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1.
利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白研究 总被引：6，自引：0，他引：6
[目的]研究利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白,为利用转基因动物生产药用或食用蛋白提供依据。[方法]对已获得的人乳铁蛋白转基因牛进行人工催乳,用乳成分分析仪分析了转基因对乳汁的影响,并利用放免法检测了重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中的表达。[结果]重组人乳铁蛋白在牛乳中获得了高效表达,表达水平为(3.429±0.417)mg/ml。通过转基因牛乳的乳成分分析发现,转基因牛乳与常乳在乳脂、总蛋白、乳糖和干物质的含量上没有明显变化。[结论]重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中获得了高效表达,为大规模生产重组人乳铁蛋白奠定了基础。 相似文献
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采用柠檬酸三钠还原法制备了粒径为9 nm的金纳米微粒。结果表明:在pH 7.0的Tris-HCl缓冲溶液中,金标记羊抗牛免疫球蛋白G(IgG)与牛IgG产生特异性结合,羊抗牛IgG包裹的金纳米微粒释放出来,在聚乙二醇-20000的作用下发生聚集,导致体系在580 nm处的共振散射峰增强。当牛IgG浓度在0.013 3～1.33μg/mL范围内,随着牛IgG浓度的增加,共振散射强度线性增强,方法的检出限为0.007 95μg/mL,用于定量分析牛初乳中的IgG,结果令人满意。 相似文献
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常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP作为强阳离子交换介质,利用AKTApurifier10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH值7.5、浓度0.85 mol/L的NaCl洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5 mg/ml时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。 相似文献
4.
反相高效液相色谱法同时检测多种乳清蛋白成分 总被引：1，自引：0，他引：1
建立一种快速、简便鉴定和定量检测乳清蛋白中牛乳铁蛋白(bLf)、转基因人乳铁蛋白(rLf)、α-乳白蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)的方法。对样品进行离心脱脂和酸法去除酪蛋白,水洗乳脂和酪蛋白以提高α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白(Lf)的回收率。乳清通过高效液相色谱检测,采用Proteonavi反相C4色谱柱,以体积分数为0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.5mL/min,柱温35℃,检测波长280nm。结果显示:此方法可以有效分离牛α-乳白蛋白、牛β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白和转基因人乳铁蛋白。标准品线性关系良好,平均回收率在正常范围内。 相似文献
5.
以巯基乙胺为稳定剂,在水相中合成CdTe量子点,巯基乙胺自组装在量子点的表面形成带正电的聚合体,在pH为5.0～5.6的弱酸性条件下,带正电的CdTe量子点聚合体与带负电的甲氨蝶呤(Methotrexate MTX)、头孢曲松钠(Ceftriaxone CTRX)通过静电引力及疏水作用力结合形成粒径较大的聚合体,这种聚合体的形成导致共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering RRS)强度显著增大,同时二级散射(seconol-order scattering SOS)和倍频散射(frequency-doubling scattering FDS)也显著增强.在一定条件下,散射增强(△I)与甲氨蝶呤、头孢曲松钠的浓度成正比,其中RRS方法有较高的灵敏度,甲胺蝶呤和头孢曲松钠的线性范围分别为0.01～4.50 μg/mL,0.03～4.20 μg/mL,检出限(3σ)分别为3.06 ng/mL,8.90 ng/mL.这种方法灵敏、简便、快速,可用于血样中甲氨蝶呤、头孢曲松钠的痕量分析. 相似文献
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牛乳过敏原β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立 总被引：4，自引：1，他引：3
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA).确定了包被抗原质量浓度为0.5 μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000.结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05～1.00 μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好的准确性和重复性. 相似文献
8.
