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利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克（M＋PAC）为试验Ⅲ组,PBS＋佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组（P〈0.01）;Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异（P〈0.05）;但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著（P〈0.05）,但都极显著高于对照组（P〈0.01）;肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组〉Ⅰ组〉Ⅲ组〉对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2019,(1)
为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。 相似文献
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研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株重组蛋白p65的免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株P65基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28a-P65,经原核表达并纯化获得的重组蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫注射小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价;选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验。经间接ELISA证明,重组蛋白p65具有良好的免疫原性,血清效价为1∶12 800。攻毒试验证明,p65重组蛋白疫苗的保护率可达80%,证明重组蛋白p65具有良好的免疫原性。 相似文献
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检验猪肺炎支原体强毒株与弱毒株感染后呼吸道sIgA抗体活性,并比较其抗体分泌规律差异。分别使用猪肺炎支原体强毒JS株和弱毒168株接种实验猪,同时设置健康猪为对照组,按时采集鼻拭子样本。通过ELISA检测0,2,4,7,14,21,28,35,42,49和56d特异性sIgA抗体滴度,比较两组抗体分泌规律。结果显示,在接种4~7d之间,强毒组已出现阳性猪,14d时所有猪呈感染阳性。而弱毒组在14~21d之间开始逐渐出现阳性猪,35d时80%左右的猪呈阳性感染,随后下降。并且强毒组抗体平均滴度高于弱毒组。结果显示,强毒转阳更早,抗体滴度更高,持续时间更长;弱毒为猪支原体肺炎弱毒疫苗株,该菌株同样保持了良好的免疫原性,可刺激呼吸道黏膜产生特异的sIgA,但黏膜抗体转阳时间较晚,滴度较低。强弱毒株在黏膜抗体分泌方面的差异有助于临床上对猪肺炎支原体的感染以及活疫苗免疫进行区别鉴定。 相似文献
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猪瘟和猪呼吸道病综合征（PRDC）给当前猪场造成重要威胁,猪瘟疫苗和猪肺炎支原体疫苗是重要的防制工具。由于两种疫苗同时注射有利于减少猪群应激并减轻劳动强度,本试验旨在探讨仔猪3周龄时同时注射猪瘟疫苗和肺炎支原体疫苗对猪瘟抗体滴度变化的影响。选择3头同期分娩母猪,将每头母猪所产12头仔猪随机平均分到A、B、C、D这4个组。4个组都在3、8周龄注射猪瘟疫苗。A组只注射猪瘟疫苗;B组和C组在1、3周龄接种猪肺炎支原体疫苗,3周龄时猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗同时注射,B组为两种疫苗分点注射,C组为混合注射;D组在2、4周龄注射猪肺炎支原体疫苗。统计分析表明,10周龄和13周龄时4个组猪瘟抗体滴度差异不显著,说明猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗同时注射并不干扰猪瘟抗体的生成。另外发现,在母源抗体水平较高的情况下,3周龄接种猪瘟疫苗会受到母源抗体的部分干扰。 相似文献
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根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株（ATCC 25934或NCTC 10110）,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列。经测序确认后,克隆入原核表达载体PET-32a（＋）的ECORI和Xho I位点之间,转化宿主菌8L21,将筛选出的阳性克隆用IPTG诱导,通过SDSPAGE电泳进行鉴定,结果表明。P97蛋白基因获得了表达。这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断以及新型疫苗的研制提供了重要条件。 相似文献
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猪肺炎支原体DJ-166株的分离鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
从山西某猪场采集疑似猪支原体肺炎肺组织病料,接种CH培养基培养,克隆纯化获得一株菌株。该菌株经PCR、培养特性、生化特性和血清学特性试验鉴定为猪肺炎支原体,命名为DJ-166株。该分离菌株在人工合成培养基上传8代稳定后,活菌计数达到108CCU/m L;菌液培养物气管注射猪后,致病性较弱;免疫原性试验证明该分离菌株具有良好的免疫原性,此结论为猪支原体肺炎疫苗的研究提供了必要条件。 相似文献
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郑嘉清 《国外畜牧学(猪与禽)》2002,(3):55-56
