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1.
番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究 总被引：3，自引：1，他引：3
在ＴＭＶ外壳蛋白（ＣＰ）基因的５′和３′端分别合成寡聚核苷酸引物Ｐ１和Ｐ２，并分别引入ＣｌａＩ和ＢａｍＨＩ位点，采用ＰＣＲ技术扩增ＴＭＶＣＰ基因，用ＣｌａＩＢａｍＨＩ消化后重组到ｐＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔＫＳ＋中，并将该基因与ＣＭＶＣＰ基因重组在同一个表达载体ｐＥ３上获得双价ＣＰ基因表达载体ｐＥＴＣ２，转化番茄，获得再生植株。通过点杂交、ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，证实２、１２和１３号为转ＴＭＶ和ＣＭＶＣＰ基因的工程植株。工程植株在温室中表现正常，比对照植株表现出明显的抗性。 相似文献
2.
表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄及其对CMV的抗性 总被引：16，自引：0，他引：16
利用根瘤土壤杆菌Ｔｉ粒转化系统，采用叶盘法将ＣＭＶ－ｃｐ基因转入番茄细胞中，获得４２株转基因植株，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测，证明ＣＭＶ－ｃｐ基因已进入番茄核染色体中，并能正常表达。通过对转基因植株Ｒ１和Ｒ２代苗期人工接种ＣＭＶ鉴定，发现ＣＭＶ－ｃｐ基因产物对ＣＭＶ有一定抗性，其抗性遗传符合孟德尔－对基因控制性状的遗传规律并能稳定遗传。 相似文献
3.
双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析 总被引：5，自引：1，他引：4
通过对转ＴＭＶ和ＣＭＶ双价外壳蛋白基因番茄Ｔ１代群体和Ｔ２代株系进行ＰＣＲ及ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定，并分别进行温室及田间抗病毒试验，结果表明，Ｔ１代工程番茄植株中确有ＣＭＶ—ＴＭＶ双价外壳蛋白基因的遗传和分离，其遗传行为符合显性单基因的孟德尔遗传。Ｔ２代部分株系ＣＭＶ—ＴＭＶ双价ＣＰ基因已获得稳定遗传，共获得了３个遗传稳定的番茄株系。 相似文献
4.
本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ 相似文献
5.
转化CMV—cp基因番茄对CMV病毒抗性鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
苗期人工接种，对转化ＣＭＶ－ｃｐ基因的番茄品种８８０５Ｒ１－Ｒ４代进行接种ＣＭＶ病毒试验。结果表明：黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因在番茄中的表达，对抑制ＣＭＶ病毒症状的表现及延迟其发展均起到一定作用。８８０５Ｒ３代对ＣＭＶ的抗性明显高于Ｒ１代，Ｒ４代抗性已基本稳定。当高浓度的ＣＭＶ病毒侵染Ｒ４代植株时，也会出现１００％的发病率，但它们的新生枝叶能正常生长并开花结果。利用半叶法测定８８０５Ｒ４（ｃｐ＋）及 相似文献
6.
转ＴＣＳ基因番茄无性系ＴＰ３与其自交后代Ｒ１的种子苗在农艺性状上的表现无差异，Ｒ１代植株Ｘ－ｇｌｕ检测和ＰＣＲ扩增均呈阳性，同样对ＴＭＶ和ＣＭＶ表现出一定的抗病性，这说明转基因番茄无性系及其自交一代种子苗植株的ＴＣＳ基因是稳定表达的稳定遗传的，因此，除了经过种子获得种苗以外，通过无性繁殖转基因番茄可以直接进行田间种植及种苗的工厂化生产。 相似文献
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8.
本文重缚和构建了新城疫病毒（ＮＤＶ）融合蛋白基因,并对该基因进行了鉴定,将新城疫病毒Ｆ基因片段经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,插入经ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ酶切的克隆载体ｐＵＣ１８及表达载体ｐＧＥＭＥＸ,转化大肠杆菌ＪＭ１０９株,用氨苄青霉素平板法初步筛选克隆,再用双酶切法,核酸探针,ＰＣＲ及核苷酸序列分析法鉴定,表明插入成功并且阅读框架正确。 相似文献
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根据已报道的ＴＭＶＵ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）的序列设计了特异性引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从烟草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）上扩增移动蛋白（ＭＰ＿基因及其邻近序列,将比ＣＤＮＡ片段克隆于ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒上,进行测序分析,结果表明ＭＰ基因由８０７个核苷酸组成,编码２６８个氨基酸,与ＴＭＶ－Ｕ１的ＭＰ基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性的９９．０１和９８．８９％,与ＴＭＶ 相似文献
10.
