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【目的】探索葡萄成熟花粉粒原生质体分离条件,为下一步原生质体杂交及遗传改良提供技术参考。【方法】使用低温—酶解法对酿酒葡萄桂葡一号花粉原生质体进行分离,探讨低温处理不同时间、不同花序位置和不同甘露醇浓度对原生质体分离的影响。【结果】随着低温处理时间的延长,原生质体分离得率越高,在0.6 mol/L甘露醇条件下,以处理7 d的原质体分离得率最高,达18.94%,其次是处理5 d。对于不同部位花粉,以中上部花药的原生质体分离得率较高,而以中部花序的花粉原生质体分离得率最高,达19.11%;中下部花药及已开始散粉的花药原生质体分离得率较低。相对于1.2 mol/L甘露醇,以添加0.6 mol/L甘露醇作为渗透压处理的花粉原生质体分离得率较高。【结论】低温处理时间、花粉成熟度及甘露醇浓度均对酿酒葡萄花粉原生质体的分离有明显影响。选用即将开花的中上部花药为材料,经0～4℃低温预处理5～7 d,并以0.6 mol/L甘露醇作为渗透压调节剂可获得大量有活性的花粉原生质体。 相似文献
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盾叶薯蓣原生质体分离 总被引：1，自引：0，他引：1
以盾叶薯蓣叶片、种子愈伤为材料,探讨了不同的酶浓度、酶解时间及渗透压对原生质体分离的影响.结果表明:生长5～10d的叶片置于0.6%纤维素酶、0.5%果胶酶、0.9mol/L甘露醇的酶液中、黑暗处理21h,其原生质体产量和活力最高;悬浮培养5～10d的愈伤组织在2.0%纤维素酶、1.0%果胶酶、0.7mol/L甘露醇的混合酶液中黑暗处理6～8h原生质体产量和活力最高. 相似文献
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【目的】真叶细胞能模拟植物内源条件,建立基于棉花真叶原生质体的高效瞬时表达体系,为快速有效研究棉花基因功能提供方法。【方法】以陆地棉TM-1真叶为材料,采用常用的纤维素酶和离析酶组合分离原生质体,探究影响原生质体分离的叶龄、渗透压、酶解液成分和酶解时间,及渗透压和酶解时间对原生质体活力的影响,并分析渗透压、PEG浓度和培养液种类对原生质体瞬时转化的影响,进而优化棉花真叶原生质体瞬时表达体系。构建GhLTP-GFP表达载体,对比融合蛋白在拟南芥、棉花原生质体和烟草表皮细胞中的亚细胞定位,验证该体系。【结果】不同于棉花子叶,酶解液中高浓度CaCl2会显著抑制真叶细胞壁的酶解,含10 mmol·L-1 CaCl2的酶解液能有效分离棉花真叶原生质体。甘露醇显著影响原生质体得率,含0.5 mol·L-1甘露醇的酶解液分离原生质体得率最高,且细胞形态维持较好,而0.4 mol·L-1甘露醇条件下原生质体活力降低一倍,表明0.5 mol·L-1甘露醇能较好维持棉花真叶原生质体渗透压。陆地棉刚展平的真叶分离所得原生质体大小合适,而展平后的嫩叶分离得到的原生质体细胞较大,得率降低一倍。酶解处理7 h前,原生质体游离缓慢,酶解9 h原生质体产量达到高峰,继续酶解原生质体将破裂,得率降低。在等渗条件下用40% PEG4000转化所得原生质体,转化效率最高,而普遍采用的低渗条件不利于棉花真叶原生质体的转化。转化后,用WI溶液继续培养原生质体,会引起原生质体的大量破裂,用含0.5 mol·L-1甘露醇的W5溶液继续培养,有利于原生质体形态的维持,转化率提高到90%。表达载体35S:GhLTP-GFP分别转入棉花、拟南芥原生质体和烟草表皮细胞,GFP信号在细胞中的定位结果一致。 【结论】建立的棉花真叶原生质体瞬时表达体系,可获得8.10×106个/mL活力在95%以上的高质量原生质体,原生质体得率提高8倍,转化效率达到90%,可用于亚细胞定位、蛋白互作,以及代谢调控网络研究等。 相似文献
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蕙兰原生质体分离条件的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用蕙兰无菌苗的幼叶和幼原球茎以及花蕾时的花瓣和花粉块为材料，研究了纤维素酶（商品名ＯｎｏｚｕｋａＲ－１０）浓度、渗透压稳定剂甘露醇浓度和酶解时间等因素对蕙兰原生质体分离的影响，结果表明：①花粉块和花瓣的分离条件为１．５％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间６．５ｈ时，其原生质体最高得率分别为４．５６×１０６和２．１２×１０６个／ｇＦＷ。②幼叶的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１３％甘露醇、酶解时间２０ｈ时，其原生质体最高得率为３．３６×１０６个／ｇＦＷ。③幼原球茎的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间１６ｈ时，其原生质体最高得率为１．８７×１０５个／ｇＦＷ。此外，花粉块与叶片的原生质体溶液中杂质很少，有利于提纯；花瓣原生质体溶液中碎屑较多，且有少量的针晶；原球茎原生质体溶液中的淀粉粒与针晶很多，非常不易提纯。因此，花粉块与叶片为蕙兰原生质体分离的较好材料 相似文献
