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1.
通过生物学纯化与血清学鉴定(ELISA)得到5个大豆花叶病毒(SMV)分离物,利用RT-PCR法扩增其外壳蛋白(CP)基因片段并进行测序,结果表明:5个分离物CP基因全长均为795个核苷酸,编码产生265个氨基酸.同源性分析表明,5个分离物核苷酸序列同源性为91.1%～97.1%,由此推导的氨基酸序列同源性为98.1%～99.2%.结合5个分离物在8个大豆品种上的致病性反应得出,5个分离物在8个鉴别寄主上的致病性反应和序列差异的比较表明,分离物在8个鉴别寄主上致病性反应相差越大,其CP基因氨基酸序列差异就越大,由此证实SMV的CP基因与致病性反应之间有一定的联系. 相似文献
2.
鉴定了致病性差异明显的6个大豆花叶病毒分离物，对这些分离物外壳蛋白（CP）基因进行了测序。6个分离物CP基因全长均为795bp，推测的CP全长均为265个氨基酸残基。序列同源性比较表明，症状反应相同的各SMV分离物间，CP基因核苷酸和推测的氨基酸序列同源性分别为98.2%～99.6%、99.6%～100.0%；而症状反应不同的分离物间，CP基因核苷酸和推测的氨基酸序列同源性分别为90.4%～96.7%和97.7%～99.6%。结果显示，致病范围相近的分离物，序列同源性较高。 相似文献
3.
海南胡椒中黄瓜花叶病毒分离物的分子鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
通过间接酶联免疫法,从海南罹病胡椒植株中检测到黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV).从病叶中提取总RNA,用巢式RT-PCR方法扩增获得657 bp的CMV CP基因片段,并与pMDl8-T载体连接和转入大肠杆菌克隆,然后进行测序.序列分析结果表明,该分离物与CMV亚组I、亚组II之间的核苷酸序列同源性分别为92.54%～99.09%和76.97%～77.42%,推导氨基酸序列同源性分别为98.17%～100%和81.74%～82.65%.该分离物CP基因与印度胡椒分离物同源性相对较低,应属不同株系. 相似文献
4.
芝麻黄花叶病病原的分子鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
从芝麻黄花叶病株上分离得到花生条纹病毒2个分离物（Peanut stripe virus sesame isolate, PStV-se1和PStV-se2）,提取感病叶片的总RNA,RT-PCR扩增外壳蛋白基因（cp）片段。序列测定结果显示,cp基因含有861个核苷酸,编码分子量为32.4kDa的蛋白。2个株系cp基因与PStV其它株系核苷酸序列同源性为94.4%～99.9%,氨基酸序列同源性为93.7%～100%。株系间CP氨基酸序列系统进化树结果表明,芝麻分离物与中国其它寄主来源的PStV株系处于同一进化分支。 相似文献
5.
从福建农林大学甘蔗综合研究所培育的甘蔗品种福农95-1702中,采集表现花叶症状的甘蔗病叶,根据NCBI上已登录的甘蔗花叶病毒全长基因序列设计引物,利用RT-PCR和RACE技术进行全长基因克隆。结果表明,病毒分离物FJ10为高梁花叶病毒,全长不包括poly(A),有9 375 bp。整个基因只有一个开放读码框,编码成由3 071个氨基酸组成的多聚蛋白,FJ10含有一些与其它马铃薯Y病毒属病毒共有的氨基酸序列。序列分析结果表明,FJ10分离物与美国的分离物SrMV-H同源性最高,核苷酸序列同源性达91.2%,编码的多聚蛋白氨基酸序列同源性达96%,与来自中国浙江的甘蔗分离物核苷酸序列同源性为82%,氨基酸序列的同源性达89.6%。 相似文献
6.
大豆花叶病毒致病基因的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《大豆科学》2015,(5)
通过生物学纯化与血清学鉴定(ELISA)得到5个大豆花叶病毒(SMV)分离物,利用RT-PCR法扩增其CP、HC-Pro、P1和P3基因片段并进行测序。结果表明:5个分离物P1基因全长均为927个核苷酸,编码产生309个氨基酸。同源性分析表明,5个分离物核苷酸序列同源性为88.0%~99.9%,由此推导的氨基酸序列同源性为86.1%~100.0%。此外,5个分离物4个SMV基因CP、HC-Pro、P1和P3长度均为4 137个核苷酸,编码1 378个氨基酸。分析结果显示,5个分离物之间的核苷酸及氨基酸的同源性分别为92.6%~99.3%和95.1%~99.2%。根据系统进化树的分析,结合5个分离物在10个大豆鉴别寄主上的致病性反应,发现SMV的4个基因CP、HC-Pro、P1和P3与SMV的致病力及病样的来源地之间具有一定的关系。同时,这4个SMV基因能够将传统的SMV株系分离物与重组性分离物进行区分。 相似文献
7.
