鼠，免疫分3次进行，时间间隔为2周，每次连续接种3d，每只小鼠每次接种100μL10^10CFU／mL的菌量，对照组小鼠接种相同剂量的PBS。初免后不同时间收集免疫小鼠粪便及肠黏液样本测定小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体水平，采集小鼠血液样本测定其血清中抗PPV的特异性IgG抗体水平。间接ELISA检测结果表明，两种表达系统均能诱导小鼠产生黏膜及系统免疫应答，分泌型的重组菌系统免疫小鼠诱导机体产生的抗PPV的特异性sIgA和IgG抗体水平高于细胞表面表达型的重组菌系统的免疫效果，表明分泌型的重组乳酸菌作为活菌疫苗具有更好的免疫性。 相似文献
3.
为探究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白重组乳酸菌对小鼠免疫应答情况,本研究将IBV CH/LN/2019毒株的S1基因进行密码子优化,构建重组质粒pNZ8149-S1,电转至乳酸乳球菌NZ3900中,应用Western blot及间接免疫荧光试验评价重组乳酸乳球菌表达水平,免疫SPF小鼠,通过间接ELISA方法分析小鼠特异性抗体、CD4+、CD8+和细胞因子(IL-4和IFN-γ)分泌情况;结果显示,成功构建重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900并表达目的蛋白;小鼠免疫试验结果显示,免疫组小鼠IgG抗体水平均高于pNZ8149/NZ3900、NZ3900和PBS组(P<0.05);特异性sIgA抗体水平显著高于对照组(P<0.01);此外,重组乳酸乳球菌能诱导小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ(P<0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900可以有效刺激小鼠机体产生体液免疫和细胞免疫,为IBV新型口服疫苗的研制提供了理论参考。 相似文献
4.
为研究玉屏风多糖对肠黏膜免疫应答和免疫损伤的调控作用,本试验以黄芪多糖为对照药物,以正常小鼠和免疫抑制小鼠为动物模型,150只SPF小鼠随机分为空白对照组、环磷酰胺免疫抑制对照组、玉屏风多糖治疗组、玉屏风多糖阳性对照组和黄芪多糖对照组,每组30只。多糖剂量为200mg/Kg/d,连续灌服7d,环磷酰胺剂量为80mg/Kg,隔日腹腔注射。检测SIgA、IL-2、TGF-β1和IL-6以及小肠黏膜相关淋巴组织的变化。结果发现,玉屏风多糖和黄芪多糖均可显著提高小鼠SIgA、IL-2、TGF-β1和IL-6水平(P<0.05或P<0.01),小鼠肠上皮细胞增生,杯状细胞增多,肠绒毛长度、宽度和隐窝深度均显著增加(P<0.05或P<0.01),肠上皮细胞间淋巴细胞和黏膜固有层淋巴细胞数量明显增多(P<0.05或P<0.01),PP结体积增大,淋巴细胞增生。与黄芪多糖比较,玉屏风多糖对肠黏膜免疫应答的正向调节作用更为明显。对免疫抑制小鼠,玉屏风多糖可有效拮抗环磷酰胺诱导的SIgA降低(P<0.05),并可通过调节TGF-β1(P<0.05)和IL-6(P<0.01)水平,调控Th1/Th2 漂移状态,缓解环磷酰胺所致的免疫损伤,对免疫抑制小鼠小肠黏膜相关淋巴组织也有明显的保护和恢复作用。结果表明,玉屏风多糖可从多方面调控小鼠肠黏膜的免疫应答,可有效增强肠黏膜免疫功能,缓解和改善免疫抑制小鼠肠黏膜免疫屏障的损伤。 相似文献
5.
表达猪圆环病毒2型cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌在小鼠诱导的免疫应答分析 总被引：1，自引：1，他引：0
旨在构建表达猪圆环病毒2型（PCV2）cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌（Lactobacillus reuteri,L.reuteri）,并评价其在小鼠体内诱导的免疫应答效果。利用PCR扩增实验室分离保存的PCV2b型毒株的cap蛋白基因,以猪源L.reuteri为宿主菌,构建表达cap蛋白的重组菌株pPG-T7 g10-PPT-cap/L.reuteri,通过口服免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA方法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平,粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中抗原特异性sIgA抗体水平,小鼠血清中各细胞因子水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平;流式细胞技术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞的水平;荧光定量PCR检测免疫后攻毒的小鼠体内器官的病毒载量。结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中sIgA抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠血清中细胞因子水平和对照组相比,IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平升高,IL-10水平降低,IFN-α无显著变化;体外孵育PCV2和小鼠脾淋巴细胞结果表明,重组乳酸菌组小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组（P<0.01）;流式细胞技术检测结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠脾细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞含量高于对照组;荧光定量PCR结果显示,相比于对照组,口服免疫重组乳酸菌组小鼠体内的病毒载量明显低于对照组。综上所述,本研究成功构建了表达PCV2 cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌,经口服途径免疫动物,构建的重组乳酸杆菌能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且具有一定的免疫保护效果。 相似文献
6.