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【目的】研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件,建立高效制备和再生原生质体的方法。【方法】以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料,研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响,并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验。【结果】(1)以0.6mol/L NaCl为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄6d的菌丝酶解3h,原生质体的产量最高。(2)以0.6mol/L甘露醇为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄5d的菌丝酶解2h,原生质体的再生率最高;验证试验结果表明,在此条件下,原生质体再生率平均为25.7%,此时原生质体平均产量为83.42×105 mL-1。【结论】对酶解温度、酶解时间、菌丝体菌龄、稳渗剂及酶系种类等条件的优化,可提高秦巴蛹虫草原生质体的产量及再生率。 相似文献
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番木瓜幼叶原生质体分离研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探讨番木瓜幼叶原生质体的最佳分离条件。【方法】以20～30日龄番木瓜无菌苗幼叶为材料,对原生质体分离过程中酶液组合、酶解时间、纯化离心速度（500～1500rpm）及离心时间（6～10min）进行探讨。【结果】随着酶解液中纤维素酶和果胶酶含量的提高,番木瓜原生质体产量逐渐升高,而其活力逐渐降低,其中以为2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶组合的效果较好,解离时间以8h为宜。随着酶解液中甘露醇浓度的升高,原生质体的产量呈现先增加后降低的趋势,在0.55mol/L时达到最大（2.48×106个/gFW）。在悬浮纯化原生质体时,以1000rpm离心6～8min的效果较好。【结论】适宜原生质体分离的酶解液为2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶＋25mmol/LMES＋0.55mol/L甘露醇,最适酶解时间为8h;在原生质体纯化时,使用1000rpm离心6~8min,有利于获得产量及活力较高的原生质体。 相似文献
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【目的】探究百合原生质体分离纯化和培养条件，为百合原生质体融合、再生体系建立、转基因育种等研究奠定基础。【方法】以‘白天堂’百合无菌苗叶片为材料，采用纤维素酶、果胶酶和离析酶组合分离原生质体，采取单因素试验法，对影响原生质体的制备及再生条件的主要因素即渗透压、酶解组合、细胞筛和酶解时间进行筛选与优化。【结果】以百合无菌苗叶片在1.0%纤维素酶+0.5%离析酶+0.1%果胶酶+0.6 mol/L甘露醇+10.0 mmol/L CaCl2·2H2O+20.0 mmol/L MES+20.0 mmol/L KCl混合酶解液为最优条件，25℃,25 r/min, pH为5.6黑暗酶解6 h;孔径75μm细胞筛过滤，600 r/min离心5 min收集细胞，原生质体产量可达6.4×105个/mL,原生质体活力为78.0%;将纯化后密度为1×105个/mL的原生质体溶液接种在葡萄糖作为唯一碳源的培养基中可以存活，并生长产生细胞壁，但没有启动细胞分裂和诱导形成愈伤组织。【结论】初步建立‘白天堂’百合的高效原生质体... 相似文献
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番木瓜幼叶原生质体分离研究 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】探讨番木瓜幼叶原生质体的最佳分离条件。【方法】以20～30日龄番木瓜无菌苗幼叶为材料,对原生质体分离过程中酶液组合、酶解时间、纯化离心速度（500～1500 rpm）及离心时间（6～10 min）进行探讨。【结果】随着酶解液中纤维素酶和果胶酶含量的提高,番木瓜原生质体产量逐渐升高,而其活力逐渐降低,其中以为2.0%纤维素酶+ 0.5%果胶酶组合的效果较好,解离时间以8 h为宜。随着酶解液中甘露醇浓度的升高,原生质体的产量呈现先增加后降低的趋势,在0.55 mol/L时达到最大（2.48×106个/gFW）。在悬浮纯化原生质体时,以1000 rpm离心6～8 min的效果较好。【结论】适宜原生质体分离的酶解液为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+25 mmol/L MES+0.55 mol/L甘露醇,最适酶解时间为8 h;在原生质体纯化时,使用1000 rpm离心6~8 min,有利于获得产量及活力较高的原生质体。 相似文献