芝麻坏死花叶病毒(SNMV)部分cDNA合成及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
提取芝麻坏死花叶病毒RNA ,反转录合成cDNA ,对滞后重组质粒进行点杂交 ,得到阳性克隆并且测定序列。经计算机分析 ,获得 336 8个核苷酸 (nt)的序列。该序列含有一个完整的开放阅读框架 (ORF) ,该ORF由1134nt组成 ,推测编码 377个氨基酸 ,分子量为 4 0 .0 4 7× 10 3 道尔顿 (Da)。经比较它与Tombusviride科中Avreusvirus属石柑子潜隐病毒 (Pothoslatentvirus,PoLV)、Tombusvirus属病毒Cymbidiumringspotvirus(CRSV)外壳蛋白 (CP)氨基酸序列同源性分别为 4 0 .7%、4 0 .1% ,其起始氨基酸与Tombusvirus、Aureusvirus属另外的病毒CP起始氨基酸具有很高的保守性。根据这个完整ORF所编码蛋白的大小 ,与CRSV、PoLV病毒CP具一定的同源性 ,CP 5′端氨基酸的保守性 ,推测这个完整的ORF可能包含该病毒的外壳蛋白基因 ,并且这个病毒可能类似PoLV病毒 ,是Tombusviride科Aureusvirus属的一种新病毒 相似文献
8.
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),克隆了我国6个大豆花叶病毒(SMV)分离物的HC-Pro基因全长cDNA,并测定了其全序列,探索其与病毒致病性和交叉保护作用的关系.结果表明:HC-Pro基因全长为1371nt,编码的HC-Pro蛋白为457个氨基酸,其中包含与病毒移动有关的CCC基序、与蚜传相关的PTK基序等功能结构域.6个SMV分离物的HC-Pro基因核苷酸序列同源性为89.2%～99.9%,由此推导的氨基酸序列同源性为95.4%～99.8%,其中SMV分离物TS216和4434仅有1个碱基差异.将序列信息与6个SMV分离物在10个鉴别寄主上的症状反应以及分离物间的交叉保护作用进行综合分析发现, HC-Pro基因同源性高的SMV分离物在鉴别寄主上的致病性反应没有明显的相似性,而HC-Pro基因同源性高、亲缘关系近的部分SMV分离物之间交叉保护作用明显.结果证明6个SMV分离物的HC-Pro基因高度同源,同源性高低与其在鉴别寄主上的致病性反应没有明显联系,但同源性高、亲缘关系近的分离物间交叉保护作用可能较强. 相似文献
10.
花生条纹病毒（红安分离物）cp基因的克隆和序列分析 总被引：1，自引：1，他引：1
从湖北省红安县花生种传苗中得到花生条纹病毒（Peanut stripe virus, PStV）分离物（PStV-Hongan），提取感病叶片的总RNA，RT-PCR扩增了其外壳蛋白基因（cp），克隆至pGEM-Teasy载体，转化大肠杆菌并鉴定。阳性质粒序列测定结果表明，该cp含有861个核苷酸，编码分子量为32.4kDa的蛋白。该株系cp与PStV其它株系核苷酸序列同源性为94.6%~98.8%，氨基酸序列同源性为96.2%~99.3%。株系间cp核苷酸序列系统进化树结果表明，Hongan株系与中国其它株系亲缘关系较近，而与东南亚其它株系关系较远。 相似文献
11.