旨在探讨中甸犏牛乳中体细胞数(SCC)变化范围及其与乳理化指标的相关性,为制定犏牛乳相关理化指标正常值范围提供参考。采集中甸犏牛乳样92 份,测定乳脂肪、乳蛋白、乳糖、乳中SCC、乳尿素氮(MUN)和乳冰点(MFP)等8 项指标,分析SCC与乳各成分的相关性。结果表明：犏牛乳的主要营养成分含量高,其中乳脂肪、乳蛋白、乳糖、总固形物和非脂固形物平均含量分别为6.42%、4.23%、4.91%、18.01%和10.59%。乳中SCC 平均值为80.12 万/mL,其中SCC≤50 万/mL 的个体占52.17%,50 万/mL75 万/mL 的占36.96%,提示部分犏牛的乳房健康状况及其所产的乳质量问题值得关注;SCC与乳蛋白呈极显著正相关(P<0.01),与乳脂肪呈显著正相关(P<0.05),与乳糖呈极显著负相关(P<0.01),与总固形物、非脂固形物、乳脂乳蛋白比、MUN和MFP呈弱正相关(P>0.05),提示乳中SCC对主要乳营养成分的影响大,相关程度高。犏牛的MFP值为-0.587℃,为冰点低的乳品,这可能与犏牛适应高海拔寒冷气候形成的机制等有关;犏牛乳中MUN为7.52 mg/dL,表明饲喂犏牛的蛋白质饲料不足或质量不佳。本研究获得中甸犏牛乳中SCC变化范围及其与乳理化指标的相关性,为犏
牛乳质量控制提供了重要参考依据。 相似文献
9.
[目的]通过模拟肝、肾毒性的体外细胞试验,研究重组人乳铁蛋白是否对小鼠原代肝肾细胞具有毒性作用,为其进一步的安全性评价提供依据。[方法]采用模拟体外消化试验所得的重组人乳铁蛋白消化产物及重组人乳铁蛋白为受试物,牛乳铁蛋白为对照,以小鼠原代肝、肾细胞为平台,用MTT法检测受试物对细胞活性的半数抑制浓度（IC50）,研究细胞毒性剂量一反应关系。[结果]在设定的试验条件下,未发现重组人乳铁蛋白对肝、肾细胞存在靶毒性,结果能与已进行的亚慢性毒性试验相互印证。[结论]为重组人乳铁蛋白的进一步安全性评价及其他转基因食品的安全性评价方法提供了参考。 相似文献
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[目的]通过模拟肝、肾毒性的体外细胞试验,研究重组人乳铁蛋白是否对小鼠原代肝肾细胞具有毒性作用,为其进一步的安全性评价提供依据。[方法]采用模拟体外消化试验所得的重组人乳铁蛋白消化产物及重组人乳铁蛋白为受试物,牛乳铁蛋白为对照,以小鼠原代肝、肾细胞为平台,用MTT法检测受试物对细胞活性的半数抑制浓度（IC50）,研究细胞毒性剂量-反应关系。[结果]在设定的试验条件下,未发现重组人乳铁蛋白对肝肾细胞存在靶毒性,结果能与已进行的亚慢性毒性试验相互印证。[结论]为对重组人乳铁蛋白的进一步安全性评价及其他转基因食品的安全性评价方法提供了参考。 相似文献
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铜(Ⅱ)与1,10-菲略啉和曙红Y相互作用,在370 nm处可见显著的共振光散射增强信号,且增强的散射强度与铜(Ⅱ)的浓度在10.4～127.1 ng/mL范围内成线性关系,据此建立了测定铜(Ⅱ)的共振光散射方法,检测限(3σ)为1.0 ng/mL.研究了体系酸度、离子强度等影响因素.利用本方法测定了自来水和江水中钼离子,相对标准偏差(RSD)小于3.0%. 相似文献
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在pH为4.6～5.0的BR缓冲溶液中, 甲氨蝶呤(MTX)能与Tl(Ⅲ)反应形成3∶1的螯合物, 此时将引起共振瑞利散射显著增强并出现新的RRS光谱, 最大散射波长位于335 nm处, 另在366 nm处有另一较强的散射峰. 在0.010～2.5 μg/mL范围内散射强度(ΔI)与MTX浓度成正比. 方法具有高灵敏度, 对MTX的检出限为3.1 ng/mL, 方法也有良好的选择性. 据此发展了一种灵敏、简便和快速测定痕量MTX的新方法, 并可用于人血清和尿液中MTX测定. 相似文献
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在pH为4．6～5．0的BR缓冲溶液中,甲氨蝶呤（MTX）能与T1（Ⅲ）反应形成3：1的螯合物,此时将引起共振瑞利散射显著增强并出现新的RRS光谱,最大散射波长位于335nm处,另在366nm处有另一较强的散射峰．在0．010-2．5μg／mL范围内散射强度（△I）与MTX浓度成正比．方法具有高灵敏度,对MTX的检出限为3．1ng／mL,方法也有良好的选择性．据此发展了一种灵敏、简便和快速测定痕量MTX的新方法,并可用于人血清和尿液中MTX测定． 相似文献