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石斛兰叶片原生质体分离条件研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]探讨了石斛兰原生质体分离过程中的影响因素,建立最佳的原生质体制备体系。[方法]以石斛兰叶片为材料,采用正交设计研究纤维素酶浓度、酶解时间、温度、pH值以及甘露醇浓度对石斛兰原生质体分离的影响。[结果]以3%纤维素酶R-10＋0.6%果胶酶Y-23为混合酶液,0.5mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,在26℃的黑暗条件下,pH值为5.4的酶液组合中,黑暗条件下振荡,酶解15h,获得的原生质体产量最高。[结论]该制备体系为后续原生质体培养和体细胞杂交奠定良好的基础。 相似文献
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宁夏贺兰山东麓不同酿酒葡萄品种糖分积累特征 总被引：1，自引：0，他引：1
采用田间观测的方法,研究了贺兰山东麓地区7个酿酒葡萄品种的糖分质量分数及积累特征。结果表明:不同酿酒葡萄品种的糖分积累速率不同,成熟期糖分质量分数存在品种间差异;在转色至成熟期,所有酿酒葡萄品种的糖分质量分数均呈"S"型,可用Logistic模型拟和,并且模拟效果良好;不同酿酒葡萄品种糖分积累规律稍有不同。 相似文献
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[目的]研究膜下滴灌条件下不同灌溉定额对酿酒葡萄土壤水分的动态变化规律的影响.[方法]通过田间试验,以不覆膜为对照,研究覆膜条件下酿酒葡萄不同生育期土壤水分动态变化规律.[结果]覆膜能有效保证土壤水分不易散失.土壤水分大多集中在20～60 cm的深度.7～8月是葡萄生长发育旺盛和葡萄果实膨大、着色、成熟的关键时期.[结论]膜下滴灌是保证葡萄增产节水的重要措施.保持20 ～60 cm土层适宜的土壤含水量是葡萄生产的重要因素.7～8月应适时加大灌溉量并缩短灌水周期,满足葡萄生长的需要. 相似文献
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[目的]探讨不同浓度蜗牛酶处理对山葡萄酒色泽的影响,为葡萄酒的色泽及相关品质研究提供参考。[方法]以贝达山葡萄为材料,采用CIELAB法测定不同浓度蜗牛酶处理下山葡萄酒亮度（L＊）、红色色调（a＊）、黄色色调（b＊）和弧度（H＊）。[结果]0.05 mg/L蜗牛酶处理下,山葡萄酒的亮度（L＊）为28.9,红色色调（a＊）为22.3,黄色色调（b＊）为-15.5,弧度（H＊）为-39.8,该条件下酒的色泽效果最佳。[结论]得出最佳的蜗牛酶处理浓度,为更好酿制葡萄酒提供了参考。 相似文献
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[目的]利用HPLC法对梅鹿辄葡萄和葡萄酒中的花色素苷组分及其相对含量进行研究。[方法]利用乙醇提取酿酒葡萄梅鹿辄中的花色素苷,并用HPLC法分别测定梅鹿辄葡萄及葡萄酒中的花色素苷。[结果]在梅鹿辄葡萄果实及葡萄酒中测得的9种花色素苷中,均以二甲花翠素3-O-葡萄糖苷含量最高,分别占总成分的28.41%和54.00%;在果实中二甲花翠素3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、二甲花翠素3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷分别以22.16%和25.28%的含量构成主要花色素苷,而在葡萄酒中这两种花色素苷含量迅速下降,分别降至4.32%、11.88%,不是梅鹿辄葡萄酒中的主要呈色成分。[结论]初步分析了花色素苷在梅鹿辄葡萄浆果向葡萄酒转变过程中的变化,为客观鉴定葡萄品种及其他研究提供了依据。 相似文献
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[目的]筛选适宜济南及周边地区栽培的酿酒葡萄新品种。[方法]2011年引入7个酿酒葡萄品种在济南地区进行试栽,通过对引入品种的物候期、植物学性状、生长结果习性、果实经济性状及抗病性的调查,筛选适宜济南及周边地区栽培的酿酒葡萄新品种。[结果]各酿酒葡萄品种间差异较大,霞多丽、贵人香、美乐品质较好,可以酿造出品质优良的葡萄酒。北醇糖度高,抗病性、抗寒性强,易于栽培管理,适合在山东地区进行推广。[结论]筛选出适宜济南及周边地区的酿酒葡萄新品种,为研究酿酒葡萄品种的栽培技术提供理论依据。 相似文献
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山葡萄“双红”干红酒旋转罐酿造工艺 总被引：2，自引：2，他引：0
[目的]为大规模酿造山葡萄＂双红＂干红酒提供理论依据。[方法]采用旋转罐酿造工艺对山葡萄＂双红＂品种进行酿造试验。[结果]旋转罐酿造工艺的最佳工艺条件为：酒精发酵的温度为30℃,发酵液的pH值为3.2,酵母接种量为6%。与传统酿造工艺相比,旋转罐发酵酒精度（12.1%）与挥发酸（0.52 g/L）高,澄清度高（皂土加入量为0.18%时,透光率达94.8%）。[结论]可以用此工艺大规模酿造山葡萄酒。 相似文献