Chia (Salvia hispanica), a herbaceous plant of Lamiaceae family, has gained popularity due to its high concentrations of health-beneficial Omega-3 fatty acids. Plants showing different virus-like symptoms were observed in the principal chia production areas in Argentina. Some plants exhibited yellowing, mottled and blistering leaves, and others shortened internodes and leaf and stem deformation. The aim of this study was to identify the viruses infecting this crop. Forty symptomatic chia plants were collected from nine production fields in northeastern Argentina. The samples were tested for Alfalfa mosaic virus (AMV), Cowpea mild mottle virus (CPMMV), Cucumber mosaic virus (CMV), Tobacco mosaic virus (TMV) and Tospovirus group (I, II and III) by DAS-ELISA, for the genera Potyvirus by PTA-ELISA and for Begomovirus by PCR. CPMMV was detected in three plants with different kind of symptoms. In these plants, feather-like inclusions formed by virions were observed with transmission electron microscopy. ORF2 to ORF6 (2462 nucleotides) from the CPMMV viral genome was amplified by RT-PCR. Nucleotide (nt) sequence of the coat-protein gene (CP – ORF5) of the chia virus isolate was obtained and compared with 31 CPMMV sequences reported in GenBank. Results showed between 75.5% and 99.0% of nt identity, which is above the International Committee on Taxonomy of Viruses criteria for Carlavirus species differentiation. The phylogenetic analysis with the CP gene nt sequences revealed that the CPMMV chia isolate grouped with other CPMMV isolates from other plant species from Brazil, Ghana, India, Puerto Rico, Taiwan and USA, but were separated from four others from India. This is the first report of the presence of CPMMV in chia in the world. Although the other viruses were not detected in this work, it is possible that the different symptoms observed could be produced by a mixture of viruses because CPMMV was found in chia plants with different symptoms. 相似文献
12.
侵染红花的黄瓜花叶病毒的鉴定及株系初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
１９９５和１９９６年分别在武昌和云南红花病株上获得两个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＭＶ—ＣＹ。ＣＭＶ—ＣＷ引起红花黄化花叶、严重矮化，而ＣＭＶ—ＣＹ仅引起红花轻花叶。在供试２３种植物中，两个分离物侵染１６种植物。两个分离物均能被桃蚜以非持久性方式传播，不通过红花种传；体外稳定性状分别为：致死温度５５～６０℃和５０～６０℃，稀释限点１０－４～１０－５和１０－３～１０－４，体外存活期３ｄ和４ｄ；病毒颗粒球状，直径分别为２７．２ｎｍ和２８．０ｎｍ；外壳蛋白分子量分别为２７５００和２８１００Ｄ。ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＹ血清学性质和ＣＭＶ—ＣＡ相近。通过ＲＴ—ＰＣＲ扩增，获得ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＭＶ—ＣＹ预期的５３４ｂｐ病毒外壳蛋白基因ｃＤＮＡ片断。株系研究表明，参试的ＣＭＶ—ＣＷ、ＣＭＶ—ＣＹ和其他２个ＣＭＶ中国分离物在温度敏感实验和血清学性质上与ＣＭＶ—Ｄ株系一致或相近，属于ＣＭＶ亚组Ｉ。依据在一组寄主植物上的反应，将４个参试ＣＭＶ分离物作了初步株系划分。 相似文献
13.
采用RT-PCR技术对采自河北省农林科学研究院粮油作物研究所藁城堤上试验基地的12份花生叶片样品进行花生病毒病的检测,结果表明:从表现花叶和矮化症状的10份样品中检测到花生条纹病毒(peanut stripe virus,PStV),检出率高达90%,未检测到花生矮化病毒和黄瓜花叶病毒;对其中2个PStV分离物cp基因序列分析的结果表明,该cp全长864 bp。这两个分离物与已报道的PStV其他株系的cp核苷酸序列相似性分别为94.4%~99.2%和94.7%~99.7%,氨基酸相似性分别为95.5%~99.7%和95.8%~100.0%。PStV cp核苷酸序列构建的系统进化树中,这两个分离物与中国大陆其它分离物及美国分离物亲缘关系较近,而与中国台湾、泰国和越南分离物亲缘关系较远。 相似文献
14.
Summary The potato leafroll virus (PLRV) coat protein (CP) gene was directly cloned from the total RNA extracted from virus-infected
plants. First strand cDNA synthesis was not necessarily specific; it was equally efficient using either random or CP-specific
primers. The viral sequence encoding the coat protein was specifically amplified from the total population of cDNA molecules
by polymerase chain reaction (PCR), using specific primers bordering the CP gene. The unique amplified product thus obtained
was cloned blunt-end into the pT7T318U plasmid vector, and the authenticity of the cloned gene verified by sequence analysis.
This cloning strategy obviates the need for virus purification. Sequence comparison of the CP gene of the Italian isolate
and those of five other PLRV isolates revealed a close similarity to the three European and the Canadian isolates, and a more
distant relationship with the Australian one. 相似文献
15.
16.