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乳中掺尿素快速检测方法影响因素的探索 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]部分不法奶商在原料乳中加水后同时加尿素来提高蛋白质含量及增加密度,快速检测乳中掺尿素,找出并拒收这部分掺假异常乳.[方法]对年乳掺尿素的检测方法(格里斯法)所用的试剂浓度、用量、搭配比例进行筛选,对掺不同浓度尿素的牛乳采用试管法进行检测比较.[结果]用1;亚硝酸钠溶液0.4mL的剂量,格里斯试剂用量为0.2 g,浓硫酸用量为1 mL,对掺尿素乳检测的结果比较明显,尿素最低检出量为0.04;,能方便、快速的检测出牛乳掺尿素.[结论]该法用于牛乳掺尿素的检测,操作简单,检测快速,灵敏度较高,检测成本低,适用于各奶站及牛乳检测机构的快速检验. 相似文献
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在pH=2.8~3.4的Britton-Robinson(BR)缓冲溶液中,乙基紫(EV)与苋菜红(AT)形成3∶1的离子缔合
物,导致双波长共振瑞利散射(DWO-RRS)显著增强,并产生新的RRS光谱.在最大RRS峰334nm 和374nm 处,
散射增强程度(ΔI)与AT的质量浓度在0.1~6.0μg/mL范围内成良好的线性关系,检出限为12.9ng/mL(RRS,
334nm)、12.4ng/mL(RRS,374nm)、6.3ng/mL(DWO-RRS,334nm 374nm).据此建立了灵敏度高、选择性
好、快速准确测定AT的光散射新方法,适用于饮料中AT含量的测定.研究了RRS光谱特征和适宜的反应条件,
并对EV与AT的结合模式进行了讨论. 相似文献
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在pH为2.0～7.0的水溶液中,硫化镉纳米微粒[(CdS)n]与氨基糖苷类抗生素阿米卡星(AMK)、卡那霉素(KANA)、妥布霉素(TOB)和庆大霉素(GEN)借静电引力、疏水作用力结合,形成粒径更大的聚集体,导致共振瑞利散射(RRS)的增强并产生新的RRS光谱,最大RRS峰位于289 nm(AMK体系)、291 nm(KANA和TOP体系)和287 nm(GEN体系).在一定条件下,RRS散射强度(△I)均与药物的浓度成正比,反应具有高灵敏度,对于4种药物的检出限在7.7～8.8 ng/mL之间.其中(CdS)n-AMK体系灵敏度最高,对AMK的检出限为7.7 ng/mL.据此发展了一种用纳米硫化镉作探针,灵敏、简便、快速测定氨基糖苷类抗生素药物的共振瑞利散射新方法. 相似文献
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乳铁蛋白肽是乳铁蛋白在酸性条件下经胃蛋白酶裂解,从N端释放的具有两亲性的阳离子多肽,具有广谱抗菌等诸多生理功能。目前,乳铁蛋白肽主要是通过水解乳铁蛋白来获得,成本昂贵,转基因技术是大规模生产乳铁蛋白肽的最佳途径,试验比较了常用碳源和氮源对已构建的基因工程菌的菌体生物量及蛋白表达量的影响,并采用正交试验对工程菌的发酵与诱导表达条件进行优化。结果表明:可溶性淀粉和牛肉膏可以提高菌体生物量,并且具有较高的融合蛋白表达量,所以分别采用淀粉和牛肉膏作为发酵培养基的碳源和氮源。正交试验结果表明可溶性淀粉7 g/L、牛肉膏30 g/L、氯化钠6.7 g/L,发酵温度37℃、诱导时间8h和转速200 r/min时可得到较高的菌体生物量和融合蛋白表达量。 相似文献
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在0.05 mol/L HCl和2.0 mg/mL Triton X-100介质中, 氯化钡与硫酸链霉素(STP)在加热条件下反应生成BaSO4微粒, 导致溶液的共振瑞利散射(RRS)强度急剧增强, 并产生新的RRS光谱, 最大散射峰位于338 nm附近. 在0.01～4.0 μg/mL浓度范围内, 反应体系RRS强度与药物浓度成正比. 反应具有较高的灵敏度, 对STP的检出限(3σ)为4.8 ng/mL. 研究了适宜的反应条件和影响因素, 并考察了共存物质的影响, 表明方法具有较好的选择性, 可用于蜂蜜中STP残留的检测. 相似文献