共查询到17条相似文献，搜索用时 671 毫秒
1.
人参基因组DNA的提取及RAPD—PCR反应条件的优化 总被引：1，自引：1，他引：0
探讨了人参基因组DNA提取方法及RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,用改良的CTAB方法提取的DNA均达到了RAPD—PCR分析的要求;优化的RAPD—PCR反应条件为：在25μLRAPD—PCR反应体系中,模板DNA20ng,dNTP200μmol／L,MgCl2 1．5mmol／L,10×Buffer2．5μL,引物浓度0．4pmol／L,TaqDNA聚合酶1．0U,其余以ddH20定容至25μL．PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃45S,40℃退火1min,72℃1min,共40个循环;最后在72℃延伸5min． 相似文献
2.
蜜蜂DNA提取纯化与RAPD反应体系的建立 总被引：5，自引：9，他引：5
以意大利蜜蜂为材料，研究了蜜蜂DNA的提取以及对RAPD分析的影响因素，包括模板浓度、Mg^2 、dNTP和引物，建立了适于蜜蜂RAPD分析的PCR反应体系，即20μL反应体系中，包括10mmol／L Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L KCl、20～60ng DNA、3．0mol／L MgCl2、0．2mmol／L dNTP、0．5μmol／L随机引物和1．5unit Taq聚合酶。扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环：最后在72℃延伸10min． 相似文献
3.
长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化 总被引：2，自引：1，他引：1
采用改良的CTAB法提取林下参的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析．筛选出的林下参RAPD反应的最佳体系为20“L,反应体系中包括模板DNA20ng,引物20pmol,dNTPs0．1875mmol／L,TaqDNA聚合酶1．5U,Mg^2＋2．0mmol／L,10×Reaction Buffer2．0mmol／L,其余部分用无菌超纯水补充．PCR扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环,72℃最终延伸7min．应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为通过分子标记获得丰富的林下参遗传信息奠定了基础． 相似文献
4.
菜心ISSR-PCR反应体系的优化 总被引：2，自引：0，他引：2
以菜心（Brassica campestris L．ssp．Chinensis Var．utilis Tssen．et Lee．）为材料,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素如Mg^2＋、Taq DNA聚合酶、dNTPs、Primer、模版DNA的浓度及引物退火温度、延伸时间和循环次数进行了探讨,确立了适合菜心ISSR-PCR分析的最佳反应体系和PCR扩增参数：在25pL反应体系中含10×buffer 2．5μL,2．0mmol／LMg^2＋,0．5U Taq DNA聚合酶,0．2mmol／LdNTPs,0．5μmol／L引物,30ng模板DNA．PCR扩增程序：94℃预变性3min;94℃变性1min,49．7～56℃退火（退火温度随引物不同而定）1min,72℃延伸45s,40个循环;72℃延伸5min． 相似文献
5.
北五味子RAPD-PCR反应条件优化 总被引：2，自引：1，他引：1
以采自吉林省汪清地区野生北五味子叶片为材料,提取其基因组DNA,并以此为模板进行北五味子RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,PCR反应混合液为：25μLPCR反应体系中加入20ng模板DNA,200μmol／LdNTPs,0．3μmol／L引物,2．0mmol／LMg^2＋,1UTaqDNA聚合酶,2．5μL 10×Buffer;PCR反应程序为：94℃预变性5min后,在94℃变性1rain,40℃退火1min,72℃延伸2min,共40个循环后,在72℃下最后延伸5min时,在不同引物中均扩增出清晰而稳定的DNA电泳谱带． 相似文献
6.
荸荠基因组DNA的提取及RAPD反应体系的建立 总被引：4，自引：1，他引：3
以荸荠叶状茎为试验材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其RAPD反应体系进行优化,建立了荸荠的RAPD—PCR优化反应体系和程序。结果表明,提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1．8～2．0之间,DNA无降解现象,完全可以满足RAPD—PCR扩增要求。建立了荸荠RAPD反应体系：总体积为25μl,各有关成分的最佳浓度分别为25mmol／L Mg^2＋,1．0UTaqDNA聚合酶,0．2mmol／L dNTPs,1μmol／μl引物,1．5ng／μl DNA模板。PCR反应程序为：94％预变性3min;94℃变性1min,37℃退火30s,72℃延伸60s,40个循环;最后72％延伸10min。 相似文献
7.
山羊RAPD反应条件的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
以贵州山羊为材料,研究了MgCl2浓度,引物浓度,d.NTP浓度,模板DNA用量,TaqDNA聚合酶用量对RAPD反应的影响,建立了一套适合山羊的最佳RAPD反应体系。反应总何种为25μl,MgCl2浓度2.0mmol/L,引物为18.75ng,dNTP浓度0.32mmol/L,模板DNA为15ng.TaqDNA聚合酶为2U,PCR反应程序为：94℃ 3min.38℃ 1min.72℃ 2min,40Cycles;72℃ 10min。 相似文献
8.
以假臭草叶片为材料,对影响其随机扩增多态DNA（RAPD）反应的各因素进行优化．建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序,即在10μL反应体系中,5ng（／10μL）模板DNA,1．0μmol／L随机引物F15,150μmol／LdNTPs,2．0mmol／LMg^2＋,1．0UTaqDNA聚合酶;扩增程序为95℃预变性4min,95℃变性40S,36℃退火40S,72℃延伸1min,10个循环,后94℃变性30s,35℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环,72℃延伸5min,4℃保温。 相似文献
9.
