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马铃薯病毒检测中DAS-ELISA的改进及注意问题 总被引：1，自引：0，他引：1
分别采用改进的DAS ELISA和常规DAS ELlSA法同时对主要马铃薯病毒 (PVX、PVY、PVS、PVM和PLRV)进行检测 ,其检测结果完全一致 ,且其灵敏度也基本相同。局部改进的DAS ELISA方法简便、快速 ,成本更低 ,适合于种薯生产中大量样品的马铃薯病毒的快速检测 相似文献
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马铃薯青枯病菌的PE-ELISA检测 总被引：3，自引：0，他引：3
PE ELISA (Post EnrichmentEnzyme -linkedImmunosorbentAssay)是一种快速、经济、有效的马铃薯青枯菌检测方法 ,较普通NCM ELISA方法灵敏度提高 10 0万倍 ,与DAS -ELISA、NASH等方法一样灵敏、可靠 ,特别是对处于潜伏期感染而没有表现出症状的马铃薯块茎的检测更为有效 相似文献
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本文用三种方法鉴定马铃薯病毒，第一种方法为常规ＥＬＩＳＡ法，第二种和第三种均为快速ＥＬＩＳＡ法。三种方法的阳性率和灵敏度一致，快速ＥＬＩＳＡ法的精密度高于常规ＥＬＩＳＡ法。快速组比常规组可节约时间约１０ｈ，该法适合大量、快速检测样品的需要。 相似文献
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快速ELISA法鉴定马铃薯病毒 总被引：8，自引：0，他引：8
本用三种方法鉴定马铃薯病毒，第一种方法的为常规ＥＬＩＳＡ法，第二种和第三种均为快速ＥＬＩＳＡ法。三种方法的阳性率和灵敏度一致，快速ＥＬＩＳＡ法的精密度高于常规ＥＬＩＳＡ法，快速比常规组可节约时间约１０ｈ，该法适合大量，快速检测样品的需要。 相似文献
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马铃薯病毒和类病毒检测技术 总被引：4，自引：0，他引：4
马铃薯病毒和类病毒严重影响马铃薯的产量和质量,防治的主要措施是应用无病毒种薯。确认种薯是否带毒,世界和国内主要采用ＥＬＩＳＡ法和双向往复聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测。为提高检测速度和准确性,我们在加拿大传统的检测技术基础上进行改进,建立了快速、灵敏、高特异性的检测方法。 相似文献
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传统的马铃薯环腐病菌鉴定方法主要是革兰氏染色法、茄苗接种鉴定法以及根据菌体的各种特征特性进行鉴定;应用血清学鉴定检测马铃薯环腐病菌方法主要是乳胶致敏试验(AG)、凝胶双扩散试验(DD)、间接荧光抗体染色试验(IFAS)以及酶联免疫吸附测定试验;分子生物学方法检测马铃薯环腐病菌技术主要是应用RFLP分子标记、基因探针技术、核酸斑点杂交方法以及ITS-PCR方法。对于马铃薯环腐菌的鉴定检测不能单单依靠一种方法,因为任何一种方法都有其缺点和局限性,为得到真实、可靠的判定结果,应将多种方法取得的结果结合起来进行最终判定,因此针对马铃薯环腐菌鉴定检测建立一套完整的技术体系十分必要。 相似文献
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酶联免疫吸附试验法从首次报道以来(Voller等,1976;Clark和Adams,1977)已被认为是鉴定马铃薯y病毒、A病毒和卷叶病毒的很有前途的方法。与标准方法相比,这一技术在灵敏和快速,特别是用常规提取法鉴定叶片中的马铃薯病毒等方面,都有其优越性。应用Pollhne滚轮榨汁器(Gugerli,1979b),一 相似文献
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马铃薯抗病毒育种的研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
1 马铃薯抗病毒育种的意义马铃薯是世界上继小麦、玉米和水稻之后的第四大粮食作物[1] 。其单位面积和单位时间的产量高于其它三种作物。又因其蛋白质富含多种人体必须的氨基酸 ,因此 ,马铃薯的生产是相当重要的 ,尤其在发展中国家。可是 ,马铃薯种薯退化问题严重。现已明确造成退化的主要原因是病毒危害。据估计 ,每年世界上马铃薯生产由病毒造成的减产至少为 2 0 % ,同时 ,病毒也影响马铃薯的质量[2 ,3] 。马铃薯茎尖脱毒可生产病毒含量很低的种薯 ,在严格的检测技术和程序化的繁种条件下 ,生产“无毒”种薯提供给大田生产[4 ] ,这在发达… 相似文献
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马铃薯环腐病菌鉴定检测技术研究进展 总被引：2，自引：2，他引：2
传统的马铃薯环腐病菌鉴定方法主要是革兰氏染色法、茄苗接种鉴定法以及根据菌体的各种特征特性进行鉴定应用血清学鉴定检测马铃薯环腐病菌方法主要是乳胶致敏试验(AG)、凝胶双扩散试验(DD)、间接荧光抗体染色试验(IFAS)以及酶联免疫吸附测定试验;分子生物学方法检测马铃薯环腐病菌技术主要是应用RFLP分子标记、基因探针技术、核酸斑点杂交方法以及ITS-PCR方法.对于马铃薯环腐菌的鉴定检测不能单单依靠一种方法,因为任何一种方法都有其缺点和局限性,为得到真实、可靠的判定结果,应将多种方法取得的结果结合起来进行最终判定,因此针对马铃薯环腐菌鉴定检测建立一套完整的技术体系十分必要. 相似文献
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《中国马铃薯》2015,(3):162-166