《中国兽医杂志》2015,(1)
重组乳酸乳球菌分别经鼻腔和口腔免疫小鼠后,免疫后的测定时间内鼻腔免疫方法刺激呼吸道和肠道产生s-Ig A水平高于口服免疫方法,且肺泡冲洗液中s-Ig A水平差异极显著(P0.01),肠道黏膜s-Ig A水平无显著差异(P0.05);血清中Ig G抗体水平两种免疫方法均无显著差异(P0.05),但鼻腔免疫组抗体水平在最后一次免疫后7 d达到最高,在整个测定时间内维持在高水平,口服免疫组抗体水平在最后一次免疫后21 d达到最高水平,然后迅速下降;h1型细胞因子IL-2和IFN-γ水平滴鼻免疫组高于口服免疫试验组,差异不显著(P0.05),Th2型细胞因子IL-4水平在各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌分别经鼻腔及口腔免疫小鼠后,能诱导机体产生黏膜免疫系统的体液免疫及Th1型细胞免疫反应,且滴鼻免疫方法优于口服免疫方法,为传染病的预防控制提供了新的免疫策略。 相似文献
7.
《中国预防兽医学报》2015,(12)
为评价19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组卡介苗对小鼠的免疫效果,本研究将已构建的rBCG/19ku-E_2、rBCG/E_2、rBCG/pMV261(pMV261空载体构建的rBCG作为实验对照组)、卡介苗(BCG)及BVDV灭活苗免疫小鼠,通过检测血清抗体效价、T淋巴细胞亚群含量及细胞因子水平,评价其体液免疫与细胞免疫效果。结果显示,rBCG/19ku-E_2可以引起BVDV特异性抗体的产生,并且抗体水平要高于rBCG/E_2、rBCG/pMV261组。对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群含量的检测结果表明,rBCG免疫小鼠对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群没有显著影响。通过对IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ细胞因子检测结果表明,rBCG主要诱导Th1型细胞免疫应答,rBCG/19ku-E_2诱导的细胞因子水平低于BCG免疫组,但均高于细胞因子的平均水平。结果表明,rBCG/19ku-E_2可以诱导小鼠产生较好的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,为BVDV新型疫苗研究奠定基础。 相似文献
8.
9.
以融合表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)和OVA、LCMV NP CD8~ T细胞表位的重组减毒沙门菌SL7207(ptG2F)为免疫原,经口服途径接种BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,分别于第2次、第3次、第4次、第5次免疫后,以ELISPOT法分别测定免疫小鼠派伊尔氏结细胞中特异性针对OVA和LCMV NP CD8~ T细胞表位的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用ELISA分别检测血清、肠黏膜中的GFP特异性抗体,分析了口服重组减毒沙门菌诱导的特异性免疫应答动态规律。实验表明SL7207(ptG2F)口服免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了LCMV NP CD8~ T细胞表位(H-2~d)特异的细胞免疫应答。在第2次免疫后,即可检测到特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞;在第3次免疫后,IFN-γ分泌细胞数量明显高于IL-4分泌细胞数。然而,在第4、5次免疫后,IFN-γ分泌细胞数和IL-4分泌细胞数相当,未见明显变化。试验中未能检测到针对OVA CD8~ T细胞表位(H-2~b)的细胞免疫应答。运用ELISA方法检测到SL7207(ptG2F)、SL7207(ptGFP)免疫组GFP特异性IgG和IgA抗体,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。结果表明重组减毒沙门菌口服免疫可以有效运送外源抗原至宿主免疫系统,并诱导产生特异性细胞免疫应答和黏膜免疫应答。 相似文献
10.