RT-PCR和核酸探针在IBV检测中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
用ＰＣＲ和核酸探针杂交检测了３种毒株（Ｈ１２０株,Ｍ４１株,ＨＫ株）在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的ＩＢＶ．结果表明：在鸡胚中繁殖３种毒株ＩＢＶ（Ｈ１２０,ＨＫ,Ｍ４１）,ＰＣＲ最早检出时间为２０～２４ｈ,克隆探针最早检出时间为２４～３０ｈ;用克隆核酸探针检测人工感染鸡,１２ｈ后能从肾脏中检出病毒。对７只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和ＰＣＲ扩增,有５只均呈阳性反应。ＩＢＶ分离株ＨＫ株与标准株Ｍ４１株经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和ＨｉｎｄⅢ酶切及ＲＦＬＰ分析,表明其属同一马萨诸塞血清型。ＰＣＲ和核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测ＩＢＶ病毒及诊断ＩＢＶ的新方法,对ＩＢＶ的血清定型也有一定的实用价值。 相似文献
11.
以辣椒均一化cDNA文库为模板,通过特异性引物的PCR扩增,获得CaMAPK7全长cDNA序列,该序列含有1个370个氨基酸序列的开放阅读框,与拟南芥等其他植物具有84%-97%的氨基酸同源性。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在辣椒的根、茎和叶中均有不同程度的组成型表达,在根部的表达最高,在叶片中该基因的表达受到青枯菌侵染、高温等逆境及水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯等外源激素处理的诱导,但脱落酸处理使其表达下调。这些结果表明CaMAPK7可能在辣椒应答青枯病和高温等逆境胁迫中起着重要的作用。 相似文献
12.
本试验的目的是为了探明不同昼夜温差(DIF)对甜椒营养生长和生殖生长的影响.甜椒种植于两个独立的玻璃温室内,采用岩棉培技术.玻璃温室分别设两种DIF处理:昼温20 ℃、夜温16 ℃ (DIF +4 ℃) 和昼温16 ℃、夜温20 ℃ (DIF -4 ℃).结果表明:负DIF显著降低了甜椒(品种:Spirit)的节间长度与叶片大小,但对叶片展开速率、早熟性、产量和质量无显著影响.正DIF温室内甜椒植株比负DIF内的多消耗31%的营养液.与此相对应,随着甜椒植株的生长,从正DIF温室内排出的多余营养液的EC值随之提高.负DIF温室内的甜椒(品种:Spirit)果实加长生长更快.而昼夜温度波动并不影响果实外观和内在品质.不同品种对DIF有不同的反应. 相似文献
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14.
辣椒RGA的分离将为进一步从辣椒中分离功能性抗病基因和抗病机理分析打下基础,为辣椒相关抗病基因的克隆提供依据。根据已知抗病基因保守氨基酸结构域设计简并引物,以高抗辣椒品种88为试材,通过PCR扩增抗病基因同源序列。结果表明:从辣椒基因组DNA中分离出1条辣椒抗病基因同源序列WD1。对其编码的氨基酸序列进行分析表明:该序列同时含有P-环(GGVGKTT)、kinase-2(VLDD)、kinase-3(GSRII)及HD(即GLPLAL)保守域结构,分离的辣椒抗病基因同源序列(RGA)与已报道的辣椒抗病基因同源序列A5和A13都有99%的同源性。 相似文献
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花粉管通道法将Bt毒蛋白基因导入优良玉米自交系 总被引：18，自引：0，他引：18
以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料，用花粉管通道法介导质粒pGBIL04(actin.Bt.35S.bar）DNA的转化，经对T0代1403株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定，共获得5株PCR阳性植株，分别为授粉后8，12，14，18h导入所得，总的平均转化率为0.36%。结果表明：只要掌握好导入时机，在玉米上用花粉管通道法转基因是完全可行的。 相似文献
16.
