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鱼类RAPD的影响因素及其最优反应体系的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
在研究白鲢／团头鲂遗传图谱时,对ＲＡＰＤ反应中的模板浓度,引物浓度、ｄＮＴＰｓ浓度,镁离子浓度等反应结果的因素进行了系统分析,并在此基础上建立了适于实验室ＲＡＰＤ研究的最佳反应体系：２５μＬ反应体系中,含１０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）,１０ｍｍｏｌ／Ｌ 、８ｍｍｏｌ／Ｌ （ＮＨ４）２ＳＯ４,２ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２、０．０５％ ＮＰ－４０、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ,１５ｎｇ 相似文献
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桃属植物随机扩增多态性DNA分析的最适反应条件 总被引：6，自引：3，他引：3
以Ｙｕｕｚｏｒａ 桃为试材对桃属植物随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 分析的最佳反应条件进行了研究．结果表明桃属植物ＲＡＰＤ分析的最佳反应条件为：总反应混合溶液５ｕＬ 时,添加模板ＤＮＡ１０ ～３０ ｎｇ,Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶１ ～１ ．５ 个单位,随机引物１０ ～２０ ｐｍｏｌ,ｄＮＴＰ１００ ～２００ ｕＭ,ＭｇＣｌ２ ２ ．０ ～３ ．０ ｍ Ｍ 及５ ｕＬ１０ 倍反应缓冲液条件下扩增５０ ～５５ 个循环,能够获得具有良好的稳定性和重复性的ＤＮＡ扩增产物．ＰＣＲ反应溶液的各组成因素如低于最适浓度范围时会导致扩增带数的减少甚至无带,如高于最适反应浓度范围,则会出现带的弥散或缺失． 相似文献
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家兔RAPD分析反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
《山东农业科学》1999,(5):15-17
以家兔的基因组ＤＮＡ 为模板,研究影响家兔ＲＡＰＤ 扩增的因素。实验结果表明,Ｔａｑ酶、随机引物和Ｍｇ２ ＋ 浓度及模板ＤＮＡ 的纯度对ＲＡＰＤ 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔ＲＡＰＤ 分析的反应体系：反应体积为２０μｌ,其中含有１ ×扩增缓冲液,２ ．０ｍ ｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ ,０ ．１ｍ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０－２μｍｏｌ／Ｌ 随机引物,１ ．５ＵＴａｑ 酶,９０ｎｇ 模板ＤＮＡ 相似文献
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家猪随机扩增多态DNA最佳反应体系的探讨 总被引：6，自引：1，他引：5
在研究江西方猪种的遗传多样性及其系统分类时,对模板浓度和纯度,引物种类和浓度、ｄＮＴＰ浓度,镁离子浓度,温度转换时间及双引物扩增等影响ＲＡＰＤ分析的因素进行了系统的探讨,在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳ＲＡＰＤ技术体系：２０μＬ反应体系中,含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ,ｐＨ８．３,５０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ,２．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２,０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０．４５μｍｏｌ／Ｌ随 相似文献
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苹果PAPD反应体系的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对苹果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增体系各参数进行筛选比较,建立的最佳反应体系为：模板ＤＮＡ １．０ｍｇ／Ｌ,引物１．５ｍｇ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１ｎｏｌ／Ｌ（Ｌ．ｎｉｎ）,Ｍｇ＾２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰｓ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ。 相似文献
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芥菜随机扩增多态性DNA最佳参数的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
对影响芥菜聚合酶链式反应主要因子的优化，建立了芥菜聚合酶链式反应体系。即Ｍｇ２＋２．０ｍＭ，ＴａｇＤＮＡ聚合酶１２．５ｎｍｏｌ／Ｓ，变性温度９４℃，退火温度３８℃，预变性９４℃，５ｍｉｎ；每个循环：９４℃，５０ｓ，３８℃，７０ｓ，７２℃，１２０ｓ，４０个循环后，于７２℃下延伸１０ｍｉｎ。 相似文献
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CaCl2,AsA和GSH对冷害低温下茄子果实氧化胁迫的抑制作用 总被引：3，自引：0，他引：3
余挺 《江西农业大学学报》1997,19(4):66-70