为研究传染性法氏囊病毒(IBDV)保护性抗原VP2与E.coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)在戊糖乳杆菌(L.pentosus)中的共表达及其免疫原性,本研究以乳酸杆菌表面表达型和分泌表达型质粒pPG-1和pPG-2为载体,以VP2为目的基因,构建VP2基因单独表达及与LTB基因融合表达的4种重组L.pentosus,分别命名为pPG-1-VP2/L.pentosus、pPG-1-VP2-LTB/L.pentosus、pPG-2-VP2/L.pentosus及pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus。表达的重组蛋白分子量大小分别约为47 ku、55 ku、45 ku及53ku。将构建的重组L.pentosus分别口服免疫SPF雏鸡,以IDEXX试剂盒测定体液免疫应答水平,结果显示,不同表达方式的重组L.pentosus均可以刺激机体产生特异性循环抗体和分泌抗体(sIgA),其中pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus诱导产生的抗体滴度高于其它组。MTT法检测不同表达方式的重组乳酸菌免疫雏鸡外周血淋巴细胞增殖反应,结果显示特异性抗原对免疫雏鸡淋巴细胞的增殖指数显著高于未免疫组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。这些结果表明4种重组菌均能够刺激机体产生局部黏膜免疫和全身系统免疫应答;并且带有黏膜免疫佐剂LTB融合表达试验组高于VP2蛋白单独表达组。 相似文献
11.
A 26-28 kDa protease was isolated from Fasciola gigantica adult worms by a two-stage purification process of column chromatography in a Sephacryl S-200 column and affinity chromatography in an L-phenylalanine-agarose column. This protease is a cysteine (thiol) proteinase with an optimum pH of 4.5 and is not inhibited by anti F. gigantica immunoglobulin G. The enzyme was inhibited by protease inhibitors known to inhibit cysteine proteases but not by metallo-, aspartate or serine protease inhibitors. The effect of several protease inhibitors and anti-F, gigantica IgG was also assessed on the total proteolytic activity of F. gigantica. There appears to be a preponderance of cysteine protease activity in F. gigantica and there was a significant inhibition of total proteolytic activity by anti-F. gigantica IgG. 相似文献
12.
为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。 相似文献
13.
Holly L. Jordan DVM Carol B. Grindem DVM PhD Edward B. Breitschwerdt DVM 《Journal of veterinary internal medicine / American College of Veterinary Internal Medicine》1993,7(5):261-265
The prevalence of feline thrombocytopenia (<200,000 platelets/L) at North Carolina State University, College of Veterinary Medicine Teaching Hospital, from January 1985 to March 1990, was 1.2% (41/3300). Cats were divided into six categories based on clinical diagnoses: 29% (12/41) had infectious disease, 20% (8/41) had neoplasia, 7% (3/41) had cardiac disease, 2% (1/41) had primary immune-mediated disease, 22% (9/41) had multiple diseases, and 20% (8/41) had disorders of unknown etiology. The mean platelet count for all thrombocytopenic cats was 52,000/μL ± 46,000/μL (1 SD) with a range of 1000–190,000/μL. No significant differences were found between groups with respect to platelet count, packed cell volume, or white blood cell count, though anemia and leukopenia were common among the cats as a whole. Bleeding disorders (hemorrhage or thrombosis) were observed in 29% (12/41) of thrombocytopenic cats and were more likely to be associated with neoplasia, cardiac disease, and platelet counts less than or equal to 30,000/μL. Disseminated intravascular coagulopathy was diagnosed in 12% (5/41) of the cats. Infections and/or neoplasia affecting the bone marrow were the most common diseases associated with thrombocytopenia. Feline leukemia virus and myeloproliferative neoplasia accounted for approximately 44% (18/41) of the specific diagnoses in thrombocytopenic cats. (Journal of Veterinary Internal Medicine 1993; 7:261–265. Copyright © 1993 by the American College of Veterinary Internal Medicine.) 相似文献
14.
由于传统显微注射法具有操作繁琐、技术要求高和外源基因导入率低等局限性,本试验对常规显微注射法进行改进,旨在建立一套比较完善的水平显微注射方法。采用水平微注射系统,将外源DNA片段导入胚胎的雄原核中,获得子代鼠,分娩后3周提取鼠尾基因组DNA,PCR法筛选转基因阳性鼠。本试验采用Puc/BLG IN S和Chym os in基因,共使用710枚鼠原核胚进行研究,胚胎经注射后移植了25只受体,产下仔鼠77只;妊娠率分别为33.3%(5/15)和50%(5/10),胚胎成活率分别为9.47%(41/433)和l3.00%(36/277),阳性率分别为4.88%(2/41)和8.33%(3/36)。将阳性雌鼠配种妊娠后,对外源基因整合情况进行检测,结果表明初步获得了转基因阳性小鼠。 相似文献
15.
