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1.
为了探寻适于中华绒螯蟹Eriocheir sinensis卵巢蛋白质组学研究的总蛋白最佳提取方法,采用RC DC Protein Assay检测蛋白浓度、SDS-PAGE分析蛋白组成等,比较分析了用裂解液法Ⅰ、裂解液法Ⅱ和TCA/丙酮沉淀法提取中华绒螯蟹卵巢蛋白的效果。结果表明:应用3种方法提取的卵巢总蛋白浓度分别为15.59、13.05、0.65 mg/m L,用裂解液法提取的效果最佳,而TCA/丙酮沉淀法不适合用于中华绒螯蟹卵巢总蛋白的提取;SDS-PAGE电泳图谱进一步显示,用裂解液法Ⅱ提取的蛋白样品组成较为丰富,且重复性好,比较适合后续蛋白质组学研究。该研究结果可为中华绒螯蟹卵巢发育蛋白质组学研究提供参考。 相似文献
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《江苏农业科学》2016,(12)
为建立适合鹅掌楸胚性愈伤大规模蛋白质组研究,比较分析4种蛋白质提取方案:Mg/NP-40-三氯乙酸(简称TCA)/丙酮、TCA/丙酮、裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮,并进行蛋白质的聚丙烯酰腚凝胶电泳(简称SDS-PAGE)和双向电泳分析。SDS-PAGE图谱显示:裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮法分离高分子量蛋白质条带相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法少;Mg/NP-40-TCA/丙酮法和裂解液-Clean up法低分子量提取、分离效果较差。在SDS-PAGE基础上对Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法提取蛋白质样品进行双向电泳,结果表明:TCA/丙酮法得到的凝胶图蛋白质点分布均匀、背景清晰且纵横条纹较少,且TCA/丙酮法相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮法来说在小分子量蛋白质、碱性蛋白质分离方面有优势。同时随机选取双向电泳分离的蛋白质进行质谱分析,结果显示,TCA/丙酮法较适合鹅掌楸胚性愈伤蛋白质组的大规模分析。 相似文献
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《新疆农业科学》2017,(7)
【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。 相似文献
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《新疆农业科学》2017,(7)
【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。 相似文献
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利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性. 相似文献
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使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。 相似文献
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为了选择适用于水稻根部蛋白质组分析的样品制备方法,以水稻苗期幼嫩根尖为材料,采用TCA/丙酮沉淀法、Tris法、尿素/硫脲法对水稻根部总蛋白质进行提取并比对,通过Bradford法、SDS PAGE电泳技术对蛋白质含量和种类进行分析。结果显示,Tris法提取出的水稻根部蛋白质含量和种类明显少于其他2种方法;尿素/硫脲法和TCA/丙酮沉淀法提取的蛋白质种类和含量都较多,其中,尿素/硫脲法的蛋白质图谱中蛋白条带多,染色深而且很清晰,尤其适用于较低分子量蛋白质的提取,TCA/丙酮沉淀法则适于高分子量蛋白质的提取。因此,进行水稻根部总蛋白质组分析时,可选用尿素/硫脲法。 相似文献
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文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。 相似文献
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油松胚珠蛋白质提取分离技术的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
采用4种pH值和2种SDS浓度的Tris-HCl提取液、TCA/丙酮溶液对油松胚珠蛋白质进行提取.经SDS-PAGE电泳检测,提取液pH值对提取效果的影响与SDS浓度有关.低浓度SDS（0.2%）需要提高提取液的pH值,pH 8.8的效果最好.SDS浓度提高到2%,pH值对蛋白提取量影响不明显,电泳条带都很清晰,同时分子量为14.4、16.1、17.1 kD的蛋白条带明显增强.经IEF/SDS-PAGE凝胶电泳检测,TCA/丙酮沉淀法所得图谱效果好、干扰少、蛋白点数多;用pH 8.8 Tris-HCl提取液提取时,低浓度SDS（0.2%）比高浓度SDS（2%）所得图谱效果好. 相似文献
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为了获得纯化、完整的玉米叶绿体蛋白质,以玉米品种郑单958为试验材料,利用差速离心与蔗糖密度梯度法分离叶绿体,并对其纯度和完整度进行检测;通过光学显微镜直接观察叶绿体的形态结构并测定过氧化氢酶的活性及Hill反应速率,证明已分离出纯度较高、完整的叶绿体。随后采用2种不同的蛋白质提取方法分别提取玉米叶绿体总蛋白质,并用Bradford法进行蛋白质定量,SDS-PAGE电泳结果表明,TCA丙酮沉淀法对玉米叶绿体蛋白质的提取不充分,而TCA丙酮与酚抽提相结合法明显比TCA丙酮沉淀法效果好,提出的叶绿体蛋白质的条带数目多,丰度较高,并得到了较理想的玉米叶绿体双向电泳图。 相似文献
