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[目的]建立高山杜鹃的ISSR—PCR反应体系。[方法]运用正交试验分析模板DNA、TaqDNA聚合酶、Primer、Mg^2+和dNTPs5个因子对杜鹃ISSR-PCR反应影响,建立高山杜鹃ISSR-PCR反应体系。[结果]杜鹃ISSR—PCR25m反应体系中5个因子较适水平为:DNA模板浓度为1.6ng/μl,TaqDNA聚合酶浓度为0.040U/μl,Primer浓度为0.64mmol/L,dNTPs浓度为0.68mmol/L,Mg^2+浓度为2.08mmol/L。[结论]研究结果为利用ISSR分子标记技术研究杜鹃提供了理论支持。 相似文献
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采用改良的CTAB法提取烟草赤星病菌丝基因组DNA,通过正交与单因素变量设计试验,对烟草赤星病菌ISSR—PCR反应体系的各个影响因素进行优化,建立了适合烟草赤星病菌ISSR分子标记的最佳反应体系,即在25μL反应体系中包含10×buffer2.5μL,模板20ng,Mg^2+浓度2.0mmol/L,引物浓度0.8μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,TaqDNA酶0.75U。利用所建立的体系对采自云南昆明、德宏、楚雄、曲靖、玉溪等地8份材料进行检验,其结果表明优化后的体系适合烟草赤星病菌的ISSR-PCR反应。 相似文献
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果梅ISSR-PCR反应体系的建立和优化 总被引:2,自引:0,他引:2
以果梅品种桃梅为试材,通过单因子试验分别研究了DNA模板浓度、引物浓度、Mg^2+浓度、dNTPs浓度、退火温度及循环数等对果梅ISSR-PCR反应的影响.建立了果梅ISSR-PCR的最佳反应体系:20μL反应体系中含10×buffer2μL,2.5mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdNTPs,0.32μmol/L引物,20~80ng模板DNA,1UTaq DNA聚合酶.利用优化的反应体系,对19个果梅品种进行体系稳定性检测,结果表明该反应体系的重复性和稳定性良好. 相似文献
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水稻SSR-PCR反应体系的优化 总被引:4,自引:1,他引:3
[目的]为了探索水稻最佳SSR—PCR反应体系。[方法]以水稻R117为试验材料,研究Mg^2+、dNTP、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量以及退火温度对水稻SSR—PCR扩增结果的影响。[结果]当Mg^2+浓度2.00mmol/L,dNTP浓度O.15mmol/L,引物浓度0.30μmol/L,TaqDNA聚合酶用量2.0U,退火温度56.6℃时,PCR扩增DNA条带最亮。[结论]在20山反应体系中,上述结果为水稻最适SSR—PCR反应体系。 相似文献
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金柑属ISSR反应体系的建立及优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以融安金弹(F.crassifolia Swingle)为试材,利用正交设计和单因素试验相结合的方法,对ISSR反应体系中各个主要影响因子进行了优化筛选,结果表明,20μL的ISSR反应体系中各组分的最适浓度分别为:Mg^2+1.60mmol/L,dNTPs0.15mmol/L,TaqDNA酶1.0U,引物0.2μmol/L模板1.2ng/μL.并利用该优化对金弹等21份金柑属材料进行了ISSR扩增,证实了该体系稳定和可靠性. 相似文献
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马铃薯SRAP-PCR反应体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]建立马铃薯大西洋SRAP—PCR反应体系,为今后的研究奠定基础。[方法]以马铃著大西洋基因组DNA为模板,从Mg^2+浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA浓度5个方面对大西洋SRAP-PCR反应体系进行优化。[结果]适合大西洋的SRAP-PCR反应体系为:模板DNA1.0μl(50ng/μl),Vaq酶1.7μl(1U/μl),引物对1.5μl(1μmol/L)×2,MgCl2 2.4μl(25mmol/L),dNTPs0.6μl(10mmol/L),10×Buffer3.0μl,ddH2O18.3μl,总体积30μl。[结论]建立的SRAP-PCR反应体系是稳定可靠的。 相似文献
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棉花DNA提取及优化SSR反应体系的建立和应用 总被引:4,自引:0,他引:4
对棉花DNA提取程序和SSR反应体系进行了研究。利用正交设计对模板DNA、引物、Taq酶和Mg^2+浓度4种成分以3个梯度进行优化和选择,结果表明,最优反应体系为15μL,其中含有:10×Taq buffer 1.5μL、Mg^2+(25mmol/μL)1.5肛L、dNTPs(25mmol/μL)2.0μL、引物(20pmol/μL)各2.0μL、Taq酶(2.0U/μL)0.15μL、DNA模板(25ng)3.0μL、ddH2O补至15μL。采用建立的反应体系,利用8对引物对3个品种进行扩增,6%的变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测结果显示该体系扩增结果清晰稳定。 相似文献