Y Hara H Ejima S Aoki M Tagawa S Motoyoshi S Ikemoto 《Nippon juigaku zasshi. The Japanese journal of veterinary science》1990,52(3):543-549
A high titer of cytotoxic antibody against donor lymphocytes, tentatively designated as anti-F1, was found in one cat who received 3 times of skin allograft from the same donor. The anti-F1 antibody titer was 1:16, and the antibody activity was mostly detected in the IgG fraction. A cross-absorption test using erythrocytes from F1-positive animals revealed that the F1(+) antigen recognized by anti-F1 antibody was expressed on erythrocytes as well as lymphocytes. The frequencies of F1(+) and F1(-) types in 81 healthy cats, involving all the cats used for allo-immunization in the present study, were 30.9 and 69.1%, respectively. Moreover, F1 antigen was considered to be a hereditary antigen from family studies. 相似文献
16.
研究太子参参须提取物(RPFRE)对小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响。将40只雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、RPFRE低剂量组(100 mg/kg)、RPFRE中剂量组(200 mg/kg)和RPFRE高剂量组(400 mg/kg),给空白对照组小鼠灌胃蒸馏水,给RPFRE组小鼠分别灌胃相应剂量的RPFRE,连续2周。第15天,采集小鼠血液,检测血清抗氧化指标(T-AOC、SOD、MDA)和免疫指标(免疫球蛋白IgG、IgM、IgA及补体C3、C4)。结果显示,与对照组相比,RPFRE高剂量组小鼠IgG含量、低剂量组IgM含量、中剂量组补体C3含量均显著升高(P<0.05);3个剂量RPFRE组T-AOC极显著升高(P<0.01)。说明RPFRE能不同程度提高小鼠免疫功能和抗氧化功能。 相似文献
17.
T Shimada S Shikano K Ono A Saito N Suzuki 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》1992,54(6):1071-1075
Changes of splenic lymphocyte subpopulation after Babesia microti and Babesia rodhaini inoculation in mice were examined by flow cytometric analysis. The B. microti inoculated mice showed a longer period of time from inoculation to the onset of increase or decrease parasitaemia (%), packed cell volume, total spleen cell numbers and surface immunoglobulin positive splenic cell numbers than respective periods in B. rodhaini inoculated mice. The Thy-1 positive cell numbers in B. microti inoculated mice and B. rodhaini inoculated mice pre-immunized with homologous parasites were significantly higher than that of B. rodhaini inoculated mice. The ratio of L3T4 positive cell/Lyt-2 positive cell after inoculation with B. microti was quite similar to that in B. rodhaini mice pre-immunized. However, the ratio in B. rodhaini inoculated mice revealed a lack of an increasing phase. These results suggested that the T-cell dependent early immune response, especially suppressor activity, was closely related to the difference in the course of infection between the non-lethal B. microti and the lethal B. rodhaini infection in mice. 相似文献
18.
抗A型产气荚膜梭菌单克隆抗体的研制和鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验用NSo细胞和产气荚膜梭菌肠毒素免疫的BALB／C小鼠脾细胞融合，获得了2株能分泌抗A型产气荚膜梭菌肠毒索单克隆抗体的杂交瘤细胞。经鉴定．这2株杂交瘤细胞的平均染色体数目为96．8条，单抗亚类为IgG1，杂交瘤细胞培养上清及腹水单克隆抗体的效价均较高，而且与其他几种常见的毒素SE、LT、S—LT、产气荚膜梭菌α毒素等不存在交叉反应。1D5能完全中和NCTC8239、S020718所产生的CPE的生物学活性，而284的中和活性则较差。 相似文献
19.
利用H/L值分析鸡抗应激能力差异 总被引：1，自引：0，他引：1
通过H/L值的比较,对不同品种鸡的抗应激能力进行评价。随机抽取如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡各80只,分别检测了41、56、71和89日龄的异嗜性粒细胞(H)、淋巴细胞(L)及H/L值。结果表明:(1)在41、56日龄时,如皋鸡与文昌鸡、安卡鸡相比H、L及H/L值呈极显著差异(P<0.01);89日龄的H/L值在文昌鸡和安卡鸡之间呈极显著差异(P<0.01)。(2)如皋鸡在41日龄和71日龄间H、L及H/L值呈极显著差异(P<0.01),其余差异均不显著。文昌鸡H、L及H/L值在各日龄间变化较大,41和71日龄间呈显著差异(P<0.05),41和89日龄、56和71日龄以及56和89日龄间呈极显著差异(P<0.01)。安卡鸡各值只在56和89日龄间呈显著差异(P<0.05),其余差异均不显著。研究初步表明家禽的抗应激能力存在品种间差异,如皋鸡的抗应激能力优于安卡鸡,文昌鸡晚期表现出较好的抗应激能力,随着日龄的增加,品种之间的抗应激能力差异会减小。 相似文献