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目前,对于精子线粒体膜电位(MMP)的检测分析,通常采用JC-1单独染色,这种染色方法可以准确地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态。本研究采用JC-1与碘化丙啶(propidium iodide,PI)2种荧光染料联合染色的方法,对6种不同保存条件下的猪精子进行染色,分别使用流式细胞仪与荧光显微镜2种检测手段对猪精子MMP进行检测。结果表明:死亡精子头部呈红色,高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色。2种检测手段的结果比较显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP死精子,但对于活精子MMP的高低检测效果不甚理想。相反,流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,但对于死精子MMP高低的检测仍较困难。因此,对于猪精子线粒体MMP的检测,采用JC-1与PI双染的方法,用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面的反映出精子线粒体的功能状态。 相似文献
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采用不同浓度梯度的中性红、龙胆紫及尼罗蓝染液对长白公猪精子染色,根据染色现象及精子活率,探究3种染料较为理想的作用时间和浓度。结果:0.01%中性红染色2 min后活精子着红色,死亡精子不着色;0.05%龙胆紫染色1 min后活精子着淡蓝色,死亡精子深紫色;0.1%尼罗蓝染色2 min后活精子着淡蓝色,死亡精子不着色。3种情况下精子的存活率与空白对照组比较无显著差异(P0.05)。试验表明,以上3种染色条件能清晰地区分存活精子和死亡精子,可用于测定精子活率。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2014,(17)
为了改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度(0,0.50,1.00,1.50,2.00 mg/mL)的水蛭素,研究在4℃低温保存条件下其对猪精液品质的影响。试验采用PI荧光染色检测精子活率,利用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率及采用低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整率。猪精液保存7 d,每天检测上述指标,试验重复5次。结果表明:稀释液中添加一定浓度的水蛭素在一定时间内有利于维持精子的活率、活力,降低精子的畸形率,提高精子的顶体完整率和质膜完整率,并且水蛭素浓度越高,保存效果越好。因此,在本试验条件下,2.00 mg/mL是水蛭素在猪精液低温保存时的最佳添加浓度。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(11)
为了建立一种操作简单、结果直观、准确稳定的绵羊消化道线虫幼虫活力检测方法,试验采用亚甲基蓝(C_(16)H_(18)ClSN_3,MB)、台盼蓝(C_(34)H_(24)N_6Na_4O_(14)S_4,TB)、龙胆紫(C_(25)H_(30)ClN_3,GV)三种不同性质的鉴别染色剂对在含有0μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.3μg/mL丙硫咪唑培养液中培养12 h的幼虫进行鉴别染色,观察和记录亚甲基蓝、台盼蓝、龙胆紫对低活力幼虫、死亡幼虫和高活力幼虫的染色结果,并对比分析染色区别。结果表明:亚甲基蓝染色后的低活力或死亡幼虫呈淡蓝色或蓝色,高活力幼虫为无色,且随着丙硫咪唑浓度的升高幼虫染色率也随之升高,分别为1.14%、15.74%、33.99%、44.69%;而用台盼蓝、龙胆紫染色后不同活力幼虫无明显区别。说明可以根据亚甲基蓝染色法的染色效果直观鉴别体外培养的消化道线虫幼虫活力,有效避免了如主观判断差异、结果不稳定、判断过程复杂等弊端,有望将其用于线虫耐药性检测,并在生产实践中推广应用。 相似文献
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东北民猪是我国地方良种之一,为了进一步探索该品种的种质特性,本文采用品种对比的方法,论述了东北民猪的精液品质。其结果是:东北民猪平均一次射精量(毫升)为285.83±16.4,其中纯精量(毫升)为232.5±16.6、胶质量(毫升)为53.3±2.6;精子活率为0.76±0.02;密度(亿/ml)为 2.2625±0.14;精子畸形率(%)为7.11±0.23;死精子百分数(%)为7.52±0.34;活精子百分数(%)为92.48±0.34;精子存活时间(小时)为56.87±2.79,精液的 pH 值为7.6。其中纯精量和精子存活时间明显优于长白猪,但是东北民猪射精量变异幅度较大。东北民猪是我国北方的地方优良猪种之一,素以繁殖力高,耐寒、耐热、耐粗饲、抗病力强、适应性广和经济杂交效果好而闻名,其中尤以繁殖力、杂种优势、抗逆性等显著优于国内外其他品种。猪的繁殖性状是重要的经济性状之一,许多人对其曾进行大量的研究和报导,但迄今为止,关于东北民猪的精液品质,尚未见详细报导。为了进一步开展种质研究工作,本试验采用品种对比方法观察了东北民猪与长白猪(Landrace)的射精量,精子的活力与密度及存活时向、畸形率等七项指标,为进一步研究东北民猪的精液品质和民猪保种工作提供科学依据。 相似文献