本研究采用小RNA深度测序及RT-PCR检测技术鉴定海南省陵水县冬种番茄(圣女果)病株受到烟草花叶病毒属的番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)侵染。通过机械摩擦接种,将该病原病毒保存于本生烟植株上,命名为番茄斑驳花叶病毒海南分离物(ToMMV-HN)。采用RT-PCR分段扩增获得了该病毒分离物的全基因组序列。测序结果表明,该病毒分离物基因组全长6399 nt,含有4个开放阅读框,编码4种蛋白,与已报道的ToMMV9个分离物核苷酸和编码产物氨基酸序列相似性分别为98.0%～100%和99.2%～100%;与同属的番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄棕色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,TBRFV)和烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)代表分离物核苷酸序列相似性分别为84.7%、80.7%和79.0%。系统进化分析结果表明,ToMMV-HN与该病毒中国西藏和云南辣椒分离物亲缘关系最近,与美国加州和南卡州番茄分离物次之,与西班牙和巴西番茄分离物亲缘关系相对较远。本研究为我国番茄病毒病诊断和防控,尤其是抗病品种选育提供了基础资料。 相似文献
17.
根据在花生上的症状,将５个ＰＳｔＶ中国分离物划分为轻斑驳,斑块和坏死三个株系类型。在其它鉴别寄主上,５个ＰＳｔＶ上分离物有相似所症状。轻斑驳株系对花生主茎高度影响不明显,荚果减产２１．０％－３５．６％,种子带毒率高。而斑块型株系分别降低花生高度和荚果产量９．２％－１６．３％,和３０．３％－５４．４％,种子带毒率低。 相似文献
18.
采用RT-PCR方法从郑州地区感染甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)的玉米叶片中克隆病毒编码的辅助成分-蛋白酶基因(Helper component proteinase,HC-Pro),基因大小1380bp,编码460个氨基酸。序列比对和系统进化树分析表明,HC-Pro编码的氨基酸序列与北京、山东、河南、陕西、浙江、广东、西班牙、保加利亚和墨西哥等地的SCMV分离物中的氨基酸序列相似性在82%～92%,表明分离的SCMV可能是一个新的病毒分离物。利用半定量RT-PCR分析了HC-Pro在接种SCMV玉米自交系后的表达和积累的动态变化,结果表明,接种7d后,HC-Pro在心叶中积累到相当高的程度,9d后达到高峰,说明HC-Pro可能参与了SCMV在玉米植株中的系统侵染过程。 相似文献
19.
Sonia Boukhris-Bouhachem Fattouma Djilani-Khouadja Hatem Fakhfakh Laurent Glais Michel Tribodet Camille Kerlan 《Potato Research》2010,53(3):151-166
Surveys during five consecutive years in four main seed potato-growing areas of Tunisia revealed large differences in Potato virus Y (PVY) incidence. Infection rates at harvest ranged from up to 19% in Cap Bon and in Jendouba, to 31% in Kairouan and 48%
in Manouba. However, infection rates were very low across the country in 2003 (1–5%), except in Kairouan, and rather low in
2004 (4–10%). Secondary infections in plants growing from imported seed potatoes were assessed to be 1–6% depending on region
and year. Serological analysis of a first set of 90 samples collected in 2004–2005 revealed dominance of the PVYN group (90% of the total number of PVY positives). A second set of 44 isolates from samples collected in 2006 was further
analyzed with a combination of serotyping, indexing on tobacco, and RT-PCR tests targeting four genomic regions (5′Ntr/P1,
HcPro/P3, CI/NIa, CP). Thirty-five of these 44 isolates were typical PVYNTN isolates, with three recombination junctions in HcPro/P3, CI/NIa, and CP regions, respectively, whereas no recombination
junction was identified in the genome of five isolates belonging to the PVYN group. One additional recombinant PVYNTN isolate was recovered from a mixed infection with a PVYO isolate. Only three PVYO isolates were recovered from the samples analyzed. 相似文献
20.
双重RT-PCR方法检测花生条纹病毒和黄瓜花叶病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
为了建立花生条纹病毒(PStV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的双重RT-PCR检测方法,根据Gen-Bank中登陆的PStV和CMV的核苷酸保守序列分别设计特异性引物,以感病叶片总RNA反转录物为模板,建立了双重RT-PCR反应体系,并对双重RT-PCR的特异性和灵敏性进行了验证。结果表明:此方法能够特异地从感染PStV和CMV的样品中扩增出PStV(300bp)和CMV(1054bp)2个条带,与实验设计相符;扩增产物测序结果表明,PStV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为93%～99%,CMV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为90%～99%,证明了检测结果的准确性;该方法特异性良好,灵敏性与单一扩增相同,能够特异、灵敏、准确地检测花生CMV和PStV。 相似文献