由猪肺炎支原体 (Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ)引起的猪肺炎一直对全世界养猪业造成着严重的健康问题。猪肺炎支原体感染还为继发性细菌感染创造了条件 ,因而还是猪呼吸道疾病复合症的重要成员。支原体性肺炎可造成巨大的经济损失 ,尤其是在猪的生长阶段。免疫接种是使生长猪获得坚实的抗支原体保护力的重要手段。然而 ,有些猪群中存在母源抗体会在疫苗诱导产生免疫力之前就与疫苗抗原相结合 ,从而严重干扰免疫接种的效力。对生长猪的母源抗体水平进行监测 ,在母源抗体水平降低到对主动免疫力的产生不至于形成干扰时才… 相似文献
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本试验目的是检测无针皮下接种疫苗所诱导的猪对临床疾病的抗性,并比较肌肉和皮下接种猪肺炎支原体疫苗时的血清学反应。材料与方法:在每一组试验中,猪都曾接种过1次或2次猪肺炎支原体疫苗,并且检测其血清学反应都为阴性。通过DAKO猪肺炎支原体EL ISA反应试剂盒来检测肌肉和皮下接种疫苗时的血清学反应,皮下接种疫苗的效果通过猪肺炎支原体异源强毒菌株的试验性呼吸激发来检测。试验结果:所有疫苗注射点的副反应都是最小的。猪通过有针和无针皮下接种疫苗与肌内接种疫苗相比,前者具有较高的猪肺炎支原体抗体滴度。无针皮下接种与不接种疫苗的猪相比,前者更具有低的肺病变分数和在支气管肺泡灌洗液中有较高的IgA和IgG滴度。单一皮下接种疫苗21 d后机体建立了免疫保护。无针皮下接种猪肺炎支原体疫苗较安全且有效,不需要剃毛或者其他的皮肤准备工作。结论:如果配制小剂量的疫苗(如0.2 m l)对猪进行无针皮下注射是可行的。 相似文献
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[目的] 克隆表达绵羊肺炎支原体DnaJ 基因,研究其表达产物的免疫原性。[方法] 以绵羊肺炎支原体内蒙古分离株NM03-MO株基因组DNA为模板,克隆其DnaJ 基因序列,对蛋白质序列进行分析比对及三维结构预测;将该基因片段连接至pColdⅠ表达载体,构建pColdⅠ-DnaJ 原核表达载体表达重组DnaJ蛋白并纯化,通过Western blot技术检测其与支原体抗体阳性血清的结合活性。[结果] NM03-MO株DnaJ蛋白序列与绵羊肺炎支原体序列同源性最高,但三维结构存在一定差异,重组DnaJ蛋白与绵羊肺炎支原体阳性血清有较好的结合活性,初步证明该蛋白具有免疫原性。[结论] 绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白被首次成功克隆表达,且具有较好的免疫原性,为后续分子致病机制研究及新型疫苗研制奠定基础。 相似文献
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从典型猪肺炎支原体病变肺组织传代分离到一株支原体,经培养特性、血清学鉴定、生化鉴定、PCR检测及测序分析证明其为猪肺炎支原体,纯化后命名为S株。将S株P46基因和P97基因R1区的氨基酸序列与其他菌种的相应序列进行同源性分析,该菌株P46基因氨基酸序列与其他菌种同源高达99%以上,P97基因R1区的氨基酸重复数为11个,不同于其他菌株;免疫原性试验结果表明该菌株具有良好的免疫原性。 相似文献
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利用疫苗和药物,不需要将猪群全部淘汰将猪肺炎支原体从肥育猪群中根除。对3 243头来自猪肺炎支原体阴性猪群的保育猪在被转入猪肺炎支原体阳性肥育猪群前一次性注射灭活疫苗。在第1群已免疫的猪肺炎支原体阴性猪群被转入猪肺炎支原体阳性猪群时,对阳性猪群使用抗生素类药物。所有猪群按猪舍采用全进全出方法进行管理,猪舍内通风和清粪采用单独的处理系统。之后猪场只从猪肺炎支原体阴性母猪群所生产且没做疫苗免疫的仔猪群引猪。血清学调查结果显示,5年半无猪肺炎支原体抗体阳性。结论:这项无需使用全部淘汰方法建立无猪肺炎支原体猪群的根除计划已经获得成功。 相似文献
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本试验旨在探究猪肺炎支原体疫苗对沂蒙黑猪和杜洛克猪免疫效果的差异。试验分别选取山东省临沂市某沂蒙黑猪养殖场和杜洛克猪养殖场各11头抗猪支原体抗体阴性母猪所产的132头仔猪为研究对象,施以相同的免疫处理,比较血液抗猪支原体抗体水平及攻毒后猪肺病变指数情况。结果:沂蒙黑猪试验组的血液抗猪支原体肺炎抗体阳性率显著高于杜洛克猪试验组,差异有统计学意义(P0.05);攻毒实验后猪肺部病变指数减少率显著高于杜洛克猪试验组,差异有统计学意义(P0.05)。因此,与杜洛克猪相比,沂蒙黑猪对猪肺炎支原体疫苗的敏感性更高,免疫效果更好。 相似文献
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为了筛选出特异性好和敏感性高的ELISA用猪肺炎支原体抗原蛋白,作者分别将猪肺炎支原体灭活疫苗和168株菌活疫苗分别经肌肉和肺内注射途径免疫猪,免疫后7、15、30和56d采集分离血清。以P97R1、P36、P46、DnaK单个蛋白和混合蛋白为猪支原体肺炎血清抗体ELISA用特异性蛋白抗原,与猪肺炎支原体IDEXX抗体检测试剂盒比较检测免疫后抗体的发生规律,并对检测结果进行对比。结果表明,P36和P97R1能够检测出比较高的母源抗体水平;DnaK和P46检测的抗体滴度变化趋势相一致,且检测的抗体高滴度维持时间较长;与其它抗原相比,混和蛋白在56d时检测到较高的抗体水平。混合抗原的检测结果与IDEXX具有较高的符合率,但检测敏感性比IDEXX高,且较IDEXX符合抗体变化规律。结果表明混合蛋白具有较高的检测敏感性,可以更加准确地监测该病的感染或免疫状态。 相似文献
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猪支原体肺炎又名"猪喘气病",对养猪业危害巨大,疫苗免疫是预防该病最有效的方式。为了评估市场上两种猪支原体肺炎疫苗的临床效果,本试验从仔猪日增重、成活率、料肉比以及血液抗体水平等方面进行了对比,结果表明试验组支原体灭活苗的效果要优于对照组。 相似文献