ＣａＣｌ２（２％）处理可显著提高冷害低温（２℃）下茄子果实组织中ＳＯＤ和ＣＡＴ活性（Ｐ＜０．０１），延缓ＰＯＤ活性高峰的出现，降低ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０１），并明显减轻了果实冷害的程度；ＡｓＡ和ＧＳＨ处理可提高ＣＡＴ活性，降低ＰＯＤ活性和ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０５），但对ＳＯＤ活性无显著影响，对果实冷害的抑制效果也不如ＣａＣｌ２处理明显。结果表明：ＣａＣｌ２及ＡｓＡ和ＧＳＨ对茄子果实冷害的抑制作用与其提高了组织的抗氧化胁迫能力有关。 相似文献
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花生幼苗内精氨酸脱羧酶的初步研究 总被引：2，自引：0，他引：2
花生体内控制多胺生物合成的主要酶是ＡＤＣ，主要定位于代谢活跃的分生组织内。部分纯化（１３倍）的酶最适底物是Ｌ－Ａｒｇ，Ｋｍ值和Ｖｍａｘ依次为０．５６ｍｍｏｌ／Ｌ、０．６６μｌＣＯ２／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ．ｍｉｎ。反应最适ｐＨ和温度为８￣８．５和４０￣４５℃。该酶对热、乙醇、脲稳定性差。０．８ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＬＰ（磷酸吡哆醛）可提高酶活性２１％，ＤＴＴ（二硫苏糖醇）、ＭＥ（颈基乙醇）提高酶的稳定性， 相似文献
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钙对水分胁迫条件下玉米幼苗内源激素含量的影响 总被引：9，自引：1，他引：9
利用─１．０ＭＰａ的ＰＥＧ—６０００溶液模拟水分胁迫，研究了１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＣａＣｌ２。溶液（以纯Ｃａ２＋计）浸种对玉米幼苗内源激素含量的影响。结果表明，随着水分胁迫时间的延长，未用钙处理的玉米幼苗生长素（ＩＡＡ）含量从２２５ｎｇ／ｇ·ＤＷ降至１４２ｎｇ／ｇ·ＤＷ，ＧＡ３含量从２２３降至１３２，ｉｐＡ含量从１８９降至８３，而ＡＢＡ含量则从６５５升至１８７５．钙处理可以促进ＩＡＡ、ＧＡ３和ｉｐＡ含量的下降，但抑制ＡＢＡ含量的升高。钙还可抑制膜相对透性的增大及叶片相对含水量的下降，表明钙可以提高植物的抗旱性，且植物抗旱性的提高与内源激素含量的变化有一定关系。 相似文献
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[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法,并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系,为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。[方法]采用改进的CTAB法,成功地提取了火棘基因组DNA,并对RAPD反应体系中的Taxi酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计,从中筛选出最佳的优化条件。[结果]电泳结果显示,DNA无降解,杂质少。DNA浓度较高约为500ng／μl。并以此DNA为模板,成功地建立了RAPD稳定的反应体系：总体积25山,包括25ng的DNA,1×buffer,2．3mmol／LMgCl2,1．0μmol／L引物,O．15mmol／LdNTPs和2．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在94℃下变性4min,然后在94℃下变性40s,36．8℃下复性50s,72℃下延伸70s,反应40个循环,最后72℃延伸4min。[结论]改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA,利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系,可以获得较为稳定、可靠的扩增产物。该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础。 相似文献
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对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究。结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带。优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0μl。10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8μl。PCR扩增条件为:97℃预变性7 m in,94℃1 m in,36℃退火1 m in,72℃2 m in,45个循环后,在72℃延伸10 m in结束,4℃保存。PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测。点样后,以2~3 V/cm电压降稳压电泳3.0~3.5 h。 相似文献
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为了建立小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,寻找小麦冷暖型基因差异,降低试验成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5 min,94℃变性45 s,38℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,72℃延伸10 min,4℃保存)下,对冷暖型小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA 20 ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1 U,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,ddH2O 12μl,随机引物10 ng。 相似文献
