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小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立 总被引：1，自引：1，他引：1
【目的】通过表达羊PrPc核心片段、单抗制备，最后建立免疫组织化学检测羊痒病方法。【方法】用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA， 并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a（+）上，转化至E.coli BL21，IPTG诱导融合表达。以纯化的重组小尾寒羊PrPc核心片段免疫PrPc基因敲除小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，制备羊核心片段单克隆抗体。【结果】通过上述方法，得到相对分子质量约为35 kD的重组小尾寒羊PrPc核心片段，筛选出六株能稳定分泌针对小尾寒羊PrPc核心片段特异单抗的杂交瘤细胞株。免疫组化试验表明,其中4株可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrPsc，经5次重复试验表明：所制备单抗与对照单抗F89结果完全一致。【结论】利用原核表达，单抗制备等技术制备出PrP特异性单克隆抗体，用笔者自己研制的单抗作为核心试剂初步建立了羊痒病免疫组化检测方法。 相似文献
2.
以牛、羊重组朊蛋白(PrP)、正常牛、羊的脑组织匀浆、牛海绵状脑病(BSE)及羊痒病阳性的脑组织匀浆及切片为抗原,测定9株抗朊蛋白单克隆抗体的ELISA、免疫印迹及免疫组化等免疫学反应特性.结果表明:5株单抗可用于BSE及羊痒病的ELISA、免疫印迹检测;3株单抗可用于BSE及羊痒病的免疫组化检测;1株单抗在免疫印迹试验中只与羊痒病PrP~(Sc)的核心片段反应,结合该株单抗所识别的抗原表位PrP第78～93氨基酸(aa),证实BSE与羊痒病PrP~(Sc)的蛋白酶K消化位点存在差异. 相似文献
3.
为明确将牛PrPc重组蛋白接种金黄地鼠脑内是否引起异常临床表现、脑组织病理学变化及对其mRNA表达产生影响,为进一步研究PrPc蛋白与异构体PrPsc 的结构转换机制提供基础数据,将纯化的牛PrPc重组蛋白磷酸盐缓冲液制剂进行地鼠颅内接种,约3 μL/只,对照接种磷酸盐缓冲液（PBS）;102 d后取出脑组织：一部分福尔马林固定后进行常规H.E.染色观察, 另一部分提取脑组织总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR检测.结果表明：处理未见临床异常表现;大脑、小脑、脑干组织病理学检测未见海绵状空泡变性和淀粉样斑;大脑PrPc mRNA表达水平无显著性差异.上述结果表明,用PrPc重组蛋白接种,在检测时间102 d内未引起金黄地鼠行为和脑组织的异常改变. 相似文献
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单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。 相似文献
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抗犬细小病毒的单克隆抗体的制备 总被引：3，自引：0，他引：3
CPV－YZ株的细胞培养液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为免疫原免疫BALB／C小鼠，应用杂交瘤技术筛选出8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为F5G10、3F11F4、F11G6、6C5C2、6E4G3、6C2B11、F11D6、3D9C4株，各株单抗均为IgG型；中和试验表明：F11G6、3D9C4、6E4G3、6C5B114株单抗有中和作用，Dot-ELISA试验证明了8株单抗仅针对病毒抗原决定簇的空间结构。 相似文献
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免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗 总被引：6，自引：0，他引：6
刘见 《上海交通大学学报(农业科学版)》2004,22(4):350-354
试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。 相似文献
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《浙江农业科学》2015,(11)
分别采用多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)制备检测喹诺酮类药物的免疫胶体金试剂盒检测杭州地区市售禽蛋样品128份,用多抗试剂盒检出24份阳性样品(占总样品量的18.8%),其中14份为强阳性样品(占总样品量的10.9%);用单抗试剂盒检出42份阳性样品(占总样品量的32.8%),其中24份为强阳性样品(占总样品量的18.8%)。所有样品再用液相-串联质谱(LC-MS/MS)法检测氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星等12种喹诺酮类药物残留量,检测结果为喹诺酮类残留总量100μg·kg-1的样品14份、20~100μg·kg-1的样品10份、2.0~20μg·kg-1的样品16份、0.2~2.0μg·kg-1的样品16份,2种不同的免疫胶体金试剂盒快速检测结果与质谱法的符合率分别为100%和95%。试验表明,胶体金法和质谱法各有优势且结果符合性好。 相似文献
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CPV YZ株的细胞培养液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为免疫原免疫BALB/C小鼠 ,应用杂交瘤技术筛选出 8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,分别命名为F5G10、3F11F4、F11G6、6C5C2、6E4G3、6C2B11、F11D6、3D9C4株 ,各株单抗均为IgG型 ;中和试验表明 :F11G6、3D9C4、6E4G3、6C5B114株单抗有中和作用 ,Dot ELISA试验证明了 8株单抗仅针对病毒抗原决定簇的空间结构。 相似文献
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杯伞(Clitocybe sp.)培养条件Box-Behnken法优化研究 总被引：6，自引：1，他引：6
在Plackett-Burman试验设计结果基础上，采用Box-Behnken响应曲面法(response surface methodology, RSM)对影响杯伞(Clitocybe sp.) AS 5.112发酵胞外多糖与生长的关键培养条件(培养温度、时间和装液量)进行了探讨。结果表明，在培养温度为24.3～25.8℃、时间为9.7～10.2 d和装液量为76.0～90.0 ml条件下，每毫升发酵醪可获得 1 253.00 ?g胞外多糖；而在培养温度为23.8～24.8℃、时间为9.6～10.3 d、装液量为71.0～98.0 ml范围内，每毫升发酵醪可获得8.32 mg菌丝生长量。通过对胞外多糖曲面方程和菌丝干重二次多项回归方程解逆矩阵得知，在培养温度、时间和装液量分别为25.0℃、9.9 d和83.4 ml时，杯伞AS 5.112胞外多糖的最大预测值为1265.45 ?g·ml-1发酵醪，在上述自变量分别为24.4℃、9.9 d和87.1 ml时，菌丝浓度可达8.50 mg·ml-1发酵醪；在24.5℃、9.9 d和84.7 ml的条件下，每毫升发酵醪可同时获得1 261.60 ?g胞外多糖和8.47 mg菌丝量。验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间具有较好的拟合度。 相似文献