在研究白鲢 /团头鲂遗传图谱时 ,对 RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、d NTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在些基础上建立了适于实验室 RAPD研究的最佳反应体系 :2 5μL反应体系中 ,含 1 0mmol/L Tris-HCl ( p H 8.0 )、 1 0 mmol/L KCl、 8mmol/L ( NH4) 2 SO4、 2 mmol/L Mg Cl2 、 0 .0 5%NP-4 0、 0 .2 mmol/Ld NTP、 1 5ng引物、 2 0 ng模板、 1 .5U Taq DNA聚合酶。热循环参数为 :95℃预变性 3 min,然后 94℃变性 1 min,3 6℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,共 4 0个循环 ,最后 72℃延伸 6min。 相似文献
10.
天麻PCR反应体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对Mg2+,dNTP,随机引物、模板DNA,TaqDNA聚合酶浓度等反应参数的系统研究,建立了天麻RAPD分析体系。该体系反应总体积20 μL, 其中MgCl2 2.5 mmol/L, dNTP 0.25 mmol/L,模板20 ng,随机引物0.3 μmol/L,Taq酶1.5 U. 反应程序为94 ℃预变性5 min,94 ℃变性35 s,36 ℃退火35 s,72 ℃延伸1 min,40个循环,最后72 ℃延伸5 min. 结果表明该体系具有良好的稳定性和重复性,可应用于天麻的演化、系统分类、品种鉴定等研究。 相似文献
11.
苦楝RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存. 相似文献
12.
人参黑斑病菌RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
采用改良的CTAB法提取人参黑斑病菌的基因组DNA,建立人参黑斑病菌RAPD反应的体系.最佳体系容积为25μL,其中包括10×Taq配套缓冲液2.5μL,模板DNA 20 ng/μL,引物15 pmol/L,dNTP 150μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,其余部分用DW补充.PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃延伸7 min. 相似文献
13.
采用均匀设计,对引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4个因素分别设置5个水平,对文冠果ISSR-PCR反应体系进行优化,在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测,构建了文冠果ISSR-PCR优化反应体系,在20μL ISSR-PCR反应体系中,各因素的最佳浓度分别为:2×PCR buffer、0.2mmol·L-1 dNTP、0.3μmol·L-1引物、2.5mmol·L-1 Mg2+和0.4UTaqDNA聚合酶,进一步对扩增程序中的循环次数和退火温度,以及ISSR引物进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性5min,接着进行40个循环:94℃变性35s,52~56℃退火35s,72℃延伸45s;循环结束后,72℃延伸10min。 相似文献
14.
正交设计优化茄子SSR反应体系 总被引：2，自引：0，他引：2
以茄子基因组DNA为模板,利用正交设计方法对茄子SSR反应体系中的Mg^2＋、模板DNA、Taq聚合酶、dNTP、引物5个因素进行了优化,同时对反应程序中的退火温度及循环次数进行筛选。结果确定了茄子10μL体积SSR反应体系的最优条件为：Buffer为1μL,Mg^2＋为2．25mmol·L^-1,dNTP为400μmol·L^-1,上下游引物各为39.60ng,Taq聚合酶为0．75U,DNA约为100ng。PCR程序为94℃预变性2min：然后进行35个循环的94℃变性30s,52℃复性30s,72℃延伸45s;72℃延伸8min后4℃保存。 相似文献
15.
为优化兜兰ITS-PCR反应体系,以兜兰属植物为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,并采用单因子试验设计,对影响兜兰DNA ITS-PCR扩增反应的主要因素即Taq DNA聚合酶的用量、Mg2-浓度、dNTP浓度、引物退火温度、模板DNA用量和引物浓度等进行优化研究,建立兜兰最佳ITS扩增反应体系.结果表明:最佳反应体系为25 μL体系中,添加10×PCR buffer 2.5 μL、Taq DNA酶1.25U、Mg2+ 1.5mmol/L、dNTP 0.15 mmol/L、引物0.6μmol/L和模板DNA 40 ng,反应程序为94℃预变性4 min,1个循环;94℃变性30 s,54℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸7 min后终止反应,4℃保存.利用此反应体系可得到预期大小的ITS基因片段. 相似文献
16.
以‘密本’南瓜作为筛选体系的材料,通过单因素试验对南瓜20μL SRAP-PCR扩增体系的Mg^2＋、dNTP、 Taq酶、引物及DNA浓度和扩增程序的退火温度与循环次数进行优化,筛选出各组分的最佳浓度、最佳的退火温度和最佳循环次数。试验结果确立南瓜最佳的20μL SRAP体系为：0.2 mmol · L ^-1 dNTP ,1.5 U Taq酶,80 ng DNA ,0.16μmol·L^ -1的单条引物,Mg^2＋1.5 mmol·L^ -1,2μL 10＆#215;Buffer ;最佳扩增程序为：94℃预变性5min;94℃1 min ,35℃1 min ,72℃1 min ,5个循环;94℃1 min ,52℃1 min ,72℃1 min 35个循环;最后72℃延伸10 min。选用17个南瓜品种对确立扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富、特异性强、重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于南瓜的SRAP分子标记。 相似文献
17.
银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化 总被引：2，自引：0，他引：2
为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应（ISSR-PCR）扩增反应体系的因素进行优化,采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化筛选优化后的反应条件：Taq酶0．3μg,2μL10×Buffer（含15mmol·L^-1 MgCl2）,模板DNA40ng,dNTP0．2mmol·L^-1,引物0．5μmol·L^-1,Mg^2＋,5nmol·L^-1。PCR扩增程序：94℃变性5min,然后进行38个循环：94℃变性30S,48～53℃（根据引物而定）退火30s,72℃延伸1min;最后72℃延伸10min,4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。图6表1参19 相似文献