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枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。 相似文献
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以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq... 相似文献
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[目的]建立适合荷包猪RAPD-PCR反应的最佳反应体系。[方法]以荷包猪为试验材料,以MgCl2浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量及退火温度为影响因子,在保持其他影响因子一致的条件下,变化单一因子,筛选最优参数,研究各影响因子对RAPD-PCR反应的影响。[结果]最佳反应体系的总体积为20.0μl,MgCl2浓度为2.5μmol/L、引物浓度2.0μmol/L、dNTP浓度400.0μmol/L、模板DNA为100 ng/μl、TaqDNA聚合酶为1.0 U。PCR反应程序:94℃预变性2 min(94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,循环40次),72℃延伸5 min。此反应体系所扩增出来的结果比较稳定,带型清晰且亮度适中。[结论]该研究为应用RAPD技术对荷包猪作进一步的遗传分析奠定了基础。 相似文献
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南瓜RAPD分析体系的优化* 总被引：5，自引：0，他引：5
为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性，对MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜 RAPD反应体系为25 μL反应液中：10×反应 buffer（100 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L KCl, 80 mmol/L (NH4)2SO4 ,pH 9.0,NP-40）2.5 μL, 3 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dNTPs，Taq酶l.0 U,引物15 ng/μL ，DNA模板10 ng/μL 。本研究最终确立的PCR反应程序为: 94 ℃预变性5 min,然后按94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s，进行40个循环,最后72 ℃延伸5 min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。 相似文献
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以苎麻属植物为材料,研究苎麻属植物RAPD分析中的主要影响因素,采用差异性材料DNA为模板和双重正交优化设计的方法。建立苎麻属植物RAPD PCR反应体系：25μL反应体系中含Taq DNA聚合酶1.5U,Mg2+2.1 mmol/L,dNTP 0.2μmol/L,Primer 0.75μmol/L,模板DNA 150ng。最佳扩增程序：先94℃变性4min,再94℃变性45s,37℃复性45s,72℃延伸90s共36个循环,最后 72℃延伸5min,4℃保存。经检验,该体系能适应苎麻属多个种植物的RAPD PCR的正常扩增。 相似文献
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茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立 总被引：7，自引：0，他引：7
DNA的提取质量是决定RAPD分析成功与否的关键。茶树幼嫩新梢中含有大量的茶多酚等次生物质，采用磨样对添加杭酚氧化褐变的物质，在细胞核裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质，而后再用改进的DNA微量快速提取法-SDS法分别从不同茶树品种新梢中提取和纯化基因组DNA，所得到的DNA样品适宜于RAPD反应，通过对茶树RAPD分析中影响扩增结果的因素的研究。建立了茶树RAPD的最适反应系统，即在25ul反应体系中，含20-50ng模板DNA，1.5mmol/1MgCl2，各0.1mmol/1DNTPs,0.2umol/L引物和1UTaqDNA聚合酶；扩增程序为：95℃预变性300s,94℃变性60s,35℃退火60s，72℃延伸120s，共进行40个循环，最后72℃延伸600s，这样可以取得较好的扩增效果。 相似文献
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[目的]旨在筛选出茶薪菇RAPD反应体系的最佳条件。[方法]采用单因素试验,对RAPD反应体系所需的Mg2+浓度、模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度以及退火温度进行初步筛选。[结果]茶薪菇RAPD扩增的最佳反应体系为:2.5μl Buffer,2.0mmol/L Mg2+,75 ng DNA,0.5μmol/LPrimer,150μmol/LdNTPs,2.0 UTaq酶。反应程序为:92℃预变性5 min,(92℃1 min,35.5℃1 min,72℃延伸2 min)35个循环,72℃10 min。[结论]为茶薪菇RAPD分析及其亲缘关系、遗传多样性研究提供了参考依据。 相似文献