以兴蔬皱皮辣椒为试材,对越冬茬(2月3日和24日剪枝)辣椒植株和春茬(2月3日和24日移栽)栽培辣椒植株进行物候期、早期产量及其构成因素、果实相关性状、病虫害发生情况比较。结果表明:同一天剪枝、移栽的辣椒植株,剪枝再生植株的现蕾期、始花期、始收期均早于春茬移栽植株;剪枝再生植株的早期单株果数、单株果质量、产量极显著高于春茬移栽植株,与同一天移栽的春茬辣椒相比,2月3日、2月24日剪枝再生栽培辣椒的产量分别提高了32.36%、45.40%;剪枝再生植株的果实小于春茬栽培的,单果质量、商品果纵径、横径均显著小于春茬栽培的,春茬移栽植株果实的果肉比剪枝再生植株的厚,差异达极显著水平;剪枝再生植株的病虫害发生较严重,较大面积的暴发了疫病,且白粉虱和红蜘蛛为害较重,春茬移栽植株的病虫害发生较少。 相似文献
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采用单孢菌落直接配对法对来自安徽合肥、淮南、和县、潜山、岳西等县市的发病辣椒上分离鉴定获得22个辣椒疫霉菌株进行交配型测定,并采用离体叶片接种法测定了辣椒疫霉不同菌株的致病力。结果表明,安徽省辣椒疫霉菌存在A1和A2两种交配型,以A2占优势,均有分布,发生频率达81.8%。不同来源菌株对2个辣椒品种的致病力存在显著差异,各菌株对艳阳离体叶的平均病级范围为1.0～4.8,对合丰天瑞离体叶的平均病级范围为1.5～4.5。不同地区的菌株致病力有强弱之分,同一地区中不同菌株的致病力也存在一定的差异性。辣椒疫霉菌的致病力与品种之间存在互作关系,菌株的交配型与致病力无明显的相关性。 相似文献
18.
[目的]筛选适合在安徽池州推广的防治辣椒青枯病的药剂。[方法]在辣椒青枯病发病高峰期调查l（3药物、农用链霉素还有空白对照辣椒植株的发病率、防效和病情指数;在辣椒生长及采收期间,调查统计不同处理下辣椒叶色、果实大小以及产量：在试验过程中考察l〈3药物辣椒的副作用。[结果]K3药剂处理下辣椒青枯病的发病率和病情指数大大低于农用链霉素处理和空白对照,防治效果优于农用链霉素处理;K3药剂处理增产效果优于农用链霉素处理,且叶色浓绿、果大光亮、品质优良;K3药剂处理辣椒植株未出现缓苗、药害现象,辣椒植株生长正常,土壤pH值无显著变化,辣椒产品无农药残留和重金属超标现象。『结论]l（3药剂对辣椒青枯病有很好的防治效果,并且有一定的促进生长、提高产量和品质的效果,可在池州辣椒生产上大面积推广使用。 相似文献
19.
WEI Song-hong CAO Yuan-yin Zhang Yan-zhen ZHANG Ling-bing WANG Gang YANG Jia-shu 《中国农业科学(英文版)》2003,2(9)
The immature embryos of wheat cultivars Liaochun10, Tiechun1 and Fengqiang3 were bombarded with gold particles coated with pti5-vp16 by gene gun and disease resistant regenerated plants were attained. In order to confirm that the plants are genuine transformed ones, a series of molecular tests were conducted as follows. Firstly, transient GUS expression test on embryos two days after bombardment was done. There were many obvious blue spots produced on the surface of bombarded embryos after GUS staining, in which the maximum reached to 85 blue spots per embryo. Secondly, PCR test was performed with DNA from the regenerated plants obtained after double selection with ppt. 6 plants were found PCR test positive. At last, further verification analysis using dot hybridization and southern blotting was carried out on those PCR positive plants and the strong hybridization signals appeared as expected. All the above tests were uniformly indicated that the disease resistant regenerated plants were true transgenic plants. When inoculated with Blumeria graminis, transgenic wheat plants of PCR positive results were mostly resistant(R) after 7 days, and resis-tant, moderate resistant(MR), moderate susceptible(MS) at 14 days respectively. The disease severity of them was distinctively lighter than that of control. 相似文献
20.
转pti5-vp16基因小麦的分子检测和抗病性鉴定 总被引：6，自引：0，他引：6
将携带pti5 vp16基因的pJZ170质粒附着微弹用基因枪轰入辽春 10号、铁春 1号和丰强 3号小麦幼胚 ,2d后检测瞬时表达 ,GUS染色 ,幼胚表面有明显的蓝点 ,单个幼胚蓝点数多达 85个 ;对经ppt2次筛选后的转基因小麦植株进行PCR检测 ,检出 6株阳性植株 ;对部分PCR检测呈阳性的植株进行斑点杂交和Southern印迹杂交检测 ,转基因植株均产生杂交信号。对PCR呈阳性的转基因小麦植株接种小麦白粉病菌 ,接种 7d后 ,病害表型多数为抗病 ;接种 14d后 ,病害表型为抗病、中抗及中感 ,病害严重度明显轻于对照。 相似文献