马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)和马铃薯A病毒(PVA)是导致马铃薯种薯退化的重要病毒,有时复合侵染,因此建立快速、准确检测体系尤为重要。试验从中、英文文献中查找引物,通过筛选和综合评价,每种病毒确定1对特异性引物,再通过对PCR部分Mg2+、d NTPs、Taq DNA聚合酶浓度梯度优化,最终建立了稳定的三重RT-PCR反应体系,得到长度分别为711、520、273 bp的特异性条带。应用该体系和DAS-ELISA方法同时对田间150份马铃薯毒源样品进行检测,两种方法检测结果吻合,三重RT-PCR体系的灵敏度更高、特异性更强,可以用于马铃薯田间样品检测。 相似文献
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<正>马铃薯病毒毒源是马铃薯病毒检测中抗血清制备及ELISA检测中必备的材料,也是马铃薯抗病育种和马铃薯病毒学研究所需的材料。我国1987年以来就开展了采用试管封闭保存毒源法的研究,结果表明利用烟草、洋酸浆、番茄等植物做为马铃薯不同病毒试管保毒植物,其试管小植株可单节切断繁殖,均可正常成长发育,移栽到土壤中小植株发育正常,并仍具有浸染力,此法一直沿用至今。 相似文献
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马铃薯Y病毒一步RT-PCR检测试剂盒的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)对马铃薯的危害最大,可导致马铃薯退化,降低马铃薯产量。解决这一问题的重要途径就是培养脱毒种薯,但是否完全脱毒需要经过检测才能证实。本研究依据PVY CP基因序列设计合成了一对引物PY1、PY2,以带毒样品植物总RNA为模板,在同一个反应中同时加入反转录和PCR反应所需试剂,反应程序中包括反转录和PCR反应所需条件,进行反应扩增,带毒样品扩增得到340 bp的目的条带,而健康对照无此目的条带,从而建立了PVY的一步RT-PCR检测技术,并组装成试剂盒。该试剂盒具有良好的稳定性和特异性,灵敏度可以检测到带毒植物组织下限的6.25μg,高于ELISA(100μg)和NASH(15μg)的灵敏度,虽然和常规方法的灵敏度相同,但更为快速、简便、易于操作,适合脱毒苗和脱毒种薯生产单位做大量样品的检测。 相似文献
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病毒病是制约马铃薯产量和质量的重要因素。马铃薯脱毒试管苗、微型薯是生产脱毒种薯的重要环节。本研究于2010~2013年对收集自云南省的试管苗274个、微型薯356个,共计630个样品。应用电子显微镜观察,并采用DAS-ELISA检测了8种病毒:马铃薯S病毒、马铃薯卷叶病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒、马铃薯M病毒、番茄斑萎病毒和烟草环斑病毒,发现试管苗和微型薯中马铃薯S病毒检出率最高(21.27%),其次是PLRV(5.71%);还检测到了新出现的侵染马铃薯的番茄斑萎病毒和烟草环斑病毒。研究结果为马铃薯种薯生产过程中病毒病的检测防控提供了参考。 相似文献
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应用多聚酶链式反应法和酶联免疫吸附法对块茎中马铃薯Ｙ病毒做比较测定Ｈ．Ｂａｒｋｅｒ等植物受侵染组织中的病毒可以用多种方法来检测。除依赖于显微镜和侵染鉴定之外，还可以粗略地分为两个组：一组是根据病毒外壳蛋白质的检测；另一组则是根据病毒核酸的检测。前者包... 相似文献
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马铃薯X病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测 总被引：1，自引：0，他引：1
马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是侵染马铃薯重要病毒之一,通常引起花叶症状,在田间常与其他病毒混合感染导致马铃薯的毁灭性减产。PVX尚无有效的药剂可以防治,加强对PVX的快速检测是一个亟待解决的课题。本研究应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)技术检测马铃薯X病毒。结果表明:IC-RT-PCR方法可检测出稀释至1.0×10-3的粗汁液中的病毒;RT-PCR方法可从稀释至1.0×10-4的总RNA中扩增出特异的目的条带。这两种方法均具有较高的检测灵敏度,均可用于马铃薯X病毒的检测。 相似文献
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１ 前 言马铃薯纺缍块茎类病毒（ｐｏｔａｔｏｓｐｉｎｄｌｅｔｕｂｅｒｖｉｒｏｉｄ）是一种严重危害马铃薯生产的类病毒，降低产量２０％～３０％。防治的主要措施是应用无病毒种薯。由于目前还没有脱掉类病毒的有效措施，只能从未被饱和侵染的群体中鉴定筛选出未被侵染的个体，再脱掉其它病毒，作为核心材料。为了能够筛选出更多的无马铃薯纺缍块茎类病毒（ＰＳＴＶ）的个体，确保种薯生产和无毒化育种的质量，必须加强马铃薯纺缍块茎类病毒的检测工作。目前我们采用的检测马铃薯纺缍块茎类病毒的方法是往复—聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Ｒ… 相似文献
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培育健壮马铃薯试管苗试验 总被引：12，自引：0，他引：12
我们在马铃薯茎尖脱毒和试管苗繁殖过程中发现，马铃薯试管苗生长细弱、茎叶嫩黄与带有高浓度的马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTV）及几种主要马铃薯病毒有关。用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法和酶联夹心法检测筛选出无病毒的试管苗作为试材，排除类病毒和病毒侵染的干扰，以提高培养基中营养元素含量作为培养健壮试管苗的措施，试验结果表明，2倍MS液体培养处理的试管苗生长茁壮、浓绿，加速了干物质累积、使继代培养周期从3～4周缩短为2～3周。 相似文献