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以‘西域1号,甜瓜苗期根系为材料,分别采用改进的TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及SDS/酚提取法提取总蛋白,进行SDS电泳和双向电泳分离,扫描后的胶图利用Image Master 2D Elite 6.01软件进行分析,重点分析胶图总点数、匹配点数和差异蛋白点数.结果表明:Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法得到的总蛋白含量最高;TCA/丙酮沉淀法分离得到的蛋白条带和蛋白点数最少,且对分子量较高的偏碱性区域的蛋白提取效果差,与其他2种方法相比明显丢失了较多的蛋白.因此,进行甜瓜幼苗根系总蛋白质组分析时,可采用后2种方法,其中Tris/酚抽提法更简单易行. 相似文献
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为建立适宜茅苍术叶片蛋白提取和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的一套方法,采用直接提取法、三氯乙酸(TCA)-丙酮法、三羟甲基氨基甲烷(Tris)-丙酮法、Tris-饱和酚法提取茅苍术叶片蛋白,用Bradford(考马斯亮蓝)法测定蛋白含量结合提取时间、蛋白终产物的颜色等,在SDS-PAGE电泳结果的基础上对其进行比较分析。结果显示,直接提取法、TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、Tris-饱和酚法提取所得蛋白含量分别为28.916、61.291、50.558、92.558 mg/g。SDS-PAGE电泳结果显示,直接提取法电泳条带有8条,TCA-丙酮法有7条,Tris-丙酮法有11条,Tris-饱和酚法有14条,表明Tris-饱和酚法提取的蛋白种类最多。Tris-饱和酚法更适合茅苍术叶片的蛋白提取,为茅苍术蛋白质组学研究提供参考依据。 相似文献
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双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。 相似文献
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金心黄杨(Euonymus japonica L. cv. aureo-pictus)叶片总蛋白质提取及双向电泳技术 总被引：1，自引：0，他引：1
通过比较2种不同的植物叶片总蛋白质提取方法(三氯乙酸/丙酮法和酚法)和优化双向电泳各试验环节,建立金心黄杨叶片总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行质谱分析的双向电泳条件。结果采用优化后的酚法进行金心黄杨叶片总蛋白质的提取,IEF蛋白上样量150μg,SDS-PAGE采用12.5%T凝胶,电泳结束后用考马斯亮蓝G-250染色,Melanie 7.0软件分析后得到约274个可分辨蛋白点。 相似文献
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以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化.结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10％的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱.高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础. 相似文献
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通过采用三氯乙酸(TCA)/丙酮法、酚提取法、DTT/丙酮法3种提取方法提取番茄叶片可溶性总蛋白,用150μg和250 μg2种加样量、浓度为12.5％和15％的聚丙烯酰胺凝胶二向电泳进行电泳,发现TCA/丙酮沉淀法提取番茄叶片可溶性总蛋白、加样量为250μg、12.5％聚丙烯酰胺凝胶二向电泳效果较好,从而建立了番茄叶片总蛋白双向电泳技术优化体系.用该体系对转导碱蓬总DNA的耐盐转化番茄叶片全蛋白的差异分析,鉴定出6个蛋白差异点,其中5个特异蛋白在耐盐转化番茄中表达,1个特异蛋白在未转化番茄中表达. 相似文献
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红豆杉细胞蛋白质双向电泳样品制备方法的比较 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]探索适用于红豆杉愈伤蛋白质组学研究的样品制备方法。[方法]以红豆杉愈伤组织为材料,分别采角三氯乙酸（TCA）／丙酮沉淀法、Tris—HCl法和酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取其中的总蛋白,通过双向电泳（2DE）检测3种方法对总蛋白的提取效果。[结果]3种方法提取的蛋白样品2DE图谱显示的蛋白点数量均较多。TCA／丙酮沉淀法对蛋白质的提取率较高,2DE图像清晰,条纹少,拖带现象轻;Tris—HCl法提取的蛋白样品2DE图谱个别区域出现较轻的云片状聚集,并有轻微拖带现象;酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取蛋白样品的2DE图谱有条纹和拖带现象。[结论]TCA／丙酮沉淀法提取的蛋白质质量较高,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量大。 相似文献