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1.
一种少量提取植物组织DNA的快速方法 总被引：12，自引：0，他引：12
为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。 相似文献
2.
[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。 相似文献
3.
梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
中国梨属植物资源丰富,RAPD技术已广泛用于梨资源遗传多样性研究.通过对不同部位提取的DNA纯度进行测定,并进行RAPD扩增分析,为 RAPD技术在梨属种质资源中的应用提供参考.以鸭梨和杜梨为试验材料,利用CTAB法对其幼叶、老叶及韧皮部等不同组织或同一组织的不同时期进行了基因组DNA的提取,并对其进行了RAPD反应的比较.所提取的鸭梨的幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNA OD260/OD280的比值分别为2.0、1.8、1.7;杜梨幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNA OD260/OD280的比值分别为1.9、1.8、1.6.二者都能成功进行RAPD扩增,且扩增结果基本一致.利用CTAB法从鸭梨和杜梨的幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部提取的DNA均能成功进行RAPD扩增,且结果基本一致. 相似文献
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中国李基因组DNA提取方法的优化 总被引：10，自引：0，他引：10
3种常用的植物基因组DNA提取方法在中国李上的实验，结果表明：改良陈大明法提取的DNA纯度高，产率高。为满足植物样品较少时提取DNA的需要，将该法进一步优化的结果表明，不使用液氮研磨而是在低温条件下将组织捣碎的微量法同样提取出了产率高、纯度高的DNA，完全满足RAPD扩增的需要。裂解缓冲液中NaCl的浓度以1．1mol／L提取DNA的产率最高，且DNA的质量与其他浓度之间没有明显差异。 相似文献
6.
天冬药材基因组DNA提取方法研究 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]从天冬药材中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。[方法]分别采用改良CTAB法、SDS法以及植物基因组DNA提取试剂盒法提取天冬药材基因组DNA;通过电泳、DNA浓度与纯度检测以及RAPD扩增效果确定天冬药材基因组DNA的最佳提取方法。[结果]CTAB法提取的基因组DNA较完整,DNA浓度与纯度均较高,可获得丰富的、清晰的RAPD条带。[结论]CTAB法为天冬药材基因组DNA提取的最佳方法,提取的DNA可用于天冬RAPD分析,该方法可为其他药材基因组DNA提取提供参考。 相似文献
7.
[目的]比较4种提取橡胶叶基因组DNA方法,为后续研究根据需要采用不同的DNA提取方法提供依据。[方法]分别采用TIANGEN新型植物基因组DNA提取试剂盒提取法、E.Z.N.A.TMHigh Performance（HP）Plant DNA Kit提取法、CTAB法、改良的CTAB法提取橡胶基因组DNA,通过紫外分光光度计测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并通过电泳和酶切检测。[结果]采用改良的CTAB法提取的橡胶基因组DNA纯度最高,质量最好;采用其他方法所得的基因组DNA均有不同程度的多糖多酚以及蛋白的污染。[结论]采用改良的CTAB法所提取的橡胶基因组DNA因其完整性好、浓度高、纯度高可用于对DNA质量要求高的试验中。若是后续研究对DNA质量要求不高,则可以选择试剂盒,省时省力。 相似文献
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[目的]确定白木香愈伤组织与叶片DNA的快速提取方法.[方法]用TE、ES1、ES2 3种提取液及相应的方法提取叶片和愈伤组织总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,通过普通PCR及荧光定量PCR检查DNA的可用性,并将PCR产物经克隆测序验证.[结果] ES1法提取的叶片和愈伤DNA条带清晰,纯度较高;普通PCR和荧光定量PCR可扩增出200和600bp左右的目的条带.ES2法提取液电泳不能检测到DNA条带,但PCR可扩增出愈伤组织200bp左右目的条带.TE法得到的提取液检测不到DNA条带且PCR不能得到目的条带.[结论] ES1提取液及相应的提取方法可用于白木香愈伤和叶片DNA高通量快速提取,为沉香属植物种质研究和分子研究奠定基础. 相似文献
10.
采用6种方法对太湖底泥基因组DNA进行提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定和PCR扩增效果等反映DNA纯度和质量的指标,综合分析不同提取方法的优劣.结果显示,在提取过程中使用溶菌酶优于使用蛋白酶,冻融和TENP前处理过程耗时且效果不佳,二次沉淀在提高DNA纯度中起关键作用.结果表明,溶菌酶-SDS-二次沉淀法是一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法,提取的DNA质量好、纯度高,更胜于包括土壤DNA快速抽提试剂盒在内的其他5种方法,可直接用于对DNA质量要求较高的后续试验中. 相似文献
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自来水的软化处理在葡萄组织培养中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
用软化水制备B5培养基对红地球葡萄试管苗进行了培养。结果表明,自来水添加K3PO4·3H2O,0.6 g/L+煮沸5 min的软化效果最佳,Ca2+离子浓度由84.75 mg/L降至2.66 mg/L,Mg2+离子浓度由26.62 mg/L降至8.85 mg/L,硬度由18°降低为2.37°。用该软化水配制的培养基,试管苗生长正常,株高、茎粗优于用蒸馏水配制的培养基。用K3PO4·3H2O软化的自来水可应用于葡萄试管苗的组织培养。 相似文献
12.