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建立了软荚菜豆花叶病的病情分级标准和抗性评价标准。对昆明地区生产上主要应用的13个软荚菜豆品种对花叶病抗性进行了鉴定。结果为:在13个品种中有2个高抗品种、4个中抗品种,其余品种为感、中感或高感品种。在13个品种中,电镜观察到其中11个品种叶片内含有线状病毒粒子。 相似文献
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Chelex-100快速提取动物源饲料DNA方法的建立 总被引：9，自引：0，他引：9
为防止疯牛病疫区反刍动物源性饲料传入我国,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定。本文建立了一种利用Chelex—100快速提取动物源性饲料DNA的方法,用于反刍动物源性饲料的PCR扩增分析。结果显示该方法与GuSCN法、SDS法同样理想,从而实现了对进境饲料的快速检定的要求。该方法检测灵敏度达到牛成分含量为0．1％的水平,具有简单、快捷、灵敏度高的优点。 相似文献
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This paper examines the U.S. meat demand impacts of the announced outbreaks of bovine spongiform encephalopathy(BSE) and avian influenza(AI). Findings indicate that beef and chicken demand was negatively affected by BSE and AI disease outbreaks. Specifically, in the short run, U.S. consumers shift demand due to both outbreaks but more so due to domestic disease outbreaks than for outbreaks occurring overseas-the impact of U.S. AI outbreaks is about 0.5% for beef and the impact of U.S. BSE cases is around –0.42% for beef and 0.4% for pork, respectively. Regarding the BSE shock on meat demand, there is a high rate of beef demand adjusted from disturbance to the long-run equilibrium and a lower adjustment rate for chicken demand because of the repeated outbreaks of AI worldwide. In the long run, information related to severe, persistently recurring overseas animal disease outbreaks changes U.S. consumers' meat consumption patterns. Although effects of animal diseases on U.S. meat demand were statistically significant, the magnitudes were small-the impact of WHO reported human death numbers for AI is 0.005% for beef, –0.002% for pork, and –0.006% for chicken and the impact of U.S. BSE cases is 1.1% for pork and –0.7% for chicken. 相似文献
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论述了疯牛病的发病历史与现状、疯牛病的临床症状与检测、朊蛋白与蛋白假说和疯牛病的致病机理等。此外,还讨论了治愈疯牛病的可能性。 相似文献
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毛竹林分结构与毛竹枯梢病的关系 总被引：6，自引：0，他引：6
据福建省 2 32块毛竹枯梢病 ( Ceratosphaeria phyllostachydis Zhang)林分病情样地调查分析 ,表明病害发生发展与林分结构关系密切 .并由 96块有代表性的样地推导出毛竹枯梢病感病指数与林分结构中的林龄、胸径、整齐度、均匀度、林分组成以及当年新竹占各度竹比例等因子的数学模型为 :Y=43.5 2 64- 1 6.3338C11- 1 1 .6346C12 - 8.1 5 4 6C2 1- 3.8438C2 2 - 8.40 96C3 1-3.7837C3 2 - 5 .5 81 5 C41- 3.774C42 - 0 .1 1 1 1 C51+ 1 .432 8C52 - 2 .1 5 1 9C61- 2 .6970 C62 ,其偏相关系数为 :0 .75 97、 0 .4668、 0 .5 4 78、 0 .2 780、 0 .1 5 2 9、 0 .2 2 4 2 ,复相关系数为 0 .91 66.用此模型对福建省 1 989～ 1 997年设置的 5 6块样地的应用判别准确率为 70 .3% .提出该病害林分病情辅助测报技术和以改善林分结构为主的防治技术 相似文献
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把在不同水平NH4Cl、NaNO3处理下分解6个月后的杉木桩化感物质应用于杉木种子发芽试验,并进行生物检测,结果表明：杉木桩弱极性化感物质对杉木种子胚根长产生促进作用,对绝对发芽率、绝对发芽势、胚轴长、鲜物质量和干物质量则表现出抑制作用;而杉木桩极性化感物质对杉木种子绝对发芽率、胚根长和干物质量表现出促进作用,对绝对发芽势、胚轴长和鲜物质量表现出抑制作用。5个处理相比,加NH4Cl分解的杉木桩化感物质对杉木种子的化感促进效应大于加NaNO3分解的,其中加100gNH4Cl处理对杉木种子发芽的化感促进效应最大。 相似文献
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小麦白粉病潜在生防菌的筛选与控病特性研究 总被引：10，自引：0，他引：10
2001-2004年从山东，河南等11省采集土样78份，通过稀释平板法共分离菌株282株，其中真菌138株，细菌72株，放线菌61株。通过小麦白粉菌的孢子萌发抑制试验和小麦离体叶病害抑制试验的初步筛选，共得到12株防效较好的菌种。将所筛选的12个菌株进行温室盆栽苗病害控制试验。结果表明：细菌菌种PE4、C26、C27与真菌菌种P17-1对小麦白粉病抑制能力较强。防治效果分别达74．96％、70．1％、67．33％和64．71％。并对不同处理的小麦株高和千粒重进行方差分析。其中菌株PE4、C26、GE11处理的小麦千粒重分别为43．57，42．21，41．57g，与对照千粒重（29．22g）差异极显著。 相似文献