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在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。 相似文献
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为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。 相似文献
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试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。 相似文献
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为了探究芝麻酚对猪精液冷冻保存效果的影响,用手握法采集成年杜洛克公猪精液,预处理后添加不同浓度芝麻酚(0,0.05,0.10,0.15,0.20和0.25g/L)的冷冻稀释液进行稀释,冷冻-解冻后检测猪精子活率、质膜完整性(低渗肿胀试验)、线粒体活性、顶体完整性、DNA完整性以及超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性等。结果显示:当芝麻酚添加浓度为0.20g/L时,解冻后精子活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率为最高,相比较于对照组,分别提高了12.67%、19.07%、18.78%和14.09%(P0.05);MDA含量最低为2.04nmol/mL(P0.05);SOD和GSH-Px酶活最高为73.04U/mL和237.59U/I(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.25g/L时,DNA完整性最高为72.46%(P0.05)。当芝麻酚添加浓度为0.15g/L时,CAT酶活最高为3.44U/mL(P0.05)。结果表明:与对照组相比较,在猪精液冷冻稀释液中添加适当浓度的芝麻酚能显著提高解冻后猪精子活率、功能完整性和抗氧化能力(P0.05),且当芝麻酚的浓度为0.2g/L时对猪精子冷冻保存效果最好。研究结果表明,芝麻酚作为一种天然抗氧化剂,对猪精子冷冻保存具有良好的效果。 相似文献
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为了测定活精子的顶体状况,试验将猪、羊精子用常用的苯胺黑—四溴荧光素(曙红)法(NE)和姬姆萨法(G)相结合,进行染色评定。结果,公猪精子用NE和NEG染色后,其中活精子比例间差异不显著。将经NEG染色评定的活精子比例与羧基双乙酸盐(carboxyfluorescein diacetate CFDA)/propidi- 相似文献
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倪俊娟 《河南畜牧兽医(综合版)》2014,(4):23-24
精子畸形率为评定猪精液品质的重要指标,精子畸形率≤20％才合格.精子畸形率过高将直接影响到猪人工授精的受胎率.笔者通过总结姬姆萨染色制片过程中的经验体会,提出了能够提高精子染色效果的方法,通过提高制片染色质量提高精子畸形率检查的准确度,能够减少由于制片染色不当造成的误判. 相似文献
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微生物发酵床养殖是一种生态养殖模式,在冬天具有很好的保暖作用,减少了日粮的损耗,但在夏天,缺少散热的功能,对育肥猪和种猪的养殖影响较大。实验对某微生物发酵床生态养猪场的4头种公猪,通过连续观测公猪舍环境温度、垫料温度及公猪的精神状态,检测公猪血液生化指标、精子活率、精子质量、精子密度及生化指标项目。结果发现1号公猪的总蛋白水平较高,其它生化指标差异不显著;4头公猪中只有4号公猪精子活率达到70%,其余公猪精液中精子活率低于10%,大量死精。结果表明微生物发酵床养殖对公猪繁殖性能的影响较大。 相似文献
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在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳. 相似文献
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试验比较了在冷冻稀释液中添加不同浓度海藻糖(0.025,0.05,0.1 mol/L)以及添加10 mg/L维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响.结果:(1)添加0.025 mol/L海藻糖组的精子冻后活率与复苏率分别跟对照组相比无显著差异(P>0.05),但添加浓度为0.05,0.1 mol/L的海藻糖组的精子活率和复苏率显著低于对照组(P<0.05).(2)在猪精液冷冻保存稀释液中,添加维生素C组的精子冻后活率和复苏率极显著高于对照组(P<0.01).表明在猪精液冷冻液中,添加0.025,0.05,0.1 mol/L 3种不同浓度的海藻糖对猪精液没有起到保护作用,其中后两者对之有降低的作用;而添加10 mg/L维生素C可取得较好的冷冻保存效果. 相似文献
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为了寻找一种可较好地保护精子的天然抗冻剂,通过在猪精液的冷冻基础液中添加不同浓度的海带多糖,研究冷冻后猪精子的活率及线粒体活性、精子质膜和顶体的完整性等各项参数指标,探讨不同浓度的海带多糖对猪精液冷冻保存效果。 相似文献