石灰花楸的快繁技术研究 总被引：4，自引：0，他引：4
以石灰花楸带芽茎段为试验材料 ,研究了石灰花楸组织培养和快速繁殖的适宜条件。试验表明 ,芽启动培养基为改良MS +2 0mg/L 6 BA +0 5mg/LNAA、在春季取材时 ,启动率达 90 %以上 ;最佳继代培养基为 1/2MS +1 5mg/L 6 BA +1 0mg/LNAA ,增殖系数大于 4 ;生根培养基用添加 1 0mg/LIBA +0 1mg/LNAA +0 5mg/L活性炭 +10 g/L蔗糖的 1/2MS时为宜 ,生根率达 75 %以上。 相似文献
13.
以粉菠萝冠芽、幼叶为外植体材料,采用外加不同梯度浓度激素的完全培养基(MS)进行组织培养研究。结果表明,MS+BA1.0 mg.L-1+IBA0.1 mg.L-1为最佳丛生芽养基;MS+BA0.2 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1为最佳芽增殖培养基;1/2 MS+NAA0.5 mg.L-1为最佳生根培养基。通过对再生植株的分子标记研究表明,基因组没有发生变化,表明通过粉菠萝体细胞植株再生苗同粉菠萝原生苗没有明显的差别。 相似文献
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鳄梨组织培养繁殖体系优化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为满足市场需求,以鳄梨饱满茎段为外植体采用组织培养方法进行优质种苗繁育,对于该种的产业发展和应有具有重要意义。试验筛选了无菌株体系建立、诱导潜伏芽萌发、丛生芽继代增殖和生根培养较适培养基配方。结果表明：诱导鳄梨无菌株系建立较适培养基为WPM＋1.0 mg?L－16￣BA＋0.3 mg?L－1NAA＋0.5 mg?L－1ZT＋2％蔗糖＋0.2％活性炭＋0.65％琼脂;诱导潜伏芽萌发较适培养基为WPM＋2.0mg?L－16￣BA＋0.5mg?L－1NAA＋1.0 mg?L－1ZT＋2％蔗糖＋0.2％活性炭＋0.65％琼脂,诱导出芽率达到54％;丛生芽继代增殖培养较适培养基为WPM＋3.0 mg?L－16￣BA＋0.3 mg?L－1NAA＋1.0 mg?L－1ZT＋2％蔗糖＋0.2％活性炭＋0.65％琼脂,增殖率达到3.70;幼苗生根较适培养基为1/2WPM＋0.5 mg?L－1 IBA＋0.5 mg?L－1 NAA＋2％蔗糖＋0.2％活性炭＋0.65％琼脂,生根率达到90％。炼苗移栽60 d后成活率为96％。该试验获得的培养基配方,可培养出完整植株,短期内获得大量优质种苗。 相似文献
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龙牙楤木组织培养与快速繁殖技术研究 总被引：5，自引：0，他引：5
对龙牙木匆心 木 [Araliaelata (Miq)Seen]的叶片、叶柄和幼茎进行组织培养 ,结果表明 :用叶片进行组织培养的效果最好 ,愈伤组织最高诱导率达 3 7.1%;最适诱导培养基为MS +6-BA 1.0mg/L +2 ,4-D 1.0mg/L ;最适分化培养基为MS +6-BA 2 .0mg/L +2 ,4-D 1.0mg/L ;最好的继代增殖材料为幼根。试验还发现 :用 40 μg/L的硫酸链霉素可以有效防止细菌的污染 ;5g/L的活性炭防止褐变效果最好 ;把握好琼脂的用量及适当降低 6-BA的含量可以降低玻璃化现象的发生频率。 相似文献
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国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术 总被引：1，自引：0，他引：1
采用不同培养基对国兰"绿蕙红舌"的种子进行组织培养试验研究,综合分析不同培养基配方在国兰"绿蕙红舌"组织培养过程中对种子萌发与原球茎诱导、原球茎继代增值、原球茎分化及生根壮苗的影响。结果表明,种子萌发与原球茎诱导最适宜培养基为MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+水解酪蛋白100 mg·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎继代增值最适培养基为KC+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+活性碳2g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎分化最适培养基为KC+BA1.0 mg·L-1L+NAA 0.2mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;生根壮苗最适培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1。以上培养基pH均为5.1～5.4。 相似文献
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对番茄与茄子嫁接接合部组织进行了悬浮培养.结果表明,将切取的嫁接接合部组织接种在含有1.0 mg/L 2,4-D和0.5 mg/L 6-BA的MS液体培养基上没有褐化死亡且能形成黄色颗粒状的愈伤组织,但将愈伤组织接种在含有2.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA和0.1 mg/L NAA的分化培养基上,不能分化出芽;将嫁接接合部组织刮下接种在含有0.5 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D或2.0 mg/L 6-BA,0.1 mg/L IAA两种液体培养基上,均能促使愈伤组织的增殖,将愈伤组织接种在含有2.0 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA和0.1 mg/L NAA的分化培养基上,可以分化出芽,且在分化的芽中获得了变异. 相似文献
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