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以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法 总被引：25，自引：2，他引：25
报道了将Ｄｒ Ｍａｒｃ Ｚａｂｅａｕ的ＡＦＬＰ技术中的ＤＮＡ提取方法用于以ＰＣＲ技术鉴定转基因植物－拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约１ｈ可完成植物ＤＮＡ的提取，样品用量仅为３０￣１００ｍｇ，产量可达３０￣８０μｇ／ｇ。粗提ＤＮＡ（溶于１０μＬ ＴＥ缓冲液）不必经过纯化，用ＴＥ缓冲液稀释５￣１０倍即可直接用于ＰＣＲ分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以ＰＣＲ法鉴定转基因植 相似文献
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桃属植物随机扩增多态性DNA分析的最适反应条件 总被引：6，自引：3，他引：3
以Ｙｕｕｚｏｒａ 桃为试材对桃属植物随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 分析的最佳反应条件进行了研究．结果表明桃属植物ＲＡＰＤ分析的最佳反应条件为：总反应混合溶液５ｕＬ 时,添加模板ＤＮＡ１０ ～３０ ｎｇ,Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶１ ～１ ．５ 个单位,随机引物１０ ～２０ ｐｍｏｌ,ｄＮＴＰ１００ ～２００ ｕＭ,ＭｇＣｌ２ ２ ．０ ～３ ．０ ｍ Ｍ 及５ ｕＬ１０ 倍反应缓冲液条件下扩增５０ ～５５ 个循环,能够获得具有良好的稳定性和重复性的ＤＮＡ扩增产物．ＰＣＲ反应溶液的各组成因素如低于最适浓度范围时会导致扩增带数的减少甚至无带,如高于最适反应浓度范围,则会出现带的弥散或缺失． 相似文献
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一种单子叶植物总DNA提取方法的改进及应用 总被引：17，自引：3，他引：17
本文报导了一种可用于多种单子叶植物总ＤＮＡ提取的简易方法，其特点是迅速简易、成本低、产量高、纯度好，所得粗提总ＤＮＡ产量达３００μｇＤＮＡ／ｇ组织，经ＲＮＡ酶（ＲＮａｓｅＨ）处理后，电泳检测未发现残余ＲＮＡ。该方法可用于不同用途的单子叶植物总ＤＮＡ的提取与纯化，如用于花粉管导入法分子育种的基因源植物总ＤＮＡ的提取、对转基因植物进行ＤＮＡ分析等研究。 相似文献
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菊属植物RAPD反应体系的建立 总被引：12，自引：0，他引：12
在ＲＡＰＤ反应中，有许多因素影响结果的稳定性和准确性．该文选取了菊属６种植物，对ＲＡＰＤ各种反应条件进行了摸索．结果表明：菊属植物较为理想的反应体系为：２０μｌ反应体积含１０ｍｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ为８．３），５０ｍｍｏｌ／ｌＫＣｌ，２ｍｍｏｌ／ｌＭｇＣｌ２，０．００１％ｇｅｌａｔｉｎ，２００μｍｏｌ／ｌｄＮＴＰ，５０～２００ｎｇ引物，０．７５～１．０单位（Ｕ）ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，２～１０ｎｇ基因组ＤＮＡ．在２０个核苷酸引物情况下，反应条件为：９２℃、３ｍｉｎ预变性；９２℃、４５ｓ，５０℃、１ｍｉｎ，７２℃、２ｍｉｎ，循环４０周；最后一次延伸为７２℃、１０ｍｉｎ．应用上述反应体系进行扩增反应，反应产物在２％琼脂糖凝胶上以５Ｖ／ｃｍ电场强度电泳２～４ｈ，获得了满意的ＲＡＰＤ图谱 相似文献
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通过花粉管途径将抗虫基因(CpTI)导入小麦的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
利用带有ＣｐＴＩ基因的ｐＡＰＣｐＴＩ－１－Ｄ质粒通过花粉管途径的不同方法导入冬小麦９２（８）８０２,种子发芽经４０ｍｇ／Ｌ卡那霉素液筛选,得到１８株绿苗,移栽后成活１０株。提取这１０株小麦植株叶片的ＤＮＡ,经ＰＣＲ检测和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交两次鉴定分析,证明去柱头滴加法中的５株小麦ＣｐＴＩ基因已整合到其基因组中,获得５株转基因９２（８）８０２小麦植株,长势良好,并得到饱满的种子。 相似文献
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11种野生苹果种质资源RAPD标记研究 总被引：2，自引：0，他引：2
利用Ｃ．Ｇ．Ａｌｐｈａ等的ＤＮＡ微量提取法,提取了山荆子ＭａｌｕｓｂａｃｃａｔａＢｏｒｋｈ．等１１个苹果属植物野生种类的ＤＮＡ,并用５对引物对所研究材料的ＲＡＰＤ标记进行了研究。探讨了叶片中富含多酚类化合物的苹果植物叶片ＤＮＡ的提取及纯化方法,并初步建立了野生苹果ＲＡＰＤ标记的ＰＣＲ反应条件。 相似文献
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鸡白细胞介素-2 cDNA克隆 总被引：7，自引：1，他引：7
用哺乳动物细胞表达克隆系统克隆了鸡ＩＬ－２ｃＤＮＡ。以ＣｏｎＡ（２０μｇ／ｍＬ）诱导ＳＰＦ鸡脾脏淋巴细胞,第２０小时收集细胞,提取ｍＲＮＡ,以ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＰｌａｓｍｉｄＳｙｓｔｅｍｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒合成ｃＤＮＡ,定向连结于穿梭质粒ｐＳＶ·ＳｐｏｒｔⅠ,构建ｃＤＮＡ文库。将文库分组提取重组质粒,转染ＣＯＳ－７细胞,表达ｃＤＮＡｓ。以淋巴细胞增殖试验检测表达产物ＩＬ－２活性。经过３轮筛选,获得１４个具有ＩＬ－２活性的克隆。选择其中４个进行酶切分析,结果显示这４个ｃＤＮＡ大小分别为１．５,１．０,０．８和０．８ｋｂ。 相似文献
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用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中 相似文献
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采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ... 相似文献
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切花菊耐热性鉴定方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。 相似文献
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生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例 总被引：5，自引：2，他引：3
李慧云 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2004,30(2):165-168
为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传． 相似文献
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利用已构建的过表达拟南芥(Arabidopsis)GEF7基因植株,在光照培养箱中进行培养,并与野生型植株进行对比分析,对GEF7基因过表达植株的幼苗表型进行了观察分析。结果表明,GEF7基因过表达植株幼苗的根长比野生型对照明显增加;其子叶形态、数目和幼苗形态等方面均有异常表型,表明GEF7基因的功能与根的发育有关,并参与调控植物的发育过程。 相似文献
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《河北农业大学学报》创刊年代考 总被引：3，自引：0，他引：3
清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。 相似文献
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姬松茸碳源利用规律的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
试验采用麦秸培养基,系统研究了姬松茸在生长期间对碳源的利用规律。结果表明,姬松茸降解的有机物质绝大部分被菌体的呼吸过程消耗掉,绝对生物学效率较低;在菌丝生长阶段,木质素的降解速率大于纤维素和半纤维素,这对纤维素和半纤维素的降解十分有利;非木质纤维素组分在菌丝生长阶段被主要利用,而木质纤维素则是子实体生长阶段的主要碳源。且就整个栽培过程而言,姬松茸生长发育所需要的79.86%的碳源来自木质纤维素。 相似文献
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应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。 相似文献