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The Effect of Vineyard Cover Crop on Main Monomeric Phenols of Grape Berry and Wine in Vitis viniferal L. cv. Cabernet Sauvignon 总被引：1，自引：0，他引：1
This study was conducted to determine the effect of cover crop inter-row in vineyard on main mono-phenol content of grape berry and wine. Three such cover crops, two perennial legumes （white clover and alfalfa） and a perennial gramineous grass （tall fescue） were sown in vineyard. The main phenolic compounds of mature grape berry and wines vinified under the same conditions were extracted with ethyl acetate and diethyl ether and analyzed by high- performance liquid chromatography （HPLC） by comparing to soil tillage. A total of ten phenolic compounds were identified and quantified in the different grape berry and wines, including nonflavonoids （hydroxybenzoic and hydroxycinnamic acids） and flavonoids （flavanols and flavonols）. The concentration of flavonoid compounds （409.43 to 538.63 mg kg^-1 and 56.16 to 81.30 mg L^-1） was higher than nonflavonoids （76.91 to 98.85 mg kg^-1 and 30.65 to 41.22 mg L^-1） for Cabernet Sauvignon grape and wine under different treatments, respectively. In the flavonoid phenolics, Catechin was the most abundant in the different grapes and wines, accounting for 74.94 to 79.70% and 48.60 to 50.62% of total nonanthocyanin phenolics quantified, respectively. Compared to soil tillage, the sward treatments showed a higher content of main mono-phenol and total nonanthocyanin phenolics in grapes and wines. There were significant differences between two cover crop treatments （tall fescue and white clover） and soil tillage for the content of benzoic acid, salicylic acid, caffeic acid, catechin, and total phenolics in the grape berry （P 〈 0.05 or P〈0.01）. The wine from tall fescue cover crop had the highest gallic acid, caffeic acid and catechin. Cover crop system increased the total nonanthocyanin phenolics of grapes and wines in order of the four treatments： tall fescue, white clover, alfalfa, and soil tillage （control）. Cover crop in vineyard increased total phenols of grape berry and wine, and thus improved the quality of wine evidently. 相似文献